目的死亡時間推斷是法醫(yī)病理學(xué)實踐的重點。運用mRNA定量技術(shù)進行死亡時間推斷已成為目前研究的熱點。在進行mRNA指標(biāo)挑選時,為了排除其他干擾因素的影響,實驗數(shù)據(jù)必須要經(jīng)過內(nèi)參指標(biāo)的標(biāo)準(zhǔn)化。因此,內(nèi)參基因的選擇對實驗結(jié)果具有重要影響。方法 SD大鼠頸椎脫臼處死后置于4℃、15℃、25℃、35℃環(huán)境溫度下,在死后0h、6h、12h、18h、24h五個時間點取骨骼肌組織。利用實時熒光定量PCR技術(shù)測定常用內(nèi)參基因Ct值,并使用三種內(nèi)參評估軟件（geNorm、NormFinder、BestKeeper）綜合分析內(nèi)參穩(wěn)定性。結(jié)論綜合三種內(nèi)參評估軟件結(jié)果,在低溫條件下,RPS29、RPL13是較合適的內(nèi)參,而在高溫條件下,5SrRNA、18SrRNA是較合適的內(nèi)參。在35℃時,GAPDH、HPRT、PGK1、UBC、B2M與死亡時間有明顯相關(guān)性。 

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【文章目錄】：
1 材料和方法
    1.1 動物樣本
    1.2 總RNA提取及反轉(zhuǎn)錄
    1.3 內(nèi)參及引物挑選
    1.4 實時熒光定量PCR
    1.5 統(tǒng)計學(xué)分析
2 實驗結(jié)果
    2.1 RNA純度及濃度
    2.2 內(nèi)參基因引物特異性及擴增性評估
    2.3 基因穩(wěn)定性分析
        2.3.1 geNorm軟件分析
        2.3.2 NormFinder軟件分析
        2.3.3 BestKeeper軟件分析
    2.4 回歸分析
3 討論


【參考文獻】：
期刊論文
[1]大鼠死后管家基因mRNA穩(wěn)定性及其時序性降解與PMI相關(guān)性研究[J]. 劉志杰,董祖鑫,路健,王英元,梁新華.  中國法醫(yī)學(xué)雜志. 2017(05)



本文編號：3659299