本文關(guān)鍵詞：抗EGFR單克隆抗體聯(lián)合COX-2抑制劑對人結(jié)直腸腺癌HT-29細(xì)胞的放射增敏研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：結(jié)腸癌與直腸癌同屬大腸癌,是世界上第三大惡性腫瘤。在歐美發(fā)達(dá)國家中,結(jié)直腸癌的發(fā)病率高達(dá)35-50/10萬,在惡性腫瘤相關(guān)死亡率中居第三位。其中直腸癌較結(jié)腸癌發(fā)病率高,約1.5：1,顯示兩者發(fā)病率逐漸接近。在國內(nèi),由于人民群眾生活水平的提高及飲食結(jié)構(gòu)的改變,發(fā)病率一直在上升,結(jié)直腸癌在惡性腫瘤中的發(fā)病率和死亡率構(gòu)成比中分別為10.56%及7.8%,分別居第三位及第五位,直腸癌與結(jié)腸癌比例接近,男性比重較大。因此大腸癌的發(fā)現(xiàn)、診斷及治療日益受到人們的關(guān)注。手術(shù)治療仍是結(jié)直腸癌的主要治療手段,全直腸系膜切除術(shù)(TME)已成為了直腸癌的標(biāo)準(zhǔn)治療術(shù)式,但全結(jié)腸系膜切除術(shù)(CME)也能有效的降低局部復(fù)發(fā)率,但患者常因手術(shù)創(chuàng)傷過大,影響生活質(zhì)量。為提高手術(shù)的切除率及保肛率,術(shù)前輔助放射治療已經(jīng)得到廣泛開展；對于不能夠手術(shù)的或手術(shù)無法全面切除的患者,則可給予術(shù)后放射治療、抗腫瘤化學(xué)治療、生物治療等綜合手段以盡可能的減滅腫瘤,提高局控率、延長生存期。因此放射治療在結(jié)直腸癌患者治療全程中起著舉足輕重的地位,然而選擇運用有效的放射增敏藥物已成為目前研究的重點。 細(xì)胞凋亡是一個復(fù)雜的生物現(xiàn)象,是由多個基因共同控制的,Caspase-3是細(xì)胞凋亡過程中最主要的終末剪切酶。已有研究表明COX-2抑制劑能夠提高Caspase-3的蛋白表達(dá)水平,從而引起細(xì)胞凋亡率上升,然而EGFR及COX-2胞內(nèi)信號轉(zhuǎn)導(dǎo)存在交叉對話,兩者的表達(dá)能夠相互調(diào)節(jié),而且COX-2能過激活EGFR信號途徑。COX-2抑制劑與抗EGFR單克隆抗體可能協(xié)同上調(diào)Caspase-3的蛋白表達(dá)水平。 本實驗擬通過體外研究比較單獨應(yīng)用西妥昔單抗、塞來昔布與兩者聯(lián)合應(yīng)用放射線后,對人結(jié)直腸癌HT-29細(xì)胞株增殖、凋亡及細(xì)胞周期分布的影響及HT-29細(xì)胞中Caspase-3的蛋白表達(dá)水平的變化,為結(jié)直腸腫瘤放療增敏藥物的臨床應(yīng)用提供實驗基礎(chǔ)。 實驗方法 1MTT法檢測西妥昔單抗與塞來昔布及兩藥聯(lián)用對人結(jié)直腸腺癌HT-29細(xì)胞株增殖的抑制率； 2平板克隆形成實驗檢測西妥昔單抗與塞來昔布兩藥聯(lián)用對人結(jié)直腸腺癌HT-29細(xì)胞株放射敏感性的影響； 3流式細(xì)胞技術(shù)檢測西妥昔單抗與塞來昔布兩藥聯(lián)用對人結(jié)直腸腺癌HT-29細(xì)胞株的細(xì)胞周期及凋亡率影響； 4蛋白免疫印跡法檢測人結(jié)直腸腺癌HT-29細(xì)胞株經(jīng)過西妥昔單抗與塞來昔布聯(lián)合放射線后Caspase-3表達(dá)量的變化。 實驗結(jié)果 1MTT實驗結(jié)果顯示：將西妥昔單抗藥物濃度分為25μg/ml、50μg/ml、100μg/ml、200μg/ml、400μg/ml、800μg/ml、1600μg/ml及空白對照組,分別作用于人結(jié)直腸腺癌HT-29細(xì)胞株24h后,細(xì)胞增殖抑制率分別為：3.57%,20.11%,32.99%,47.36%,53.75%,68.79%，，83.92%,MTT法測得西妥昔單抗作用于HT-29細(xì)胞24h后的IC50濃度為281μg/ml；將塞來昔布藥物濃度分為100μg/ml、200μg/ml、400μg/ml、800μg/ml、1600μg/ml、3200μg/ml、6400μg/ml及空白對照組,應(yīng)用同樣的方法測得塞來昔布作用于HT-29細(xì)胞24h后的IC50濃度為2720μg/ml;將西妥昔單抗與塞來昔布按照1：2、1：1、2：1的比例進(jìn)行配比,作用于HT-29細(xì)胞24h后,其IC50值分別為：632μg/ml、351μg/ml、193μg/ml。且兩藥聯(lián)用組的細(xì)胞生長抑制率明顯高于單純用藥組,具有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05)。 2克隆形成實驗結(jié)果顯示：兩藥聯(lián)用25μg/ml及50μg/ml附加照射組的DO值(平均致死劑量)、Dq值(細(xì)胞損傷的準(zhǔn)域劑量)、N值(放射損傷修復(fù)能力)、SF2(照射2Gy后的細(xì)胞存活分?jǐn)?shù))分別為：2.505、2.804、3.064、0.826及2.184、2.370、2.960、0.772,均小于單純照射組的3.368、3.993、3.273、0.922,并且藥物濃度越大,其數(shù)值越小。聯(lián)合應(yīng)用西妥昔單抗與塞來昔布后,HT-29細(xì)胞的放射敏感性增強(qiáng),SER (Do)分別為：1.345、1.542；SER (Dq)分別為：1.424、1.685。說明西妥昔單抗與塞來昔布聯(lián)用能有效減弱HT-29細(xì)胞株的放射抗拒性及亞致死性損傷修復(fù)的能力,增強(qiáng)其放射敏感性。 3流式細(xì)胞術(shù)實驗結(jié)果顯示：單純用藥組對應(yīng)于藥物濃度(25μg/ml、50μg/ml)誘導(dǎo)HT-29細(xì)胞株凋亡率分別為：7.21%、11.74%；單純照射組的凋亡率對應(yīng)于照射劑量(2Gy、4Gy、6Gy、8Gy)分別為：10.93%、16.45%、29.84%、39.57%;25μg/ml藥物聯(lián)合附加照射組的凋亡率分別為：17.89%、25.02%、40.32%、48.33%;50μg/ml藥物聯(lián)合附加照射組的凋亡率分別為：22.06%、34.39%、47.57%、54.03%。單純用藥組及低劑量照射組出現(xiàn)了G0/G1期的阻滯現(xiàn)象,而且與用藥濃度成正比,具有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05)。當(dāng)照射劑量為6、8Gy時,S期細(xì)胞減少情況明顯,具有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05)；在聯(lián)用藥物50μg/ml附加照射8Gy組中,S期達(dá)到了最低值11.78%。當(dāng)照射劑量為4、6、8Gy時G2/M期阻滯明顯,具有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05)；在聯(lián)用藥物50μg/ml附加照射8Gy組中,G2/M期達(dá)到了最高值27.63%。 4Western Blot法檢測結(jié)果顯示：單純照射組、聯(lián)用藥物附加照射組Caspase-3的蛋白表達(dá)量均高于空白對照組,具有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05)；聯(lián)用藥物附加照射組的表達(dá)量高于單純照射組,具有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05)；高濃度藥物組的表達(dá)量與低濃度組有明顯差異,藥物濃度與表達(dá)量成正比,具有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05)。 結(jié)論： 1在本實驗設(shè)計的藥物濃度范圍內(nèi),西妥昔單抗聯(lián)合塞來昔布能有效抑制人結(jié)直腸腺癌HT-29細(xì)胞株的增殖,且抑制率與藥物濃度呈正比。 2人結(jié)直腸腺癌HT-29細(xì)胞株克隆形成率與照射劑量呈反比,在等量照射劑量下,藥物附加照射組的克隆形成率明顯低于單純照射組,且存活分?jǐn)?shù)與藥物濃度呈反比,西妥昔單抗聯(lián)合塞來昔布具有一定的放射增敏效應(yīng)。 3單獨應(yīng)用西妥昔單抗聯(lián)合塞來昔布低濃度組具有一定的G0/G1期阻滯效應(yīng),高濃度的西妥昔單抗聯(lián)合塞來昔布能夠明顯的降低HT-29細(xì)胞株的S期細(xì)胞,增加對放射線敏感的G2/M期細(xì)胞,放射增敏效應(yīng)主要由于明顯的G2/M期阻滯現(xiàn)象。 4應(yīng)用西妥昔單抗及塞來昔布經(jīng)放射線照射后HT-29細(xì)胞株的Caspase-3蛋白表達(dá)量較等劑量單純照射時升高,西妥昔單抗聯(lián)合塞來昔布的放射增敏效應(yīng)可能與其協(xié)同增高Caspase-3蛋白表達(dá)有關(guān)。
【關(guān)鍵詞】：西妥昔單抗 塞來昔布 HT-29細(xì)胞 凋亡 放射增敏 Caspase-3
【學(xué)位授予單位】：鄭州大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2014
【分類號】：R735.34;R730.55
【目錄】：

• 摘要4-8
• Abstract8-13
• 中英文對照縮略詞表13-14
• 引言14-17
• 實驗材料與方法17-28
• 結(jié)果28-39
• 討論39-45
• 結(jié)論45-46
• 參考文獻(xiàn)46-47
• 綜述 直腸癌與肛管癌的放射治療進(jìn)展47-68
• 參考文獻(xiàn)63-68
• 個人簡歷68-69
• 致謝69

【參考文獻(xiàn)】

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  本文關(guān)鍵詞：抗EGFR單克隆抗體聯(lián)合COX-2抑制劑對人結(jié)直腸腺癌HT-29細(xì)胞的放射增敏研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

本文編號：362686