本文關(guān)鍵詞：長鏈非編碼RNA-X53654對肺上皮增殖、遷移和放射敏感性的影響及機制的研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：目的:本研究通過建立穩(wěn)定高表達lnc RNA-X53654的Beas-2B細胞株,對差異性表達的基因進行篩選分析,并在體外水平研究X53654對肺上皮細胞增殖、遷移侵襲及輻射敏感性的影響。方法:(1)通過脂質(zhì)體介導(dǎo)的質(zhì)粒轉(zhuǎn)染及G418篩選構(gòu)建穩(wěn)定高表達X53654的Beas-2B細胞株;(2)利用表達譜芯片篩選分析在高表達X53654的細胞中差異性表達的蛋白質(zhì)編碼基因并通過GO分析和KEGG分析歸納其影響的生物學(xué)功能及通路;(3)運用MTT法、流式細胞術(shù)、劃痕、Transwell和明膠酶譜等試驗驗證X53654對Beas-2B細胞增殖、遷移和侵襲的影響,并通過Western Blot驗證X53654對上述生物學(xué)功能相關(guān)蛋白表達的調(diào)控;(4)通過RT-PCR驗證電離輻射作用后Beas-2B細胞中X53654表達水平的改變;然后運用克隆形成試驗驗證細胞輻射敏感性的改變;應(yīng)用流式細胞術(shù)檢測照后細胞周期的變化;同時采用免疫熒光試驗檢測γH2AX的形成能力;采用彗星試驗檢測彗尾形成程度;最后通過Western Blot檢測DNA損傷修復(fù)相關(guān)蛋白的表達。結(jié)果:(1)成功建立穩(wěn)定高表達lnc RNA-X53654的Beas-2B細胞株,通過表達譜芯片篩選分析發(fā)現(xiàn)差異性表達的基因集中于免疫、炎癥反應(yīng)、RNA作用機制、細胞骨架運動性以及DNA損傷檢查點等方面。(2)高表達X53654可以引起細胞增殖能力增強、遷移能力降低以及侵襲能力增加,Western Blot驗證了Occludin、Claudin 1表達下調(diào),MMP-2、MMP-9和β-catenin表達上調(diào),同時TGF-β1、Samd3、SNAIL表達升高。(3)高表達X53654的Beas-2B細胞輻射敏感性降低,照后G1/S阻滯較對照組明顯,γH2AX形成增多,彗尾減輕。Western Blot驗證ATM、phospho-ATM、Ku80、DNA-PK、TGF-β1和Smad3表達上調(diào),phospho-BRCA表達無明顯改變,MRE11、Rad50表達下調(diào)。結(jié)論:高表達lnc RNA-X53654可能通過引起細胞周期運轉(zhuǎn)速率加快而引起細胞增殖能力增強;同時X53654可使細胞緊密連接蛋白表達減弱,侵襲能力增強,可能是TGF-β/Smad3通路激活引起的上皮表型轉(zhuǎn)換引起;高表達X53654引起細胞輻射抗性增加可能是由于TGF-β/Smad3通路激活引起非同源末端連接修復(fù)增強引起,但其確切機制需要進一步研究。
【關(guān)鍵詞】：放射性肺損傷 長鏈非編碼RNA 增殖 遷移 侵襲 放射敏感性 DNA損傷修復(fù) TGF-β
【學(xué)位授予單位】：蘇州大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號】：R730.55
【目錄】：

• 中文摘要4-6
• Abstract6-10
• 引言10-14
• 參考文獻11-14
• 第一部分 高表達LNCRNA-X53654肺支氣管上皮細胞模型的建立及差異性表達譜的分析14-33
• 前言14-15
• 材料和方法15-22
• 一、實驗材料15-17
• 二、實驗方法17-22
• 結(jié)果22-29
• 討論29-30
• 參考文獻30-33
• 第二部分LNCRNA-X53654對肺支氣管上皮細胞增殖、周期、遷移和侵襲的影響33-54
• 前言33
• 材料和方法33-43
• 一、實驗材料33-37
• 二、實驗方法37-43
• 結(jié)果43-48
• 討論48-51
• 參考文獻51-54
• 第三部分 高表達LNCRNA-X53654對肺支氣管上皮細胞輻射敏感性的影響及機制研究54-70
• 前言54
• 材料和方法54-58
• 一、實驗材料54-55
• 二、實驗方法55-58
• 結(jié)果58-64
• 討論64-67
• 參考文獻67-70
• 結(jié)論70-71
• 綜述71-87
• 參考文獻79-87
• 中英文分類詞表87-88
• 攻讀碩士學(xué)位期間科研活動88-89
• 致謝89-90

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