目的運(yùn)用差異顯示技術(shù)結(jié)合硝酸銀染色篩選大鼠肌肉挫傷后與正常肌肉表達(dá)差異的基因,并通過Real-time PCR方法研究差異基因與損傷時(shí)間的關(guān)系,旨在尋找一種或幾種與損傷相關(guān)的敏感基因,為法醫(yī)學(xué)損傷時(shí)間推斷提供科學(xué)、有效的指標(biāo)。方法1. 12只健康成年SD大鼠隨機(jī)分為實(shí)驗(yàn)組和正常對(duì)照組。實(shí)驗(yàn)組大鼠建立肌肉挫傷模型,損傷后4小時(shí)處死,提取100mg損傷處肌肉組織。對(duì)照組大鼠在規(guī)定時(shí)間內(nèi)處死,提取相同部位100mg肌肉組織。兩組肌肉組織經(jīng)SV Total RNA Isolation system提取總RNA,并經(jīng)Agilent 2100 Bioanalyzer進(jìn)行質(zhì)量控制檢測(cè), SIN值大于8.0的樣本經(jīng)反轉(zhuǎn)錄后用于下游實(shí)驗(yàn)。2.采用4種錨定引物和3種隨機(jī)引物共12種組合對(duì)實(shí)驗(yàn)組和對(duì)照組樣本進(jìn)行PCR擴(kuò)增,擴(kuò)增產(chǎn)物經(jīng)聚丙烯酰胺凝膠電泳分離后硝酸銀染色進(jìn)行差異表達(dá)分析。采用煮沸法回收差異條帶,并進(jìn)行二次擴(kuò)增,擴(kuò)增產(chǎn)物純化后與載體連接、克隆,進(jìn)行序列分析,將測(cè)序所得差異序列與GenBank進(jìn)行同源性比較。3. 4只健康成年SD大鼠隨機(jī)分為正常對(duì)照組和損傷組,提取各組樣本的總RNA。在差異序列兩端... 

【文章來源】：山西醫(yī)科大學(xué)山西省

【文章頁(yè)數(shù)】：102 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：博士

【部分圖文】：

-12100生物分析儀檢測(cè)總RNA的完整性及濃度Fig1-1-1EvaluationoftotalRNAintegrityusinganAgilent2100Bioanalyser.

10圖 1-1-2 部分 DDRT-PCR 產(chǎn)物瓊脂糖凝膠圖1，3，5，7，9 為正常肌肉；2，4，6，8，10 為損傷組肌肉；M 為 200bp 分子量標(biāo)記Fig 1-1-2 Agarose gel electrophoresis of DDRT-PCROTE: There were different mRNA expression levels in the skeletal muscle of contusioneroup and normal group. More than 20 differential bands were found by the Agarose gelectrophoresis.Normal group:1,3,5,7,9. Contusion group:2,4,6,8,10 M: Marker

山西醫(yī)科大學(xué)博士學(xué)位論文聚丙烯酰胺凝膠電泳結(jié)果錨定引物和隨機(jī)引物兩兩組合進(jìn)行 RT-PCR 反應(yīng)，擴(kuò)增產(chǎn)物經(jīng)聚丙烯酰胺凝膠電行銀染顯色，其部分結(jié)果如圖 1-1-3 所示。與瓊脂糖凝膠電泳相比，聚丙烯酰胺凝結(jié)合銀染顯色可以獲得清晰的條帶，分離效果明顯增強(qiáng)，且容易對(duì) PAGE 膠進(jìn)行切收差異條帶。本實(shí)驗(yàn)采用 PAGE 膠結(jié)合銀染的方法進(jìn)行兩組間 mRNA 差異顯示，共 多條差異條帶。M 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 M 1 2 3 4 5 6 M 7 8 9 10 M

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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