重組人卵膜糖蛋白2與精子體外結(jié)合的研究及四個DNA遺傳標(biāo)記的多態(tài)性調(diào)查
發(fā)布時間：2021-12-02 09:16
研究目的:哺乳動物卵膜糖蛋白（zona pellucida,ZP）是由卵母細(xì)胞及顆粒細(xì)胞分泌的一種糖蛋白基質(zhì),與精子之間存在特定分子上的受體配體識別作用。人ZP分為ZP1,ZP2,ZP3和ZP4,其中ZP2是參與精卵識別過程的二級受體。目前大多數(shù)生殖領(lǐng)域方面的研究多集中在ZP2蛋白與獲能精子結(jié)合的探究上,對與未獲能精子結(jié)合情況少有研究,且結(jié)合環(huán)境多比較單一。本實驗利用體外受體和配體存在的親和作用,探討真核系統(tǒng)表達的重組hZP2蛋白在不同的體外結(jié)合環(huán)境中與未獲能精子的結(jié)合情況,期望達到重組蛋白與精子的高效結(jié)合,進行法醫(yī)學(xué)方面的應(yīng)用,為本課題組后續(xù)研究中對法醫(yī)學(xué)混合斑中精子的提取及個人識別提供基礎(chǔ)。調(diào)查中國北方人群DLG2,RBMS3和NAP5基因的三個單核苷酸多態(tài)性（SNPs）（rs7479949,rs2053288和rs12612615）以及NAP5基因的一個插入缺失標(biāo)記（InDel）（rs778533301）頻率分布,為法醫(yī)學(xué)個人識別和親權(quán)鑒定提供新的遺傳標(biāo)記,同時探討其與帕金森�。≒arkinson’s disease,PD）的關(guān)聯(lián)性。研究方法:構(gòu)建pCDNA3.1（+）-ZP2真...
【文章來源】：中國醫(yī)科大學(xué)遼寧省
【文章頁數(shù)】：56 頁
【學(xué)位級別】：碩士
【部分圖文】：
pCDNA3.1(+)-ZP2重組質(zhì)粒酶切電泳圖
中國醫(yī)科大學(xué)碩士學(xué)位論文M：250bpDNA 標(biāo)準(zhǔn)分子量；泳道 1：pCDNA3.1(+)-ZP組 hZP2 蛋白在 HEK293 細(xì)胞中的成功表達脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染方法將提取到的 pCDNA3.1(+)-ZP2 重組別轉(zhuǎn)入 HEK293 細(xì)胞中，48h 后提取蛋白，用 His 標(biāo)同進行蛋白免疫印跡驗證，結(jié)果如圖 1-2，轉(zhuǎn)染 ZP2 下方的位置出現(xiàn)一條明顯的蛋白條帶，且兩種抗體約為 96kDa 左右，而未做處理的 HEK293 細(xì)胞裂解未出現(xiàn)條帶。
圖 1-3：純化后的重組 hZP2 蛋白的免疫印跡分析白 Marker； 泳道 1：純化前細(xì)胞裂解液；泳道 2：與 Bind Resins 過夜混泳道 3：純化后第三次洗滌產(chǎn)物；泳道 4：50mM 咪唑磷酸鹽緩沖液洗脫mM 咪唑磷酸鹽緩沖液洗脫產(chǎn)物；泳道 6：150mM 咪唑磷酸鹽緩沖液洗200mM 咪唑磷酸鹽緩沖液洗脫產(chǎn)物；泳道 8：300mM 咪唑磷酸鹽緩沖：400mM 咪唑磷酸鹽緩沖液洗脫產(chǎn)物。組 hZP2 蛋白體外與未獲能精子的結(jié)合LISA 檢測重組 hZP2 蛋白表現(xiàn)出濃度依賴性實驗運用 ELISA 法繪制出重組 hZP2 蛋白的濃度曲線，用以確精子結(jié)合的蛋白最適濃度。分別使用抗 His 標(biāo)簽抗體以及商品抗體孵育不同包被濃度的重組 hZP2 蛋白，進行濃度梯度檢測。
【參考文獻】：
期刊論文
[1]HTR1B基因多態(tài)性與精神疾病的相關(guān)性及法醫(yī)學(xué)意義[J]. 夏皙,丁梅,姚軍,宣金鋒,邢佳鑫,龐灝,王保捷. 中國法醫(yī)學(xué)雜志. 2018(04)
[2]RNA結(jié)合基序單鏈相互作用蛋白3在人乳頭瘤病毒16型相關(guān)宮頸癌細(xì)胞和鱗狀細(xì)胞癌組織中的表達[J]. 李航,崔靜,田明振,馮思佳,楊璐,趙二趁,原志慶,千新來. 新鄉(xiāng)醫(yī)學(xué)院學(xué)報. 2015(08)
[3]鉀通道功能異常與帕金森病[J]. 王剛,陳生弟. 生理科學(xué)進展. 2008(01)
[4]腦卒中病理變化的機制:PSD93在血小板活化因子性神經(jīng)元損害中的作用[J]. 黃嶸,徐運,王嵐,朱琳,王羽中,管得寧,王中原,陶元祥. 中國臨床康復(fù). 2005(01)
[5]Recombinant human zona pellucida proteins ZP1, ZP2 and ZP3 co-expressed in a human cell line[J]. Mirjana Martic,Eric K. Moses,Tim E. Adams,Debra A. Gook,Claire Garrett,Marjorie E.Dunlop,Gordon H. W. Baker. Asian Journal of Andrology. 2004(01)
碩士論文
[1]重組人卵透明帶蛋白3（rhZP3）的生物活性研究[D]. 張韞.暨南大學(xué) 2005
本文編號：3528145
【文章來源】：中國醫(yī)科大學(xué)遼寧省
【文章頁數(shù)】：56 頁
【學(xué)位級別】：碩士
【部分圖文】：
pCDNA3.1(+)-ZP2重組質(zhì)粒酶切電泳圖
中國醫(yī)科大學(xué)碩士學(xué)位論文M：250bpDNA 標(biāo)準(zhǔn)分子量；泳道 1：pCDNA3.1(+)-ZP組 hZP2 蛋白在 HEK293 細(xì)胞中的成功表達脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染方法將提取到的 pCDNA3.1(+)-ZP2 重組別轉(zhuǎn)入 HEK293 細(xì)胞中，48h 后提取蛋白，用 His 標(biāo)同進行蛋白免疫印跡驗證，結(jié)果如圖 1-2，轉(zhuǎn)染 ZP2 下方的位置出現(xiàn)一條明顯的蛋白條帶，且兩種抗體約為 96kDa 左右，而未做處理的 HEK293 細(xì)胞裂解未出現(xiàn)條帶。
圖 1-3：純化后的重組 hZP2 蛋白的免疫印跡分析白 Marker； 泳道 1：純化前細(xì)胞裂解液；泳道 2：與 Bind Resins 過夜混泳道 3：純化后第三次洗滌產(chǎn)物；泳道 4：50mM 咪唑磷酸鹽緩沖液洗脫mM 咪唑磷酸鹽緩沖液洗脫產(chǎn)物；泳道 6：150mM 咪唑磷酸鹽緩沖液洗200mM 咪唑磷酸鹽緩沖液洗脫產(chǎn)物；泳道 8：300mM 咪唑磷酸鹽緩沖：400mM 咪唑磷酸鹽緩沖液洗脫產(chǎn)物。組 hZP2 蛋白體外與未獲能精子的結(jié)合LISA 檢測重組 hZP2 蛋白表現(xiàn)出濃度依賴性實驗運用 ELISA 法繪制出重組 hZP2 蛋白的濃度曲線，用以確精子結(jié)合的蛋白最適濃度。分別使用抗 His 標(biāo)簽抗體以及商品抗體孵育不同包被濃度的重組 hZP2 蛋白，進行濃度梯度檢測。
【參考文獻】：
期刊論文
[1]HTR1B基因多態(tài)性與精神疾病的相關(guān)性及法醫(yī)學(xué)意義[J]. 夏皙,丁梅,姚軍,宣金鋒,邢佳鑫,龐灝,王保捷. 中國法醫(yī)學(xué)雜志. 2018(04)
[2]RNA結(jié)合基序單鏈相互作用蛋白3在人乳頭瘤病毒16型相關(guān)宮頸癌細(xì)胞和鱗狀細(xì)胞癌組織中的表達[J]. 李航,崔靜,田明振,馮思佳,楊璐,趙二趁,原志慶,千新來. 新鄉(xiāng)醫(yī)學(xué)院學(xué)報. 2015(08)
[3]鉀通道功能異常與帕金森病[J]. 王剛,陳生弟. 生理科學(xué)進展. 2008(01)
[4]腦卒中病理變化的機制:PSD93在血小板活化因子性神經(jīng)元損害中的作用[J]. 黃嶸,徐運,王嵐,朱琳,王羽中,管得寧,王中原,陶元祥. 中國臨床康復(fù). 2005(01)
[5]Recombinant human zona pellucida proteins ZP1, ZP2 and ZP3 co-expressed in a human cell line[J]. Mirjana Martic,Eric K. Moses,Tim E. Adams,Debra A. Gook,Claire Garrett,Marjorie E.Dunlop,Gordon H. W. Baker. Asian Journal of Andrology. 2004(01)
碩士論文
[1]重組人卵透明帶蛋白3（rhZP3）的生物活性研究[D]. 張韞.暨南大學(xué) 2005
本文編號：3528145
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