目的構(gòu)建攜帶單純皰疹病毒1型胸苷激酶基因（HSV1-tk）的重組質(zhì)粒和重組腺病毒載體,對比研究重組腺病毒和脂質(zhì)體包裹的重組質(zhì)粒體外轉(zhuǎn)導(dǎo)乳鼠心肌細胞后,對核素標(biāo)記的報告探針131I-FIAU的攝取和基因表達情況,為核素報告基因心臟顯像尋找合適的載體并提供基礎(chǔ)。方法1.重組質(zhì)粒與重組腺病毒的構(gòu)建及鑒定以含巨細胞病毒（CMV）啟動子的pDC316為載體質(zhì)粒,將報告基因HSV1-tk插入多克隆位點,構(gòu)建重組質(zhì)粒pDC316-tk;以pDC316-tk作為重組穿梭質(zhì)粒,與腺病毒骨架質(zhì)粒共轉(zhuǎn)染293細胞,包裝生成腺病毒重組體Ad5-tk,本部分與北京本元正陽公司合作完成。含增強型綠色熒光蛋白基因的重組腺病毒Ad5-EGFP作為對照病毒。2.SD大鼠乳鼠心肌細胞培養(yǎng)無菌操作取1～3 d齡SD大鼠乳鼠心室組織,剪成1mm3的組織碎塊,采用0.1% II型膠原酶單次消化法消化組織塊,1 h差速貼壁法純化心肌細胞,于37℃、5%CO2環(huán)境下培養(yǎng)。生物倒置顯微鏡下動態(tài)觀察心肌細胞形態(tài)。3.脂質(zhì)體包裹重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)染體外培養(yǎng)的心肌細胞心肌細胞貼壁生長達90%融合時,重組質(zhì)粒pDC316-tk經(jīng)脂質(zhì)體lipofec... 

【文章來源】：華中科技大學(xué)湖北省 211工程院校 985工程院校 教育部直屬院校

【文章頁數(shù)】：58 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

pDC316-tk質(zhì)粒PCR鑒定圖

圖 2 pDC316-tk 質(zhì)粒酶鑒定圖Takara 公司 DL2000 marker； 1：EcoRI 酶切 pDC316-t酶切 pDC316-tk 質(zhì)粒； 3：EcoRI+SalI 雙酶切 pDC316-M2：Takara 公司 DL15000 marker)33

圖 3 重組腺病毒載體 Ad5-tk 的結(jié)構(gòu)示意圖圖 4 顯微鏡下的 293 細胞(生物倒置顯微鏡，×100)A 為正常細胞；B 為出現(xiàn)嗜菌斑的產(chǎn)毒細胞

【參考文獻】：
期刊論文
[1]新生SD大鼠心肌細胞培養(yǎng)方法的簡化及改良[J]. 王瑞華,蘭曉莉,曹國祥,安銳,張永學(xué).  心臟雜志. 2008(02)
[2]FAU的碘化標(biāo)記及其在小鼠體內(nèi)的生物學(xué)分布[J]. 王瑞華,曹國祥,蘭曉莉,何勇,伍軍,安銳,張永學(xué).  中華核醫(yī)學(xué)雜志. 2007(04)



本文編號：3431085