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miRNAs參與ApoE(-/-)小鼠Toll樣受體4免疫作用機(jī)制的干預(yù)研究

發(fā)布時(shí)間:2021-08-26 06:34
  研究目的:本研究以ApoE(-/-)小鼠為研究對(duì)象,采用中小強(qiáng)度的有氧運(yùn)動(dòng)和辛伐他汀藥物干預(yù)手段。探討動(dòng)脈粥樣硬化Toll樣受體4(TLR4)信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路及非編碼基因nicroRNAs (miRNAs、miRs)的調(diào)控對(duì)其血管炎性損傷修復(fù)的影響及可能分子機(jī)制。研究方法:應(yīng)用ApoE基因敲除和高脂高膽固醇飼料誘發(fā)動(dòng)脈粥樣硬化小鼠(10周齡C57BL/6J),將其分為安靜組(n=16)、運(yùn)動(dòng)組(n=16)、用藥組(n=16);定期測(cè)定尾血清CHO、LDL、HDL含量以檢驗(yàn)實(shí)驗(yàn)?zāi)P停幻嘎?lián)接免疫吸附反應(yīng)法(ELISA)檢測(cè)血清炎性因子IL-6、TNF-a、IL-10的含量及血管ET1、AngⅡ激素水平;膠原蛋白酶消化法收集血管內(nèi)皮細(xì)胞;免疫組化法檢測(cè)TLR4通路相關(guān)因子Toll樣受體4(TLR4)、TRAF6、NF-Kb及內(nèi)皮細(xì)胞EGF、TGF-β的蛋白水平;RT-PCR法檢測(cè)CRP、MCP-1mRNA表達(dá)水平;Real time qPCR法檢測(cè)miRNAs的表達(dá);利用PicTar, TargetScan等數(shù)據(jù)庫(kù)預(yù)測(cè)miRNA靶基因,并采用雙熒光酶報(bào)告載體驗(yàn)證niRNA-146a的靶基因。研究... 

【文章來(lái)源】:湖南師范大學(xué)湖南省 211工程院校

【文章頁(yè)數(shù)】:47 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】:碩士

【文章目錄】:
摘要
ABSTRACT
1. 前言
2. 材料和方法
    2.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物
    2.2 主要試劑與儀器
        2.2.1 主要試劑
        2.2.2 主要儀器
    2.3 實(shí)驗(yàn)方法
        2.3.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物分組
        2.3.2 運(yùn)動(dòng)方案及給藥
        2.3.3 樣本采集與處理
        2.3.4 生物學(xué)分析
        2.3.5 組織學(xué)與免疫組化
        2.3.6 RT-PCR檢測(cè)mRNA的表達(dá)
        2.3.7 定量PCR檢測(cè)差異表達(dá)的miRNAs
        2.3.8 Western blot
        2.3.9 靶基因預(yù)測(cè)
        2.3.10 雙熒光酶報(bào)告載體靶基因驗(yàn)證
    2.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析
3. 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
    3.1 AS病理學(xué)診斷
    3.2 AS小鼠血清炎性因子的變化
    3.3 AS小鼠血管組織和內(nèi)皮細(xì)胞免疫標(biāo)記
    3.4 AS小鼠血管組織與內(nèi)皮細(xì)胞激素水平
    3.5 AS小鼠血管組織CRP、MCP-1的表達(dá)
    3.6 AS小鼠miRNA的轉(zhuǎn)錄水平
    3.7 靶基因的預(yù)測(cè)及驗(yàn)證
    3.8 miRNA-146a對(duì)TRAF6的調(diào)控及其在組織中的表達(dá)
4. 討論
    4.1 ApoE(-/-)AS小鼠血管炎癥損傷
    4.2 ApoE(-/-)AS小鼠TLR4信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路
    4.3 ApoE(-/-)AS小鼠mircoRNAs的轉(zhuǎn)錄調(diào)控
    4.4 ApoE(-/-)AS小鼠血管內(nèi)皮損傷的修復(fù)
    4.5 有待進(jìn)一步研究
5. 結(jié)論
參考文獻(xiàn)
綜述
    參考文獻(xiàn)
縮略詞表
科研情況
后記


【參考文獻(xiàn)】:
期刊論文
[1]微小RNA及其心血管病理生理學(xué)作用[J]. 汪南平,郝廣華.  西安交通大學(xué)學(xué)報(bào)(醫(yī)學(xué)版). 2010(04)
[2]血清MCP-1與急性冠脈綜合征的關(guān)系[J]. 賈立娟,呂樹錚,李海濤.  中國(guó)誤診學(xué)雜志. 2010(01)
[3]C-反應(yīng)蛋白與動(dòng)脈粥樣硬化炎癥的關(guān)系[J]. 徐索文,劉培慶.  中國(guó)病理生理雜志. 2009(12)
[4]TLR4信號(hào)通路與動(dòng)脈粥樣硬化的研究進(jìn)展[J]. 盛富強(qiáng),程龍獻(xiàn).  心臟雜志. 2009(04)
[5]Toll樣受體4和腫瘤壞死因子αmRNA在動(dòng)脈粥樣硬化中表達(dá)的相關(guān)性研究[J]. 馬克娟,馬克威,趙利華.  中華心血管病雜志. 2004(10)
[6]過(guò)度訓(xùn)練對(duì)大鼠心肌腎素——血管緊張素系統(tǒng)及有關(guān)酶的影響[J]. 田振軍,熊正英.  體育科學(xué). 1999(05)



本文編號(hào):3363742

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