本文關(guān)鍵詞：男性血睪酮半定量檢測膠體金免疫層析試紙條的研制，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：目的：通過對金標(biāo)抗體復(fù)合物合成條件的摸索、包被抗原以及溶液系統(tǒng)和試紙條材料的篩選,建立男性血睪酮半定量膠體金免疫層析試紙條檢測技術(shù)。方法：對膠體金質(zhì)量進行鑒定。通過目測法和酶標(biāo)儀檢測,確定出穩(wěn)定膠體金溶液的最佳pH和睪酮單克隆抗體的最低濃度。把兩種包被抗原進行一系列稀釋進行點樣,通過觀察試紙條的顯色效果篩選出合適的包被抗原；把包被抗原做1：50稀釋,根據(jù)NC膜上檢測線的顯色程度確定最佳包被抗原稀釋液；配置不同的金標(biāo)抗體復(fù)合物稀釋液、金標(biāo)墊處理液,通過檢測線和質(zhì)控線的顯色效果、金標(biāo)抗體的釋放速度、抗體殘留量情況等篩選出最佳的稀釋液和處理液。觀察不同型號NC膜上金標(biāo)抗體層析速度、檢測線顯色效果,篩選出最佳NC膜；根據(jù)紅細(xì)胞的濾過和血液的凝固現(xiàn)象篩選出合適的樣品墊和塑料包裝卡。通過正交篩選實驗,確定最佳的抗原和金標(biāo)抗體包被濃度。配置一系列濃度的睪酮標(biāo)準(zhǔn)品,利用專業(yè)取色軟件,制備標(biāo)準(zhǔn)比色卡。對試紙條進行一系列性能的檢測。結(jié)果：(1)膠體金直徑30nm,符合實驗要求。(2)穩(wěn)定1mL膠體金溶液的最低抗體濃度為24ug,最佳pH為8.3。(3)最佳包被抗原為偶聯(lián)比25：1的睪酮—BSA。(4)檢測線最佳包被抗原濃度為0.465ug/ml,金標(biāo)抗體的最佳稀釋度為4倍稀釋度。(5)溶液系統(tǒng)的篩選結(jié)果為：包被抗原稀釋液為0.01M pH9.6 CBS,金標(biāo)抗體復(fù)合物稀釋液為0.01M pH7.4 PBS(含0.1%BSA、5%蔗糖、0.05%Tween-20),金標(biāo)墊處理液為0.01M pH7.4 PBS(含5%蔗糖、0.5%Tween-20、0.1%疊氮鈉)。(6)試紙條各部分材料的篩選結(jié)果：NC膜型號為WhatmanAE99,金標(biāo)墊型號為Ahlstrom8964,全血濾血膜為GF2,塑料包裝卡為A-12。(7)試紙條的檢測范圍為300ng/dl-900ng/dl,濃度間隔為100ng/dl。(7)與類似物無明顯交叉反應(yīng)。具有良好的精密度。在4℃干燥條件下可保存3個月。與Elisa試劑盒比較,符合率達(dá)90%。結(jié)論：建立了半定量測試男性血睪酮的膠體金試紙條,該試紙條測試范圍為300ng/dl-900ng/dl,測試簡單快捷,具有良好的特異性和精密度。
【關(guān)鍵詞】：膠體金試紙條 血睪酮 全血 比色卡
【學(xué)位授予單位】：北京體育大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號】：R446.6;R87
【目錄】：

• 摘要5-6
• ABSTRACT6-10
• 1 前言10
• 2 文獻(xiàn)綜述10-24
• 2.1 睪酮特性10-14
• 2.1.1 睪酮的生理特性10-11
• 2.1.2 睪酮在臨床與運動實踐中的應(yīng)用11-14
• 2.2 睪酮測試的樣本來源14-16
• 2.2.1 唾液睪酮14-15
• 2.2.2 尿液睪酮15-16
• 2.2.3 血清睪酮16
• 2.3 運動領(lǐng)域血睪酮的測試方法16-19
• 2.3.1 放射免疫測定法16-17
• 2.3.2 磁分離酶聯(lián)免疫測定法17
• 2.3.3 化學(xué)發(fā)光免疫測定法17-18
• 2.3.4 其他方法18-19
• 2.4 膠體金免疫層析技術(shù)19-24
• 2.4.1 膠體金性質(zhì)和特點19-20
• 2.4.2 免疫膠體金20-21
• 2.4.3 膠體金免疫層析技術(shù)的原理21-23
• 2.4.4 膠體金免疫層析技術(shù)的應(yīng)用現(xiàn)狀和熱點23-24
• 3 膠體金免疫層析試紙條的制備24-30
• 3.1 材料和方法24-30
• 3.1.1 試劑與材料24-26
• 3.1.2 方法26-30
• 4 結(jié)果30-49
• 4.1 膠體金質(zhì)量的鑒定31-32
• 4.2 金標(biāo)抗體的制備與鑒定32-36
• 4.2.1 膠體金標(biāo)記睪酮抗體最適濃度的確定32-34
• 4.2.2 膠體金標(biāo)記抗體最佳pH的確定34-35
• 4.2.3 金標(biāo)抗體復(fù)合物的活性鑒定35-36
• 4.3 包被抗原的篩選36-37
• 4.4 溶液系統(tǒng)與試紙條材料的篩選37-41
• 4.4.1 包被抗原所用稀釋液37-38
• 4.4.2 金標(biāo)睪酮抗體復(fù)合物稀釋液38-39
• 4.4.3 金標(biāo)墊處理液39
• 4.4.4 NC膜39-40
• 4.4.5 樣品墊選擇40-41
• 4.4.6 塑料包裝卡41
• 4.5 抗原和金標(biāo)抗體最佳包被量的確定41-42
• 4.6 標(biāo)準(zhǔn)比色卡的制作42-44
• 4.7 性能檢測44-49
• 4.7.1 特異性44-45
• 4.7.2 精密性檢測45
• 4.7.3 穩(wěn)定性45-48
• 4.7.4 與定量試劑盒檢測結(jié)果一致性評價48
• 4.7.5 重復(fù)性48
• 4.7.6 檢測結(jié)果的保存時間48-49
• 5 分析討論49-54
• 5.1 膠體金粒徑的選擇49-50
• 5.2 金標(biāo)抗體的制備及其儲存50-51
• 5.3 NC膜的篩選51
• 5.4 全血濾血膜及塑料包裝卡的特殊性51-52
• 5.5 抗原和金標(biāo)抗體包被量52-53
• 5.6 試紙條的穩(wěn)定性及保存環(huán)境53
• 5.7 標(biāo)準(zhǔn)比色卡的制備53-54
• 6 結(jié)論54-56
• 致謝56-57
• 參考文獻(xiàn)57-62
• 附錄62-63
• 個人簡歷 在讀碩士期間發(fā)表的學(xué)術(shù)論文與著作63

【參考文獻(xiàn)】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 林彤;獨軍政;叢國正;邵軍軍;高閃電;常惠蕓;謝慶閣;;膠體金標(biāo)記免疫層析技術(shù)的最新應(yīng)用進展[J];安徽農(nóng)業(yè)科學(xué);2010年16期

2 黎慧娟;高常青;胡平安;;運動與下丘腦-垂體-睪丸軸[J];北方藥學(xué);2012年04期

3 張海智;內(nèi)源性激素類興奮劑檢測方法的研究與進展[J];昌濰師專學(xué)報;2000年02期

4 陳維真;朱康順;羅輝;;青少年肥胖女性血清睪酮與代謝綜合征的關(guān)系[J];當(dāng)代醫(yī)學(xué);2010年26期

5 鮑時華;林其德;盛世樂;;尿液總睪酮測定的新方法[J];放射免疫學(xué)雜志;2007年05期

6 張慧嫦;張少恩;吳忠華;羅鵬;游雄;吳麗燕;;膠體金免疫層析法快速檢測鹽酸克倫特羅殘留[J];中國國境衛(wèi)生檢疫雜志;2008年01期

7 張付賢;王興龍;;免疫膠體金技術(shù)影響因素分析[J];中國畜牧獸醫(yī);2009年05期

8 熊正英;吉莉萍;;運動員減體重問題的研究[J];貴州體育科技;2007年02期

9 吳正國;;唾液檢測在體育領(lǐng)域的應(yīng)用[J];長治學(xué)院學(xué)報;2009年05期

10 彭劍淳,劉曉達(dá),丁曉萍,付占江,王全立;可見光光譜法評價膠體金粒徑及分布[J];軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院院刊;2000年03期

中國博士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫 前1條

1 武桂新;運動性低血睪酮與睪酮合成的酶及血液中睪酮分布特點[D];北京體育大學(xué);2000年

中國碩士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫 前9條

1 孫紅英;膠體金免疫層析方法對NSE和CEA進行聯(lián)合定量檢測[D];上海師范大學(xué);2011年

2 高鵬;萊克多巴胺膠體金試紙條的研制及生產(chǎn)線設(shè)計[D];南昌大學(xué);2011年

3 戴榮四;雞新城疫免疫膠體金診斷技術(shù)的研究[D];湖南農(nóng)業(yè)大學(xué);2004年

4 馮梁;磺胺二甲嘧啶膠體金免疫層析試紙條的研制[D];中國農(nóng)業(yè)大學(xué);2005年

5 李忠秋;牛初乳IgG含量測定及免疫膠體金半定量法的建立與應(yīng)用[D];東北農(nóng)業(yè)大學(xué);2005年

6 吳海波;O型口蹄疫病毒單克隆抗體的研制[D];中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院;2006年

7 郭一瓊;人絨毛促性腺激素（hCG）免疫層析試紙條的研究與開發(fā)[D];天津大學(xué);2007年

8 趙海鋒;嗎啡膠體金免疫層析試紙條的研究與開發(fā)[D];天津大學(xué);2007年

9 王娟娟;游泳項目不同訓(xùn)練安排及訓(xùn)練效果的觀察[D];北京體育大學(xué);2012年

  本文關(guān)鍵詞：男性血睪酮半定量檢測膠體金免疫層析試紙條的研制，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

本文編號：336141