目的:本實驗通過檢測大鼠肌肉組織挫傷后自噬相關(guān)蛋白BECN1、LC3和p62的表達(dá)變化情況,并與未損傷、死后挫傷的肌肉組織中這三種蛋白的表達(dá)量進行比較,以探索自噬是否可作為生活反應(yīng)進行生前傷和死后傷的鑒別。方法:隨機將12只健康成年雄性Sprague-Dewley大鼠分為未損傷的對照組、損傷后2h、8h和24h組（n=3）,制備大鼠右后肢損傷模型。雙重免疫熒光檢測自噬蛋白BECN1、LC3和p62的表達(dá)以驗證損傷是否能誘導(dǎo)肌肉組織發(fā)生自噬。隨后,再取72只大鼠（同上）隨機分為未損傷的對照組、生前傷0.5h、1h、2h、4h、8h、16h和24h組以及死后損傷0.5h、1h、2h和4h組（n=6）,制備大鼠右后肢損傷模型（同上）,正常對照組取大鼠死后1-9d的對側(cè)肌肉組織。Western blotting檢測三組中所有樣本中的三種自噬蛋白的相對表達(dá)量,以及蛋白在不同死后時間的相對含量。結(jié)果:雙重免疫熒光結(jié)果顯示大鼠骨骼肌在損傷后自噬蛋白BECN1、LC3和p62的熒光信號增強,其中BECN1和p62在損傷8h后平均熒光強度達(dá)最大,LC3在損傷2h即達(dá)最大。Western blotting... 

【文章來源】：山西醫(yī)科大學(xué)山西省

【文章頁數(shù)】：55 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

BCA法測9個蛋白標(biāo)準(zhǔn)品的標(biāo)準(zhǔn)曲線

9圖 2 Tissue FAXS 200 StrataQuest 分析大鼠肌肉組織的層黏連蛋白和細(xì)胞核熒光信號圖 2A 正常對照組的大鼠肌肉組織形態(tài) 圖 2B 損傷后 8 h 的大鼠肌肉組織形態(tài) 其中 Laminin（層黏連蛋白）顯示紅色熒光，細(xì)胞核顯示藍(lán)色熒光。

山西醫(yī)科大學(xué)碩士學(xué)位論文2.1.2 大鼠損傷區(qū)肌肉組織細(xì)胞核數(shù)量變化情況Tissue FAXS200 在識別層黏連蛋白的同時也分別計數(shù)了未損傷的對照組、損傷后 2h、8h 和 24h 的大鼠肌肉組織 500×500um2內(nèi)細(xì)胞核的數(shù)量（詳見表 3）。根據(jù)細(xì)胞核面積大小不同進行計數(shù)，如圖 3 所示。其中圖 3A 散點圖的橫坐標(biāo)是細(xì)胞核面積，縱坐標(biāo)是細(xì)胞核的熒光強度，Gate4（藍(lán)色線框）中的細(xì)胞核對應(yīng)著坐標(biāo)軸中相應(yīng)的核面積和熒光強度，在熒光分析圖中則自動用藍(lán)色的線條圈出；Gate4 之外的細(xì)胞核，軟件自動用黃色線條圈出。對不同損傷時間的大鼠肌肉組織細(xì)胞核進行計數(shù)（圖 3B）并統(tǒng)計分析（圖 3C）發(fā)現(xiàn)大鼠肌肉組織在損傷 8h 后細(xì)胞核數(shù)量開始增加，并且在損傷 24h 后細(xì)胞核數(shù)量明顯增加（n≥3）。

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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本文編號：3298755