目的：研究放射治療促進肺腺癌細胞分泌的外泌體攜帶microRNA-23a對人臍靜脈內(nèi)皮細胞（HUVEC）增殖遷移的影響及其作用機制。方法：選取HEK293細胞、肺腺癌A549、H1299細胞為外泌體來源,HUVEC作為外泌體受體細胞,實驗分組為：HEK293細胞外泌體組,腺癌細胞外泌體組,腺癌細胞外泌體組（4Gy X射線）,并采用microRNA inhibitor對miRNA-23a表達進行敲降。各組采用CCK8、Ki67染色等方法檢測HUVEC的增殖能力；通過劃痕實驗及transwell小室實驗比較各組HUVEC的遷移能力。采用real timePCR比較各組microRNA-23a、PTEN等分子的表達,采用Wetern Blot檢測各組PT EN、磷酸化AKT （p-AKT）等分子的變化,分析其中機制。結(jié)果：本實驗發(fā)現(xiàn)肺腺癌細胞外泌體可促進HUVEC的增殖及遷移,在肺腺癌細胞受到照射后（4Gy X射線）,這種促進作用得到進一步增強。Real time PCR結(jié)果提示肺腺癌細胞照射之后,microRNA-23a的表達上調(diào),同時其外泌體中的microRNA-23a的含量也得到上調(diào),... 

【文章來源】：武漢大學湖北省 211工程院校 985工程院校 教育部直屬院校

【文章頁數(shù)】：87 頁

【學位級別】：博士

【部分圖文】：

圖１載體圖譜??設計擴增引物如下：?Ｓ??ｈ－ＰＴＥＮ－３’ＵＴＲ－巧Ｘｈｏｌ）：?ＧＣＣＧＣＣＴＣＧＡＧＴＣＣＡＣＣＣＴＴＴＴＧＡＣＣＴＴＡＣＡＣ??

進行１８個循環(huán)；ＰＣ民反應循環(huán)后７２‘Ｃ繼續(xù)延伸７ｍｉｎ，然后４°Ｃ保存。??待ＰＣ民反應完畢之后，�。到校校茫耶a(chǎn)物進行１．５％瓊脂糖電泳分析，結(jié)果如下圖??（圖２），圖中可從看出，實際結(jié)果擴增大小與理論推算的大小相符。??２５??

于３７‘Ｃ條件下培養(yǎng)１２－１６小時。??上的單菌落，溶到３叫水中，�。埃到凶瞿０�，進行ＰＣＲ。，其中包含２．５ｍＭｄＮＴＰｍｉｘｌ＾ｉｌ，２５ｍＭＭｇＣｌ２ｌ．６＾，，?Ｔａｑ?ＤＮＡ?聚合酶（２．５Ｕ／［ｊＪ）?０．３｜ｉｌ，?ＤＮＡ?模板０．５下游引物（ｌＯｍＭ）各０．５叫，并且用滅菌水補足該整為如下模式，預變性：９５’Ｃ?３ｍｉｎ；變性：循環(huán)內(nèi)９８‘Ｃ退火，７２°Ｃ時延伸２分鐘；二十個循環(huán)；當設置的ＰＣＲ反°Ｃ繼續(xù)延伸Ｈ分鐘，之后在４’Ｃ下保存。??五個菌落，進行ＰＣＲ。完成后，�。到挟a(chǎn)物在１．５％瓊脂糖算到載體上游及載體下游引物，理論上擴增條帶大小中實驗結(jié)果實際得到的擴増條帶如下圖（圖３），由圖可計算的大小相一????

【參考文獻】：
期刊論文
[1]HIF-1α與惡性腫瘤放療敏感性關系的研究進展[J]. 王寒松.  癌癥進展. 2015(02)
[2]大腸腺癌組織中的Glut1和HIF-1α蛋白表達及其與癌細胞增殖的相關性[J]. 周玉玲,鄧長生.  癌癥. 2005(06)
[3]缺氧誘導因子-1α的表達與胰腺癌細胞增殖和凋亡研究[J]. 李力,李玉軍.  實用癌癥雜志. 2005(01)



本文編號：3286113