目的：研究放射治療促進(jìn)肺腺癌細(xì)胞分泌的外泌體攜帶microRNA-23a對(duì)人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞（HUVEC）增殖遷移的影響及其作用機(jī)制。方法：選取HEK293細(xì)胞、肺腺癌A549、H1299細(xì)胞為外泌體來(lái)源,HUVEC作為外泌體受體細(xì)胞,實(shí)驗(yàn)分組為：HEK293細(xì)胞外泌體組,腺癌細(xì)胞外泌體組,腺癌細(xì)胞外泌體組（4Gy X射線）,并采用microRNA inhibitor對(duì)miRNA-23a表達(dá)進(jìn)行敲降。各組采用CCK8、Ki67染色等方法檢測(cè)HUVEC的增殖能力；通過(guò)劃痕實(shí)驗(yàn)及transwell小室實(shí)驗(yàn)比較各組HUVEC的遷移能力。采用real timePCR比較各組microRNA-23a、PTEN等分子的表達(dá),采用Wetern Blot檢測(cè)各組PT EN、磷酸化AKT （p-AKT）等分子的變化,分析其中機(jī)制。結(jié)果：本實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)肺腺癌細(xì)胞外泌體可促進(jìn)HUVEC的增殖及遷移,在肺腺癌細(xì)胞受到照射后（4Gy X射線）,這種促進(jìn)作用得到進(jìn)一步增強(qiáng)。Real time PCR結(jié)果提示肺腺癌細(xì)胞照射之后,microRNA-23a的表達(dá)上調(diào),同時(shí)其外泌體中的microRNA-23a的含量也得到上調(diào),... 

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【學(xué)位級(jí)別】：博士

【部分圖文】：

圖１載體圖譜??設(shè)計(jì)擴(kuò)增引物如下：?Ｓ??ｈ－ＰＴＥＮ－３’ＵＴＲ－巧Ｘｈｏｌ）：?ＧＣＣＧＣＣＴＣＧＡＧＴＣＣＡＣＣＣＴＴＴＴＧＡＣＣＴＴＡＣＡＣ??

進(jìn)行１８?jìng)�(gè)循環(huán)；ＰＣ民反應(yīng)循環(huán)后７２‘Ｃ繼續(xù)延伸７ｍｉｎ，然后４°Ｃ保存。??待ＰＣ民反應(yīng)完畢之后，取５叫ＰＣＲ產(chǎn)物進(jìn)行１．５％瓊脂糖電泳分析，結(jié)果如下圖??（圖２），圖中可從看出，實(shí)際結(jié)果擴(kuò)增大小與理論推算的大小相符。??２５??

于３７‘Ｃ條件下培養(yǎng)１２－１６小時(shí)。??上的單菌落，溶到３叫水中，�。埃到凶瞿０澹M(jìn)行ＰＣＲ。，其中包含２．５ｍＭｄＮＴＰｍｉｘｌ＾ｉｌ，２５ｍＭＭｇＣｌ２ｌ．６＾，，?Ｔａｑ?ＤＮＡ?聚合酶（２．５Ｕ／［ｊＪ）?０．３｜ｉｌ，?ＤＮＡ?模板０．５下游引物（ｌＯｍＭ）各０．５叫，并且用滅菌水補(bǔ)足該整為如下模式，預(yù)變性：９５’Ｃ?３ｍｉｎ；變性：循環(huán)內(nèi)９８‘Ｃ退火，７２°Ｃ時(shí)延伸２分鐘；二十個(gè)循環(huán)；當(dāng)設(shè)置的ＰＣＲ反°Ｃ繼續(xù)延伸Ｈ分鐘，之后在４’Ｃ下保存。??五個(gè)菌落，進(jìn)行ＰＣＲ。完成后，�。到挟a(chǎn)物在１．５％瓊脂糖算到載體上游及載體下游引物，理論上擴(kuò)增條帶大小中實(shí)驗(yàn)結(jié)果實(shí)際得到的擴(kuò)増條帶如下圖（圖３），由圖可計(jì)算的大小相一????

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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本文編號(hào)：3286113