目的本實驗旨在擴增BMP2和TGFβ3基因,并構建含有BMP2和TGF-β3的雙基因真核表達載體p工ERS-BMP2-TGFβ3,為研究雙基因共轉染間充質干細胞及其在體內的表達情況和可能存在的協(xié)同效應奠定基礎。方法首先,用PCR方法從質粒pGEMT/BMP2中擴增出BMP2基因全長,并將其連入雙基因真核表達載體pIRES,篩選出陽性重組質粒pIRES-BMP2；其次,用RT-PCR的方法從人胚胎組織擴增出TGFβ3基因全長,將TGFβ3基因連入質粒pIRES-BMP2；用酶切的方法篩選出陽性重組質粒pIRES-BMP2-TGFβ3,并進行測序鑒定。結果成功的克隆出BMP2和TGFβ3基因,并將其連接到目的載體pIRES中,雙酶切和質粒測序證實連接正確,且基因的開放閱讀框架正確,pIRES-BMP2-TGFβ3雙基因真核表達載體構建成功。結論利用PCR, DNA重組等分子生物學技術,成功構建了雙基因真核表達載體pIRES-BMP2-TGFβ3,為進一步研究雙基因共轉染間充質干細胞,探討其在體內的表達情況,對間充質干細胞成骨分化的影響及可能存在的協(xié)同效應奠定基礎。 

【文章來源】：青島大學山東省

【文章頁數(shù)】：38 頁

【學位級別】：碩士

【部分圖文】：

BMPZ和TGFp3基因擴增產物

圖3p工RESesBMPZ一TGFp3重組質粒酶切電泳a.M為Mark，b.1為pIRES一BMPZ一TGFp3用EeoRI酶e.2為pIRES一BMPZ用EeoRI酶切，d.3為pIRES用EeoRI酶切MPZ一TGFp3重組質粒測序一此。，:此幾︸一一一一‘︹七!汁廿門川比刀甲…|日門0沉|”11日l日11川川比一朋洲川州的﹁11一860GG月..r3一八︾l，fr川川曰曰月日日川川川日﹃|

【參考文獻】：
期刊論文
[1]人骨髓間充質干細胞體外分離培養(yǎng)及其生物學特性[J]. 鄭有華,何滔,匡世軍,張志光,蘇凱.  國際醫(yī)藥衛(wèi)生導報. 2010(02)
[2]BMP-2和TGF-β1在兔下頜牽張成骨過程中的表達及意義[J]. 陳迎男,蘆平,張力群.  中國老年學雜志. 2009(14)
[3]胰島素樣生長因子1基因轉染骨髓基質干細胞治療裸鼠骨缺損[J]. 周海斌,董啟榕,周曉中,鄭祖根.  中國組織工程研究與臨床康復. 2009(20)
[4]殼聚糖介導真核雙表達質粒pIRES-hVEGF︱2︱cDNA/hBMP-4轉染兔骨髓間充質干細胞向成骨細胞分化[J]. 李樹寶,潘鋒,白欣,王幫河,丁浩,汪春蘭,何金生,張梅,趙宇.  中國組織工程研究與臨床康復. 2009(01)
[5]腺病毒介導的骨形態(tài)發(fā)生蛋白-2基因轉移促進人間充質干細胞成骨化[J]. 孫志波,楊述華,禹志宏,王家寧,鄒海兵,張磊.  鄖陽醫(yī)學院學報. 2008(03)
[6]bFGF和BMP-2聯(lián)合應用對體外培養(yǎng)兔骨髓間充質干細胞增殖與骨向分化的影響[J]. 李鵬,龍潔,湯煒,蔣紅梅,田衛(wèi)東,劉磊,林云鋒,王杭.  現(xiàn)代生物醫(yī)學進展. 2008(06)
[7]BMP-2活性多肽體外定向誘導大鼠BMSCs向成骨方向分化的實驗研究[J]. 段智霞,鄭啟新,郭曉東,白玉,袁泉,陳順廣.  中國矯形外科雜志. 2007(21)
[8]骨髓間質干細胞結合骨形態(tài)發(fā)生蛋白促進兔椎間關節(jié)融合的實驗研究[J]. 陳為堅,李貴濤,羅狄鑫,陳錫然,陳造宏,武光勤,葉偉,李晶.  中國矯形外科雜志. 2007(13)
[9]人骨形成蛋白7基因修飾的兔骨髓基質干細胞異位成骨實驗[J]. 閆露,羅二平,魚兵,栗艷,沈敏,范清宇.  中國矯形外科雜志. 2007(02)
[10]堿性成纖維細胞生長因子對體外培養(yǎng)的兔骨髓基質細胞生長特性的影響[J]. 王志勇,陳增海,于勝吉.  山東大學學報(醫(yī)學版). 2006(11)



本文編號：3258742