目的本實(shí)驗(yàn)旨在擴(kuò)增BMP2和TGFβ3基因,并構(gòu)建含有BMP2和TGF-β3的雙基因真核表達(dá)載體p工ERS-BMP2-TGFβ3,為研究雙基因共轉(zhuǎn)染間充質(zhì)干細(xì)胞及其在體內(nèi)的表達(dá)情況和可能存在的協(xié)同效應(yīng)奠定基礎(chǔ)。方法首先,用PCR方法從質(zhì)粒pGEMT/BMP2中擴(kuò)增出BMP2基因全長(zhǎng),并將其連入雙基因真核表達(dá)載體pIRES,篩選出陽(yáng)性重組質(zhì)粒pIRES-BMP2；其次,用RT-PCR的方法從人胚胎組織擴(kuò)增出TGFβ3基因全長(zhǎng),將TGFβ3基因連入質(zhì)粒pIRES-BMP2；用酶切的方法篩選出陽(yáng)性重組質(zhì)粒pIRES-BMP2-TGFβ3,并進(jìn)行測(cè)序鑒定。結(jié)果成功的克隆出BMP2和TGFβ3基因,并將其連接到目的載體pIRES中,雙酶切和質(zhì)粒測(cè)序證實(shí)連接正確,且基因的開(kāi)放閱讀框架正確,pIRES-BMP2-TGFβ3雙基因真核表達(dá)載體構(gòu)建成功。結(jié)論利用PCR, DNA重組等分子生物學(xué)技術(shù),成功構(gòu)建了雙基因真核表達(dá)載體pIRES-BMP2-TGFβ3,為進(jìn)一步研究雙基因共轉(zhuǎn)染間充質(zhì)干細(xì)胞,探討其在體內(nèi)的表達(dá)情況,對(duì)間充質(zhì)干細(xì)胞成骨分化的影響及可能存在的協(xié)同效應(yīng)奠定基礎(chǔ)。 

【文章來(lái)源】：青島大學(xué)山東省

【文章頁(yè)數(shù)】：38 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

BMPZ和TGFp3基因擴(kuò)增產(chǎn)物

圖3p工RESesBMPZ一TGFp3重組質(zhì)粒酶切電泳a.M為Mark，b.1為pIRES一BMPZ一TGFp3用EeoRI酶e.2為pIRES一BMPZ用EeoRI酶切，d.3為pIRES用EeoRI酶切MPZ一TGFp3重組質(zhì)粒測(cè)序一此。，:此幾︸一一一一‘︹七!汁廿門川比刀甲…|日門0沉|”11日l(shuí)日11川川比一朋洲川州的﹁11一860GG月..r3一八︾l，fr川川曰曰月日日川川川日﹃|

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]人骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞體外分離培養(yǎng)及其生物學(xué)特性[J]. 鄭有華,何滔,匡世軍,張志光,蘇凱.  國(guó)際醫(yī)藥衛(wèi)生導(dǎo)報(bào). 2010(02)
[2]BMP-2和TGF-β1在兔下頜牽張成骨過(guò)程中的表達(dá)及意義[J]. 陳迎男,蘆平,張力群.  中國(guó)老年學(xué)雜志. 2009(14)
[3]胰島素樣生長(zhǎng)因子1基因轉(zhuǎn)染骨髓基質(zhì)干細(xì)胞治療裸鼠骨缺損[J]. 周海斌,董啟榕,周曉中,鄭祖根.  中國(guó)組織工程研究與臨床康復(fù). 2009(20)
[4]殼聚糖介導(dǎo)真核雙表達(dá)質(zhì)粒pIRES-hVEGF︱2︱cDNA/hBMP-4轉(zhuǎn)染兔骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞向成骨細(xì)胞分化[J]. 李樹(shù)寶,潘鋒,白欣,王幫河,丁浩,汪春蘭,何金生,張梅,趙宇.  中國(guó)組織工程研究與臨床康復(fù). 2009(01)
[5]腺病毒介導(dǎo)的骨形態(tài)發(fā)生蛋白-2基因轉(zhuǎn)移促進(jìn)人間充質(zhì)干細(xì)胞成骨化[J]. 孫志波,楊述華,禹志宏,王家寧,鄒海兵,張磊.  鄖陽(yáng)醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào). 2008(03)
[6]bFGF和BMP-2聯(lián)合應(yīng)用對(duì)體外培養(yǎng)兔骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞增殖與骨向分化的影響[J]. 李鵬,龍潔,湯煒,蔣紅梅,田衛(wèi)東,劉磊,林云鋒,王杭.  現(xiàn)代生物醫(yī)學(xué)進(jìn)展. 2008(06)
[7]BMP-2活性多肽體外定向誘導(dǎo)大鼠BMSCs向成骨方向分化的實(shí)驗(yàn)研究[J]. 段智霞,鄭啟新,郭曉東,白玉,袁泉,陳順廣.  中國(guó)矯形外科雜志. 2007(21)
[8]骨髓間質(zhì)干細(xì)胞結(jié)合骨形態(tài)發(fā)生蛋白促進(jìn)兔椎間關(guān)節(jié)融合的實(shí)驗(yàn)研究[J]. 陳為堅(jiān),李貴濤,羅狄鑫,陳錫然,陳造宏,武光勤,葉偉,李晶.  中國(guó)矯形外科雜志. 2007(13)
[9]人骨形成蛋白7基因修飾的兔骨髓基質(zhì)干細(xì)胞異位成骨實(shí)驗(yàn)[J]. 閆露,羅二平,魚兵,栗艷,沈敏,范清宇.  中國(guó)矯形外科雜志. 2007(02)
[10]堿性成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子對(duì)體外培養(yǎng)的兔骨髓基質(zhì)細(xì)胞生長(zhǎng)特性的影響[J]. 王志勇,陳增海,于勝吉.  山東大學(xué)學(xué)報(bào)(醫(yī)學(xué)版). 2006(11)



本文編號(hào)：3258742