目的觀察腦挫傷后神經(jīng)細(xì)胞凋亡DNA片段化和含量變化與損傷時(shí)間的相關(guān)性，探索損傷時(shí)間推斷的新方法。方法①建立大鼠自由落體打擊腦損傷模型；②對(duì)不同損傷時(shí)間組的大鼠腦挫傷組織進(jìn)行TUNEL、Caspase-3免疫組化、Feulgen’s DNA染色，結(jié)合圖像分析技術(shù)和統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，探討腦挫傷后神經(jīng)細(xì)胞凋亡、DNA片段化和含量的時(shí)序性變化；③提取大鼠腦挫傷組織DNA進(jìn)行瓊脂糖凝膠電泳分析，觀察DNA片段化隨損傷時(shí)間的變化特點(diǎn)；④對(duì)117例顱腦損傷致死案例進(jìn)行回顧性分析，探討其法醫(yī)學(xué)特點(diǎn)；⑤選擇不同損傷時(shí)間的人腦挫傷組織同樣進(jìn)行TUNEL、Caspase-3免疫組化、Feulgen’s DNA染色和分析，觀察上述指標(biāo)與損傷時(shí)間的關(guān)系。結(jié)果①所建立的自由落體打擊大鼠腦挫傷模型與法醫(yī)學(xué)中加速性腦損傷相似，可以用于腦損傷實(shí)驗(yàn)和法醫(yī)學(xué)研究。②大鼠腦挫傷后神經(jīng)細(xì)胞凋亡DNA片段化和含量變化（陽(yáng)性率和陽(yáng)性細(xì)胞的IOD），均與損傷時(shí)間呈線性關(guān)系，并可以導(dǎo)出直線方程應(yīng)用于法醫(yī)學(xué)研究。③大鼠腦挫傷組織DNA片段化6h以后出現(xiàn)梯狀譜帶，DNA片段化程度和片段大小隨損傷時(shí)間而變化，但無(wú)明顯線性關(guān)系。④顱腦損傷死者在年齡... 

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【學(xué)位級(jí)別】：博士

【部分圖文】：

不同損傷時(shí)間大鼠腦挫傷半影區(qū)Caspas

提取ON^分相操作方法示意圖(摘自杭州v-gen.生化技術(shù))。heblockdiagramofoPerationofPhaseeontrastinDNAextraductderectionbyV-genecomPany).Filter，在濾液中加入450p1Buffe:B，混合均勻。DNA一PrePTube置于2mlMicrofugeTube中，把上述repTube中，12000Xg離心lmin。濾液，將DNA一prePTube放置回到原2mlMicrofugefferwl(洗滌液)，1200oXg離心lm訊。濾液，將DNA一prepTube放置回到ZmlMierofugeT加入無(wú)水乙醇的BufferWZ(洗滌液)，12000Xg離

腦挫傷2h和4h組僅在電泳起始位置有一條DNA帶出現(xiàn)，分子量大于1030bP;6h組自電泳起始端向正極端開(kāi)始出現(xiàn)數(shù)條梯狀DNA條帶，主要是分子量為1000bp左右的DNA大片段;12h和24h組，出現(xiàn)一系列典型的梯狀nNA條帶(nNAladder)，分子量在200一1030bp之間的惻A片段條帶清晰;48h、72h和96h組，電泳起始端分子量大于1030bp的DNA片段條帶逐漸減弱、消失，梯狀DNA條帶主要表現(xiàn)為DNA小片段，在分子量600一800bp之間條帶清晰。正常對(duì)照和手術(shù)對(duì)照組僅在電泳起始位置有大分子DNA片段條帶。腦挫傷組與正常和手術(shù)開(kāi)窗對(duì)照組差異顯著，見(jiàn)圖15。

【參考文獻(xiàn)】：
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