目的觀察腦挫傷后神經細胞凋亡DNA片段化和含量變化與損傷時間的相關性，探索損傷時間推斷的新方法。方法①建立大鼠自由落體打擊腦損傷模型；②對不同損傷時間組的大鼠腦挫傷組織進行TUNEL、Caspase-3免疫組化、Feulgen’s DNA染色，結合圖像分析技術和統(tǒng)計學分析，探討腦挫傷后神經細胞凋亡、DNA片段化和含量的時序性變化；③提取大鼠腦挫傷組織DNA進行瓊脂糖凝膠電泳分析，觀察DNA片段化隨損傷時間的變化特點；④對117例顱腦損傷致死案例進行回顧性分析，探討其法醫(yī)學特點；⑤選擇不同損傷時間的人腦挫傷組織同樣進行TUNEL、Caspase-3免疫組化、Feulgen’s DNA染色和分析，觀察上述指標與損傷時間的關系。結果①所建立的自由落體打擊大鼠腦挫傷模型與法醫(yī)學中加速性腦損傷相似，可以用于腦損傷實驗和法醫(yī)學研究。②大鼠腦挫傷后神經細胞凋亡DNA片段化和含量變化（陽性率和陽性細胞的IOD），均與損傷時間呈線性關系，并可以導出直線方程應用于法醫(yī)學研究。③大鼠腦挫傷組織DNA片段化6h以后出現(xiàn)梯狀譜帶，DNA片段化程度和片段大小隨損傷時間而變化，但無明顯線性關系。④顱腦損傷死者在年齡... 

【文章來源】：四川大學四川省 211工程院校 985工程院校 教育部直屬院校

【文章頁數(shù)】：135 頁

【學位級別】：博士

【部分圖文】：

不同損傷時間大鼠腦挫傷半影區(qū)Caspas

提取ON^分相操作方法示意圖(摘自杭州v-gen.生化技術)。heblockdiagramofoPerationofPhaseeontrastinDNAextraductderectionbyV-genecomPany).Filter，在濾液中加入450p1Buffe:B，混合均勻。DNA一PrePTube置于2mlMicrofugeTube中，把上述repTube中，12000Xg離心lmin。濾液，將DNA一prePTube放置回到原2mlMicrofugefferwl(洗滌液)，1200oXg離心lm訊。濾液，將DNA一prepTube放置回到ZmlMierofugeT加入無水乙醇的BufferWZ(洗滌液)，12000Xg離

腦挫傷2h和4h組僅在電泳起始位置有一條DNA帶出現(xiàn)，分子量大于1030bP;6h組自電泳起始端向正極端開始出現(xiàn)數(shù)條梯狀DNA條帶，主要是分子量為1000bp左右的DNA大片段;12h和24h組，出現(xiàn)一系列典型的梯狀nNA條帶(nNAladder)，分子量在200一1030bp之間的惻A片段條帶清晰;48h、72h和96h組，電泳起始端分子量大于1030bp的DNA片段條帶逐漸減弱、消失，梯狀DNA條帶主要表現(xiàn)為DNA小片段，在分子量600一800bp之間條帶清晰。正常對照和手術對照組僅在電泳起始位置有大分子DNA片段條帶。腦挫傷組與正常和手術開窗對照組差異顯著，見圖15。

【參考文獻】：
期刊論文
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本文編號：3253041