目前，找尋和定量不同來源或不同時期的細(xì)胞、組織及體液的差異蛋白質(zhì)正成為蛋白質(zhì)組學(xué)研究的焦點。和mRNA表達(dá)分析技術(shù)相比，蛋白表達(dá)差異分析更為直觀準(zhǔn)確地提供了正常和疾病細(xì)胞中全部蛋白質(zhì)的變化信息，為發(fā)現(xiàn)疾病相關(guān)蛋白質(zhì)標(biāo)志物從而篩選藥物作用的靶標(biāo)提供了新的途徑。因此，定量蛋白質(zhì)組學(xué)在潛在藥物靶標(biāo)的開發(fā)上越來越受到國際制藥界的垂青。二維凝膠電泳作為傳統(tǒng)的蛋白定量方法，由于靈敏度的局限性及無法實現(xiàn)自動化，費時費力而逐漸被穩(wěn)定同位素標(biāo)記與液質(zhì)聯(lián)用技術(shù)相結(jié)合的定量方法取代。本研究首先建立并優(yōu)化了¹⁸O穩(wěn)定同位素標(biāo)記定量蛋白質(zhì)組研究技術(shù)，考察了標(biāo)記肽段定量的動態(tài)范圍及在復(fù)雜貯存條件下的穩(wěn)定性，為此方法用于復(fù)雜體系蛋白質(zhì)相對定量研究奠定了很好的基礎(chǔ)。然后結(jié)合高準(zhǔn)確度高靈敏度LTQ-FT質(zhì)譜儀的數(shù)據(jù)特點，開發(fā)¹⁸O標(biāo)記方法的MSOQ定量軟件，實現(xiàn)了高通量，高可信度的數(shù)據(jù)處理。最后，本研究將¹⁸O穩(wěn)定同位素標(biāo)記技術(shù)和MSOQ軟件應(yīng)用于人肝臟癌旁和癌組織間隙液差異蛋白質(zhì)組定量分析，初步確定了91種差異表達(dá)的蛋白質(zhì)（P＜0.05），其中腫瘤蛋白... 

【文章來源】：沈陽藥科大學(xué)遼寧省

【文章頁數(shù)】：55 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

MSOQ軟件界面功能介紹

Rank而一—~~一c0lbr—;l000KKK圖3一 3MsOQ軟件的參數(shù)設(shè)置為了評價Ms0Q軟件的定量結(jié)果的準(zhǔn)確度及精確度，選取馬心肌紅蛋白，牛血清白蛋白，轉(zhuǎn)鐵蛋白，乙醇脫氫酶，卵清蛋白，溶菌酶，細(xì)胞色素C及脫梭酶等8種標(biāo)準(zhǔn)蛋白混合酶切，酶切方法為:首先將八種蛋白質(zhì)配制成500加OFul的工作液，各取lul(即500加ol)共sul蛋白混合液，凍干，(酶切處理見2.2.4.1制備馬心肌紅蛋白及牛血清白蛋白膚段)，將所得膚段混合物平均分為兩份，凍干;一份進(jìn)行‘80同位素標(biāo)記，另一份進(jìn)行‘“o同位素標(biāo)記(標(biāo)記處理見2.2.4.2‘80同位素標(biāo)記馬心肌紅蛋白膚段);將‘60和‘80標(biāo)記的膚段1:1混合;LTQ一FT質(zhì)譜鑒定及定量分析。3.2.3.2組織間隙液的蛋白濃度定量此部分工作由孫薇博士完成

3.3.2.2鑒定結(jié)果分析圖3一6相同的’“o和’“o標(biāo)記膚段在數(shù)據(jù)庫中的檢索結(jié)果分析選取了癌組織樣本SDS一PAGE的兩個條帶組分A，B，按照圖3一IA的評價路線進(jìn)行對照實驗。數(shù)據(jù)庫檢索結(jié)果都出現(xiàn)了:(1)部分蛋白僅在‘60或’80標(biāo)記組分單獨鑒定到;(2盧。組分鑒定的蛋白數(shù)量多于‘80組分的(如圖3一6)。這與鑒定蛋白數(shù)應(yīng)該重合的理論結(jié)果有偏差，故以’60和’80的分別鑒定結(jié)果所確定的差異蛋白有假陽性。這里的原因很多，比如在膚段比較密集的質(zhì)量數(shù)區(qū)，質(zhì)譜選擇母離子做二級碎裂(串聯(lián)質(zhì)譜)時，成對的膚段往往只有一個被選入母離子列表，多以輕鏈為主，因為重鏈易受輕鏈干擾;因為樣本極其復(fù)雜，某些膚段’80標(biāo)記未成功;限于95%的置信度，mascot數(shù)據(jù)庫檢索結(jié)果的誤匹配。如圖3一7所示，紅色星號為‘80膚段

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]比較蛋白質(zhì)組學(xué)研究中的穩(wěn)定同位素標(biāo)記技術(shù)[J]. 劉新,應(yīng)萬濤,錢小紅.  化學(xué)通報. 2007(02)
[2]差異蛋白質(zhì)組學(xué)研究技術(shù)新進(jìn)展[J]. 孫薇,賀福初.  化學(xué)通報. 2005(06)



本文編號：3111742