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SCN5A基因微測序檢測體系的構(gòu)建及其在心源性猝死檢測中的應用

發(fā)布時間:2020-12-09 13:40
  目的:1、利用離子通道的基因SCN5A上心源性猝死相關突變建立一種SNaPshot微測序試劑盒;2、應用建立的SCN5A基因微測序試劑盒檢測并了解山西人群SCD易感突變的類型特征。方法:本方法的原理結(jié)合多重復合PCR技術(shù)和SNaPshot微測序技術(shù)檢測心源性猝死相關離子通道基因SCN5A上的45個突變位點:(1)結(jié)合國內(nèi)外已發(fā)表的文獻和NCBI數(shù)據(jù)庫篩選得到與心源性猝死(SCD)相關的SNP位點;(2)對含有SNP位點的一對PCR引物進行單獨PCR擴增,以驗證個擴增產(chǎn)物的特異性。其中對上下游引物之間最少含有一個待測SNP,最多含有5個待測SNP;(3)為了將擴增效率最大化,將30對引物分成兩個體系(體系1st含14對引物,體系2nd含16對引物)分別進行多重PCR擴增,得到復合擴增產(chǎn)物。(4)對兩組復合擴增產(chǎn)物所包含的SNP分別進行檢測(體系1st含有22個SNP,體系2nd含有23個SNP),其原理結(jié)合了SNaPshot微測序技術(shù)和毛細管電泳(CE)技術(shù)檢測突變堿基的類型和位置,從而確定樣本在SC... 

【文章來源】:山西醫(yī)科大學山西省

【文章頁數(shù)】:53 頁

【學位級別】:碩士

【部分圖文】:

SCN5A基因微測序檢測體系的構(gòu)建及其在心源性猝死檢測中的應用


圖A體系1中14對PCR產(chǎn)物由瓊脂糖電泳確認;圖B體系2中16對PCR產(chǎn)物由瓊脂糖電泳確認

毛細管電泳,分型,體系


圖 3 圖 A 體系 1 中 22 個 SNP 的分型由 3130 毛細管電泳確認圖 B 體系 2 中 23 個 SNP 的分型由 3130 毛細管電泳確認。Fig.3 A represents the typing result of 22 SNPs in reaction 1stconfirmed by CE;B represents the typing result of 23 SNPs in reaction 2ndconfirmed by CE注:藍色代表鳥嘌呤(G)、綠色代表腺嘌呤(A)、黑色代表胞嘧啶(C)、紅色代表胸腺嘧啶(T).每個數(shù)字代表 SCN5A 上的一個 SNP, 1-22 共 22 個 SNP 是在反應體系 1st中完成的:1, S1937F 2, rs137854619 3, rs199473284 4, rs137854610 5, rs13785460266, rs199473240 7, rs199473607 8, rs375509048 9, rs199473609 10, rs4126134411, rs199473565 12, rs41310765 13, rs7626962 14, rs199473180 15, rs13785461116, rs199473143 17, rs199473142 18, rs72549410 19, rs28937318 20, rs19947309721, rs199473058 22, rs19947305423-45 共 23 個 SNP 是在反應體系 2nd中完成的:23, rs12720452 24, rs41315493 25, rs199473128 26, rs13785460627, rs199473118 28, rs199473133 29, rs199473622 30, rs20100273631, rs397514448 32, rs41311135 33, rs201641342 34, rs79472891035, rs397514450 36, rs794728902 37, rs727505158 38, rs79472890939, rs886041848, 40, rs794728931 41, rs397514446 42, rs1805124 43, rs19947360644, rs199473574 45, rs794728931

分型,樣本,反應體系,心源性猝死


圖 1 三組樣本 45 個 SNP 的 SNaPshot 分型結(jié)果Fig.1 The typing results in SNaPshot reaction with 45 SNPs in three groups.注:A: 健康個體組在反應體系 1st的 SNaPshot 分型結(jié)果;B: 健康個體組在反應體系 2nd的 SNaPshot 分型結(jié)果;C: 心源性猝死(SCD)組在反應體系 1st的 SNaPshot 分型結(jié)果;D: 心源性猝死(SCD)組在反應體系 2nd的 SNaPshot 分型結(jié)果。E: 非心源性猝死(non-SCD)組在反應體系 1st的 SNaPshot 分型結(jié)果;F: 非心源性猝死(non-SCD)組在體系 2nd的 SNaPshot 分型結(jié)果;圖 D 中的箭頭表示雜合突變 T>C(H558R ,rs1805124)。

【參考文獻】:
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本文編號:2906951

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