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MiR-200c調(diào)節(jié)放射性口腔黏膜炎的病理過(guò)程

發(fā)布時(shí)間:2020-12-09 04:38
  背景和目的:放射性口腔黏膜炎是接受放療的腫瘤病人,特別是頭頸腫瘤患者最常見的并發(fā)癥之一。它常常表現(xiàn)為嚴(yán)重的疼痛和潰瘍形成。它的發(fā)病過(guò)程包括五個(gè)階段:起始階段,初級(jí)損傷反應(yīng)階段,信號(hào)放大階段,潰瘍形成階段和愈合階段。但是,放射性口腔黏膜炎的病理過(guò)程中關(guān)鍵調(diào)控因子依然未知。在本研究中,我們揭示了 miR-200家族中的一員,miR-200c在調(diào)節(jié)放射性口腔黏膜炎的病理過(guò)程中發(fā)揮了重要作用。實(shí)驗(yàn)方法和結(jié)果:本研究建立放射性口腔黏膜炎小鼠模型,發(fā)現(xiàn)放射性口腔黏膜炎病理過(guò)程中,除了 miR-429,大部分 miR-200 家族成員(miR-200a、miR-200b、miR-200c、miR-141)表達(dá)顯著增高。原代培養(yǎng)人正常角化細(xì)胞電離輻射后miR-200c表達(dá)亦明顯增加。進(jìn)一步運(yùn)用miR-200c-3p-shRNA敲減人正常角化細(xì)胞miR-200c的表達(dá),發(fā)現(xiàn)電離輻射后敲減miR-200c的人正常角化細(xì)胞衰老顯著減少、細(xì)胞增殖能力明顯增強(qiáng)。電離輻射引起人正常角化細(xì)胞活性氧、p47蛋白明顯增加,但是在miR-200c敲減細(xì)胞中都被顯著抑制,相比于對(duì)照組細(xì)胞,miR-200c敲減細(xì)胞DNA雙鏈... 

【文章來(lái)源】:浙江大學(xué)浙江省 211工程院校 985工程院校 教育部直屬院校

【文章頁(yè)數(shù)】:59 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】:碩士

【部分圖文】:

MiR-200c調(diào)節(jié)放射性口腔黏膜炎的病理過(guò)程


圖2?MiR-200家族在?

細(xì)胞衰老,電離輻射,表型,細(xì)胞系


后表迗量沒(méi)有明顯改變,而miR-200a、miR-200b、miR-200c于IR后24小時(shí)表達(dá)??明顯升高,并持續(xù)到48小時(shí)。在NHK細(xì)胞中,miR-200c是整個(gè)家族中表達(dá)量最??高的,并于輻照后6小時(shí)表達(dá)即明顯增高(圖3A)。為進(jìn)一步研究miR-200c在??RIOM病理過(guò)程中發(fā)揮的作用,分別用編碼miR-200c特異性shRNA的慢病毒和??陰性對(duì)照病毒感染NHK,構(gòu)建了?miR-200c敲減的穩(wěn)定細(xì)胞系(NHK?/?miR-200c-)??和對(duì)照細(xì)胞系(NHK/Control)。IR后2、3、7天,在NHK/Control細(xì)胞系中,??miR-200c明顯表迗?jiān)黾,而NH?/?miR-200c-細(xì)胞系中,miR-200c表達(dá)量變化不??大(圖3B)。已有研究表明,IR會(huì)導(dǎo)致NHK壓力誘導(dǎo)的永久性衰老。我們發(fā)現(xiàn)??miR-200c敲減可以明顯抑制IR后細(xì)胞的p-半乳糖苷酶活性(衰老標(biāo)記),并且IR后??7天,miR-200c敲減細(xì)胞依然具有增殖活力,而82%對(duì)照細(xì)胞發(fā)生衰老(圖3C)。??細(xì)胞克隆形成實(shí)驗(yàn)是檢測(cè)細(xì)胞放射敏感性的金標(biāo)準(zhǔn)。觀察到IR后miR-200c敲減??細(xì)胞系的克隆形成率與植板率明顯高于對(duì)照細(xì)胞(圖3D)

電離輻射,細(xì)胞活性,細(xì)胞,焦點(diǎn)


氧(ROS)生成。因此,我們首先研究miR-200c對(duì)IR后ROS產(chǎn)生的影響。細(xì)胞??DHE染色后流式細(xì)胞儀檢測(cè)發(fā)現(xiàn)IR后4天和6天,NHK?/?Control細(xì)胞內(nèi)有明顯??的ROS生成,但NHK/miR-200c-細(xì)胞中ROS產(chǎn)生較對(duì)照細(xì)胞顯著降低(圖4A)。??IR后2、5、7天,NHK/Control細(xì)胞內(nèi)ROS產(chǎn)生所需的關(guān)鍵酶p47的蛋白表達(dá)??量明顯增加,但是NHK/miR-200c-細(xì)胞p47蛋白水平較對(duì)照細(xì)胞顯著降低(圖4B)。??為進(jìn)一步研究miR-200c敲減是否影響IR后的DNA損傷修復(fù),進(jìn)行彗星實(shí)驗(yàn)??和Y-H2AX免疫熒光染色,這兩種方法都是衡量DNA雙鏈斷裂水平的標(biāo)準(zhǔn)實(shí)驗(yàn)。??與NHK?/?Control細(xì)胞相比,IR后10小時(shí),NHK/miR-200c-細(xì)胞表現(xiàn)為更短的彗??尾和更小的尾部DNA含量百分比(圖4C)。另外,IR后NHK/Control細(xì)胞的??細(xì)胞核內(nèi)產(chǎn)生明顯的Y-H2AX焦點(diǎn),但在,NHK/miR-200c-細(xì)胞內(nèi)這種焦點(diǎn)明顯減??少(圖4D)。與Y-H2AX焦點(diǎn)結(jié)果相一致


本文編號(hào):2906288

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