發(fā)布時間：2020-10-21 01:33

　　 研究背景STR作為現(xiàn)今各法庭科學實驗室主要使用的重要遺傳標記,主要原因是它具有分布廣泛以及高度的遺傳多態(tài)性的優(yōu)點�，F(xiàn)在各類別成熟的商品化試劑盒可以同時復合擴增十幾個基因座,然而對于大多數(shù)常規(guī)的STR分型試劑盒,1 ng是最為理想的初始模板量。在法醫(yī)學日常實踐中有時遇到檢材質量不理想的情況,這些檢材使用常規(guī)試劑盒分型時經常得到不理想甚至陰性的分型結果。不斷發(fā)展的法醫(yī)DNA分析技術日新月異,同時檢測內容的范圍也不斷擴大,低拷貝模板生物學檢材相關分析技術受到越來越多的關注,LCN-DNA STR分型的應用需求也相應增加。在有限的檢材條件下,為了得到理想的STR分型圖譜,學者們提出了許多不同的方法。如增加PCR循環(huán)次數(shù)、改變PCR反應參數(shù)、純化擴增產物以及全基因組擴增技術等,每種方法各有優(yōu)劣,對分型的結果也有不同程度的改善。在此之中,全基因組擴增技術是對所有的基因組序列進行非選擇性擴增,其主要目的是在避免出現(xiàn)序列傾向性的前提下使DNA的總量大幅度提高,并盡可能如實反映模板基因組的全貌,其擴增產物可以為隨后的擴增或測序等其他基因分析技術提供足量的模板。MALBAC是全基因組擴增技術中近年新提出的一種,它結合了MDA法與PCR方法的特點,顯示出較MDA法更高的均衡性與特異性,以及更低的等位基因丟失率。目前尚未見到MALBAC在法醫(yī)學領域有關LCN-DNA STR分型方面的研究和報道,在此我們對MALBAC全基因組擴增技術對LCN-DNA STR分型結果的影響進行探索,研究包括產物產量和等位基因分型結果兩方面。目的通過比較MALBAC全基因組擴增技術在使用極低模板量擴增后產物的產量和分型結果,探究MALBAC應用在法醫(yī)LCN-DNA STR分析中的可行性。方法(1)選擇湖北武漢5例漢族無關健康個體血樣,使用QIAamp~?DNA Blood Mini kit提取基因組DNA。(2)提取的5個樣本的基因組DNA用Quantifiler~?Trio DNA Quantification Kit定量。(3)每個定量樣本分別釋為100 pg/μL、60 pg/μL、40pg/μL、20pg/μL、10pg/μL。(4)對稀釋后樣本使用MALBAC?單細胞全基因組擴增試劑盒進行全基因組擴增。(5)使用Nanodrop 2000超微量分光光度計對純化后全基因組擴增后產物進行定量。(6)使用AGCU Expressmarker 22熒光檢測試劑盒對全基因組擴增產物進行毛細管電泳檢測分型并記錄分型數(shù)據并進行分析。結果(1)MALBAC全基因組擴增技術提高DNA模板量方面效果顯著,且產物終產量在1~6μg。(2)MALBAC全基因組擴增技術較為明顯地提高極低模板量的樣本的STR分型成功率。結論MALBAC全基因組擴增技術對于LCN-DNA STR分型在產物量和分型結果兩方面有顯著的提升的同時保持了較好的等位基因覆蓋率和靈敏度,為后續(xù)在法醫(yī)學LCN-DNA STR研究中的應用打下了基礎。
【學位單位】：華中科技大學
【學位級別】：碩士
【學位年份】：2018
【中圖分類】：D919
【文章目錄】：
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材料與方法
結果
討論
參考文獻
綜述
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1 廖斐;MALBAC全基因組擴增技術對LCN-DNA STR分型的研究[D];華中科技大學;2018年

本文編號：2849437