【摘要】：目的:研究大鼠急性一氧化碳中毒(Acute carbon monoxide poisoning,ACMP)后HO-1及c-fos在呼吸系統(tǒng)、神經(jīng)系統(tǒng)及循環(huán)系統(tǒng)各主要器官中的表達(dá)規(guī)律,探索其在法醫(yī)學(xué)中的應(yīng)用價(jià)值。方法:SD健康雄性大鼠50只,隨機(jī)分為實(shí)驗(yàn)對(duì)照組(n=10)及急性一氧化碳中毒組(n=40),急性一氧化碳中毒組采用改進(jìn)的Thom SR法制作大鼠急性一氧化碳中毒模型。急性一氧化碳中毒組是向染毒缸內(nèi)注入濃度為99%的高純一氧化碳?xì)怏w,通過一氧化碳?xì)怏w檢測(cè)管控制染毒缸內(nèi)一氧化碳?xì)怏w的濃度,使其在3000ppm-4000ppm之間,再將清醒大鼠放入染毒缸內(nèi),使大鼠吸入一氧化碳?xì)怏w30-40分鐘。分別于中毒后3h、6h、12h和24h麻醉處死大鼠。實(shí)驗(yàn)對(duì)照組直接將大鼠放入染毒缸內(nèi)30-40分鐘,不通入一氧化碳?xì)怏w。應(yīng)用蘇木素-伊紅染色法觀察心、腦、肺組織的病理形態(tài)損傷情況,采用SABC免疫組織化學(xué)法及Western-Blot檢測(cè)技術(shù)觀察HO-1、c-fos蛋白的表達(dá)情況,通過對(duì)檢測(cè)結(jié)果的統(tǒng)計(jì)分析,探討急性一氧化碳中毒中HO-1以及c-fos蛋白在心、腦、肺組織中的含量變化規(guī)律及其敏感性。結(jié)果:1、光鏡下HE染色結(jié)果顯示:與實(shí)驗(yàn)對(duì)照組相比,急性一氧化碳中毒各組腦組織呈缺氧性改變,腦組織疏松水腫,微血管及毛細(xì)血管擴(kuò)張、充血,炎細(xì)胞浸潤,神經(jīng)纖維腫脹。肺組織與實(shí)驗(yàn)對(duì)照組相比肺泡壁變薄,肺泡腔擴(kuò)張,可見有少許斷裂,支氣管各層炎性細(xì)胞浸潤,肺泡腔內(nèi)可見大量紅細(xì)胞。心肌纖維未見明顯異常。2、免疫組織化學(xué)法檢測(cè)HO-1、c-fos蛋白表達(dá)結(jié)果顯示:(1)對(duì)比實(shí)驗(yàn)對(duì)照組,c-fos蛋白在一氧化碳中毒各組肺組織中均有大量陽性細(xì)胞,主要表達(dá)肺泡上皮細(xì)胞、肺泡壁淋巴細(xì)胞及血管內(nèi)皮細(xì)胞,于3h達(dá)高峰(p0.05),并呈時(shí)間相關(guān)性表達(dá);在腦組織中主要表達(dá)于神經(jīng)細(xì)胞核中,3h即可見陽性細(xì)胞表達(dá),12h達(dá)到高峰(p0.05),并呈時(shí)間相關(guān)性表達(dá)。心肌中主要表達(dá)于心肌細(xì)胞核,呈棕黃色顆粒,于6h達(dá)高峰(P0.05),且與時(shí)間呈相關(guān)性。(2)HO-1蛋白在肺組織中呈下降趨勢(shì)(P0.05),一氧化碳中毒各組與實(shí)驗(yàn)對(duì)照組相比皆有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義,主要表達(dá)于肺泡壁、支氣管壁細(xì)胞以及淋巴細(xì)胞,中性粒細(xì)胞以及巨噬細(xì)胞中也有陽性的表達(dá)。HO-1在腦組織中呈上升趨勢(shì),一氧化碳中毒各組與實(shí)驗(yàn)對(duì)照組進(jìn)行比較得出P0.05,其主要圍繞神經(jīng)細(xì)胞胞核表達(dá),胞核中亦可觀察到少量陽性表達(dá)顆粒。HO-1在心肌細(xì)胞中表達(dá)不明顯,少量陽性細(xì)胞,與實(shí)驗(yàn)對(duì)照組相比無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P0.05)。3、Western-Blot檢測(cè)結(jié)果顯示:(1)c-fos蛋白在一氧化碳中毒組肺組織中相比實(shí)驗(yàn)對(duì)照組表達(dá)為上升趨勢(shì)(P0.05),3h大量表達(dá)并至高峰(P0.05),6h略為下降后12h再次升高(P005),24h下降(P0.05)呈“雙峰趨勢(shì)”。心肌和腦組織中c-fos蛋白的表達(dá)趨勢(shì)與肺組織大致相似皆呈“雙峰趨勢(shì)”,只是峰值時(shí)間有所推遲,心肌為6h升至高峰(P0.05),腦組織高峰出現(xiàn)在12h(P0.05)。(2)HO-1隨一氧化碳中毒后時(shí)間的延長在肺組織中表達(dá)量呈明顯下降趨勢(shì)(P0.05),實(shí)驗(yàn)對(duì)照組與一氧化碳中毒各組相比P0.05。在腦組織中呈上升趨勢(shì)(P0.05),實(shí)驗(yàn)對(duì)照組與一氧化碳中毒各組相比P0.05。心肌內(nèi)HO-1表達(dá)較少,各組間表達(dá)變化無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P0.05)。結(jié)論:本實(shí)驗(yàn)在建立大鼠急性一氧化碳中毒模型的基礎(chǔ)上,以正常為對(duì)照組,將中毒組按不同存活時(shí)間分3h組、6h組、12h組和24h組,觀察心、腦、肺在各組中病理形態(tài)的變化,探討HO-1及c-fos蛋白的表達(dá)趨勢(shì)。1、相比實(shí)驗(yàn)對(duì)照組,一氧化碳中毒組中腦和肺的變化較大,呈急性缺氧性改變,心肌細(xì)胞未發(fā)現(xiàn)明顯異常,說明在急性一氧化碳中毒的早期腦及肺組織受中毒影響較大,易發(fā)生病理改變。2、與實(shí)驗(yàn)對(duì)照組相比,c-fos蛋白在心、腦、肺組織內(nèi)表達(dá)變化趨勢(shì)相似,即皆呈“雙峰趨勢(shì)”,但其表達(dá)時(shí)相及峰值不同,說明各器官在一氧化碳中毒時(shí)反應(yīng)及應(yīng)激狀態(tài)的啟動(dòng)時(shí)間有所差別。HO-1在肺的表達(dá)趨勢(shì)與在其他類型缺氧肺組織內(nèi)的表達(dá)不一致,呈現(xiàn)出下降趨勢(shì),說明HO-1在肺組織的表達(dá)可能受到外源性一氧化碳?xì)怏w的抑制,相反,HO-1在腦組織內(nèi)呈上升趨勢(shì),這為急性一氧化碳中毒早期肺損傷及一氧化碳中毒遲發(fā)性腦病的預(yù)防及治療提供了新的思路,并且在一氧化碳中毒的法醫(yī)學(xué)鑒定及時(shí)間推斷也有著重要的意義。
【學(xué)位授予單位】：皖南醫(yī)學(xué)院
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2019
【分類號(hào)】：D919.1
【圖文】：

出現(xiàn)聚集現(xiàn)象，部分出現(xiàn)抽搐，甚至角弓反張�；顒�(dòng)減少但能對(duì)外來的刺激做出反應(yīng)，耳廓和尾尖出現(xiàn)櫻桃紅色。30-40 分鐘時(shí)，出現(xiàn)昏迷狀態(tài)，大小便失禁，四肢癱軟無力，對(duì)外來的刺激基本無反應(yīng)。結(jié)束后將大鼠拿出染毒缸，放置通風(fēng)處直至恢復(fù)意識(shí)。將中毒死亡的大鼠解剖發(fā)現(xiàn)，內(nèi)臟充血明顯，并有散在的出血點(diǎn)，血液呈櫻桃紅色且粘稠易凝固。實(shí)驗(yàn)對(duì)照組大鼠，放入染毒缸內(nèi)活動(dòng)無異常，呼吸心跳均勻，內(nèi)臟、血液均未發(fā)現(xiàn)明顯異常。2 HE 染色觀察大鼠急性一氧化碳中毒后各組織細(xì)胞的形態(tài)改變2.1 肺實(shí)驗(yàn)對(duì)照組大鼠肺組織肺泡壁結(jié)構(gòu)清晰完整、排列規(guī)則，肺間隔未見異常、肺動(dòng)脈無增厚，肺間質(zhì)無水腫增厚，肺泡腔內(nèi)未見炎細(xì)胞及血細(xì)胞浸潤（見圖 1）。中毒各組與實(shí)驗(yàn)對(duì)照組相比肺泡壁變薄，肺泡腔擴(kuò)張，可見有少許斷裂，支氣管各層炎性細(xì)胞浸潤，肺泡腔內(nèi)可見大量紅細(xì)胞（見圖 2，3，4，5）。

實(shí)驗(yàn)對(duì)照組（HE×400）

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本文編號(hào)：2737047