發(fā)布時間：2020-05-12 01:12

【摘要】：目的:觀察DNA-PKcs在輻射旁效應(yīng)中對細胞的影響,探討DNA-PKcs參與調(diào)控輻射誘導細胞旁效應(yīng)的機制。方法:采用人神經(jīng)膠質(zhì)瘤細胞M059K和M059J、人宮頸癌細胞Hela,M059K和Hela細胞為DNA-PKcs表達正常細胞,M059J細胞為DNA-PKcs活性缺失細胞,用DNA-PKcs抑制劑NU7026處理Hela細胞,實驗每種細胞分為正常組、輻照組、旁效應(yīng)組,輻照劑量為2Gy,在2Gyγ輻照后1h構(gòu)建刺激液模式作為旁效應(yīng)組。通過細胞生長曲線實驗檢測DNA-PKcs在輻射旁效應(yīng)中對細胞生長的影響;細胞克隆形成實驗觀察DNA-PKcs在輻射旁效應(yīng)中對細胞增殖的影響;微核試驗檢測DNA-PKcs在輻射旁效應(yīng)中對DNA損傷的影響;DCFH-DA法觀察DNA-PKcs在輻射旁效應(yīng)中對活性氧(ROS)含量的影響;流式細胞儀檢測DNA-PKcs對細胞周期的影響;Western Blot檢測DNA損傷修復蛋白γH2AX、53BP1和CHK2-pT68的表達。結(jié)果:1.使用2Gyγ輻照后細胞出現(xiàn)細胞生長緩慢;細胞克隆形成明顯減少(P0.05);細胞內(nèi)微核產(chǎn)生明顯增多(P0.05);細胞內(nèi)ROS含量明顯升高(P0.05);流式細胞儀檢測細胞周期顯示細胞出現(xiàn)不同程度的G2/M期阻滯;Western Blot結(jié)果顯示細胞內(nèi)γH2AX、53BP1、CHK2-pT68表達升高。2.輻射旁效應(yīng)可以導致細胞生長緩慢;細胞克隆形成減少(P0.05);細胞內(nèi)微核產(chǎn)生明顯增多(P0.05);細胞內(nèi)ROS含量明顯升高(P0.05);流式細胞儀檢測細胞周期顯示細胞出現(xiàn)不同程度的G2/M期阻滯;DNA損傷修復蛋白γH2AX、53BP1、CHK2-pT68表達升高等。3.在DNA-PKcs缺失或失活的情況下,細胞在輻射旁效應(yīng)中的損傷更為明顯,細胞克隆形成減少;細胞內(nèi)微核產(chǎn)生增多(P0.05);細胞內(nèi)ROS含量產(chǎn)生明顯增多(P0.05);細胞周期阻滯出現(xiàn)明顯延長;DNA損傷修復蛋白53BP1表達升高,γH2AX、CHK2-pT68表達減少。結(jié)論:1.輻射旁效應(yīng)能導致效應(yīng)細胞活力降低;微核產(chǎn)生增多;細胞內(nèi)ROS含量升高;細胞周期發(fā)生G2/M期阻滯;DNA損傷修復蛋白γH2AX、53BP1、CHK2-pT68表達升高。2.在DNA-PKcs缺失或失活的情況下,旁效應(yīng)組細胞內(nèi)微核率明顯升高,DNA損傷修復蛋白γH2AX、CHK2-pT68表達減少,53BP1蛋白表達增多,細胞受到的輻射旁效應(yīng)損傷更為嚴重。3.DNA-PKcs通過調(diào)控ROS、細胞周期和DNA修復蛋白γH2AX、CHK2-pT68表達來參與輻射旁效應(yīng)。
【圖文】：

圖 3.1 DNA-PKcs 在輻射旁效應(yīng)中對細胞生長的影響A：M059K B：M059J C：Hela D：Hela+NU7026*與對照組相比 P<0.053.2 克隆形成實驗由圖 3.2A 可見，M059K 細胞在 2Gy 輻照后 1h 培養(yǎng) 10d，細胞克隆數(shù)目與對照組相比減少，同時用條件培養(yǎng)基處理細胞后，細胞克隆數(shù)目與對照組相比減少；M059J 細胞在 2Gy 輻照后 1h 培養(yǎng) 10d，細胞克隆數(shù)目與對照組相比減少，同時用條件培養(yǎng)基處理細胞后，細胞克隆數(shù)目與對照組相比減少。由圖 3.2B 可知，M059K 輻照組和旁效應(yīng)組的存活分數(shù)分別為 81.76% 、88.68%，與正常組相比，差異具有統(tǒng)計學意義（P<0.05）；M059J 輻照組和旁效應(yīng)組的存活分數(shù)分別為 79.15% 、85.99%，，與正常組相比，差異具有統(tǒng)計學意義（P<0.05）。說明M059K 和 M059J 細胞在用 2Gy γ 輻照細胞后的條件培養(yǎng)處理未受輻照的細胞能

圖 3.2 DNA-PKcs 在輻射旁效應(yīng)中對細胞克隆形成的影響M059K 和 M059J 細胞在輻照和條件培養(yǎng)基處理后培養(yǎng) 10d 的克隆形成圖；（B）M059和 M059J 細胞的存活分數(shù)*與 M059K 對照組相比 P<0.05，#與 M059J 對照組相比 P<0.05由圖 3.3A 可見，Hela 細胞在 2Gy γ 輻照后 1h 培養(yǎng) 10d，細胞克隆數(shù)目與對相比減少，同時用條件培養(yǎng)基處理細胞后，細胞克隆數(shù)目與對照組相比減少 NU7026 處理 Hela 細胞后在 2Gy γ 輻照后 1h 培養(yǎng) 10d，細胞克隆數(shù)目與相比減少，同時用條件培養(yǎng)基處理細胞后，細胞克隆數(shù)目與對照組相比減少 3.3B 可知，Hela 輻照組和旁效應(yīng)組的存活分數(shù)分別為 80.31% 、86.53%常組相比，差異具有統(tǒng)計學意義（P<0.05）；NU7026 處理 Hela 后的輻照組效應(yīng)組的存活分數(shù)分別為 61.34% 、85.54%，與正常組相比，差異具有統(tǒng)義（P<0.05）。說明 Hela 細胞和 NU7026 處理 Hela 細胞后用 2Gy γ 輻照
【學位授予單位】：南華大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2018
【分類號】：R818

【參考文獻】

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本文編號：2659375