【摘要】：目的:探討半月板碎片來(lái)源間充質(zhì)干細(xì)胞(MSC)樣細(xì)胞的分離培養(yǎng)和多向分化潛能。方法:通過(guò)酶消化的方法分離半月板碎片來(lái)源細(xì)胞,體外培養(yǎng)至第3代,顯微鏡下觀察其形態(tài)和生長(zhǎng)狀態(tài)。取第3代細(xì)胞并對(duì)其進(jìn)行向成骨、成脂和成軟骨誘導(dǎo)分化。結(jié)果:經(jīng)酶消化的方法分離半月板碎片來(lái)源細(xì)胞4~6天可見(jiàn)少量的長(zhǎng)梭形貼壁,10~14天細(xì)胞成簇生長(zhǎng),克隆集落形成。第3代細(xì)胞形態(tài)較均一,生長(zhǎng)增殖良好。成骨誘導(dǎo)14天后ALP和茜素紅染色陽(yáng)性,有礦化結(jié)節(jié)形成。成脂誘導(dǎo)14天后油紅O染色陽(yáng)性提示細(xì)胞內(nèi)有脂滴形成。采用細(xì)胞微團(tuán)無(wú)血清成軟骨誘導(dǎo)21天后甲苯胺藍(lán)染色呈陽(yáng)性,細(xì)胞外有蛋白多糖形成;免疫組織化學(xué)染色示特異軟骨基質(zhì)Ⅱ型膠原表達(dá)陽(yáng)性。結(jié)論:采用混合膠原酶消化的方法分離獲得的半月板碎片來(lái)源的細(xì)胞貼壁生長(zhǎng),呈典型的長(zhǎng)梭形的MSC樣細(xì)胞形態(tài),在體外適當(dāng)?shù)恼T導(dǎo)條件下具有分化成骨、成脂、成軟骨的潛能,有望成為半月板再生的種子細(xì)胞來(lái)源。
[Abstract]:Aim: to investigate the isolation, culture and multidirectional differentiation potential of (MSC)-like cells derived from meniscus fragments. Methods: the cells from meniscus fragments were isolated by enzyme digestion and cultured to the third generation in vitro. the morphology and growth state of meniscus fragments were observed under microscope. The third passage cells were taken and induced to osteogenic, adipogenic and cartilage-forming. Results: a small amount of long fusiform adherent cells were isolated from meniscus fragments by enzyme digestion for 6 days, and the cells grew in clusters at 10 to 14 days, and clone colonies were formed. The morphology of the third passage cells was uniform and the growth and proliferation of the cells were good. After 14 days of osteogenic induction, ALP and alizalin red staining were positive and mineralization nodules were formed. After 14 days of adipogenic induction, the positive staining of oil red O suggested the formation of lipid droplets in the cells. After 21 days of induction with serum-free cartilage formation, toluene blue staining was positive and proteoglycan was formed outside the cells, and the expression of type II collagen in specific cartilage matrix was positive by immunohistochemical staining. Conclusion: the cells from meniscus fragments isolated by mixed collagenase digestion showed typical long fusiform MSC-like cell morphology and differentiated into bone and fat under appropriate induction conditions in vitro. The potential of cartilage formation is expected to be a source of seed cells for meniscus regeneration.
【作者單位】： 四川大學(xué)華西醫(yī)院骨科;
【基金】：國(guó)家自然科學(xué)基金(81301560) 中國(guó)博士后科學(xué)基金(2012M521698)
【分類號(hào)】：R87

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本文編號(hào)：2478644