【摘要】：核能利用的快速發(fā)展對(duì)輻射安全提出了更高要求,核能在人們生活和生產(chǎn)中的運(yùn)用愈加廣泛,也給環(huán)境帶來了很多輻射污染[1]。同時(shí),人類不可避免地經(jīng)常暴露于某些低劑量電離輻射環(huán)境中,包括醫(yī)學(xué)放射診斷和治療,自然環(huán)境的本底輻射,及工業(yè)中廣泛使用的各種放射性材料。隨著電離輻射的用途越來越多樣化既普遍化,輻射損傷的風(fēng)險(xiǎn)也有不同程度的增加。近年來,低劑量電離輻射(LDR)的健康效應(yīng)受到了放射生物學(xué)家的極大關(guān)注,已有證據(jù)表明輻射在某些劑量下可以刺激各種修復(fù)機(jī)制來逆轉(zhuǎn)輻射損傷,而另外一些低劑量的輻射暴露則也有可能刺激癌癥的發(fā)生[3~5]。由于對(duì)低劑量電離輻射誘導(dǎo)機(jī)體損傷作用機(jī)制存在爭(zhēng)議,低劑量電離輻射防護(hù)藥物的研究更是鮮見報(bào)道。因此,有必要開展低劑量電離輻射防治藥物研究。前期開展了新型低劑量電離輻射防護(hù)藥物西咪替丁的藥效學(xué)研究,結(jié)果發(fā)現(xiàn)西咪替丁對(duì)低劑量電離輻射誘導(dǎo)的小鼠機(jī)體氧化損傷具有較好的保護(hù)作用。為了更加深入地研究西咪替丁的抗氧化作用機(jī)制,本文進(jìn)行了如下研究:(1)西咪替丁對(duì)低劑量長(zhǎng)期照射比格犬損傷防護(hù)作用的研究;(2)西咪替丁對(duì)HUVEC細(xì)胞電離輻射損傷的保護(hù)作用研究;(3)西咪替丁對(duì)電離輻射所致HUVEC細(xì)胞氧化損傷的保護(hù)作用研究;(4)西咪替丁對(duì)于電離輻射導(dǎo)致的氧化損傷保護(hù)機(jī)制的初步探索。本課題主要研究?jī)?nèi)容和研究結(jié)果如下:1.西咪替丁對(duì)低劑量長(zhǎng)期照射比格犬的損傷防護(hù)作用選取比格犬作為CMTD藥效學(xué)的低劑量輻射效應(yīng)損傷保護(hù)作用評(píng)價(jià)模型,給予0.2-1.0 Gy的累積電照射后,發(fā)現(xiàn)除個(gè)別時(shí)間點(diǎn)WBC偏高外,各組受試動(dòng)物的血象檢測(cè)結(jié)果均在正常值范圍內(nèi)波動(dòng),推測(cè)個(gè)別點(diǎn)的WBC值偏高可能是應(yīng)激性升高。與正常對(duì)照組(CG)比較,累積照射1.0 Gy后24 h,比格犬骨髓造血干細(xì)胞數(shù)量顯著降低(p0.01);與輻照模型組比較,陽性藥和CMTD各給藥組比格犬骨髓造血干細(xì)胞有不同程度的升高,中劑量組造血干細(xì)胞明顯升高(p0.05),表明CMTD對(duì)骨髓造血干細(xì)胞有較好的保護(hù)作用。在微核試驗(yàn)中,輻照后比格犬微核率略有上升,各給藥組微核率與正常對(duì)照組比較無顯著差異,陽性藥組和西咪替丁低劑量組微核率數(shù)值低于正常對(duì)照組和輻照模型組。在肝臟和脾臟的病理切片中觀察到低劑量的輻照均可造成比格犬肝臟和脾臟出現(xiàn)輕微性的輻照損傷,都出現(xiàn)細(xì)胞排列略微分散且紅細(xì)胞數(shù)量略微增多的趨勢(shì),而病理切片顯示,CMTD給藥組相對(duì)于肝臟的損傷保護(hù)不明顯,而對(duì)于脾臟的損傷則有一定的保護(hù)作用,其中,中劑量給藥組效果相對(duì)較好。對(duì)各組比格犬血清中抗氧化酶的檢測(cè)表明,輻照后比格犬血清中的SOD、CAT、GPx及GST活力顯著降低(p0.01,p0.05)。與輻照模型組比較,各給藥組的SOD和CAT活力均顯著升高(p0.01),各給藥組中僅西咪替丁高劑量組的GPx和GST活力顯著升高(p0.01,p0.05)。結(jié)果表明,CMTD對(duì)上述四種抗氧化酶活性具有保護(hù)作用,對(duì)SOD和CAT酶活性的保護(hù)作用好于GPx和GST。輻照后比格犬血清內(nèi)MDA含量顯著升高(p0.01),與輻照模型組相比,陽性藥組和CMTD中、高劑量組的血清MDA含量顯著減少(p0.01),表明CMTD對(duì)輻照后血清中的脂質(zhì)氧化水平有降低作用。以上結(jié)果證明,CMTD對(duì)輻照后動(dòng)物體內(nèi)的抗氧化系統(tǒng)有較好的保護(hù)作用。2.西咪替丁對(duì)HUVEC細(xì)胞電離輻射損傷的保護(hù)作用以人正常臍靜脈上皮細(xì)胞HUVEC為研究對(duì)象,對(duì)CMTD細(xì)胞毒性及CMTD對(duì)輻射誘導(dǎo)細(xì)胞損傷的保護(hù)作用進(jìn)行檢測(cè)。細(xì)胞毒性檢測(cè)結(jié)果顯示,CMTD對(duì)HUVEC細(xì)胞無毒性。CMTD對(duì)受照細(xì)胞生存率、克隆形成率均有提高作用,終濃度為200 umol/L的CMTD組細(xì)胞生存率最高,達(dá)60.93%,相比照射組提高12%。采用Hochest/PI雙染法和Annexin V/PI法,分別結(jié)合熒光顯微鏡和流式細(xì)胞儀,觀察HUVEC細(xì)胞受照后細(xì)胞細(xì)胞凋亡情況,結(jié)果發(fā)現(xiàn),西咪替丁能顯著降低輻照后細(xì)胞凋亡,對(duì)細(xì)胞早期及晚期凋亡均有一定保護(hù)作用。采用流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)了DNA損傷修復(fù)指標(biāo)γ-H2AX,輻照后細(xì)胞中γ-H2AX顯著增加,CMTD組則對(duì)其有顯著降低作用。結(jié)果表明,西咪替丁對(duì)輻射造成的細(xì)胞內(nèi)DNA損傷具有良好的保護(hù)作用。3.西咪替丁對(duì)電離輻射所致HUVEC細(xì)胞氧化損傷的保護(hù)作用研究通過對(duì)受照細(xì)胞(8.0 Gy急性照射)內(nèi)ROS水平、抗氧化酶活力、脂質(zhì)過氧化產(chǎn)物MDA含量和DNA氧化損傷產(chǎn)物8-OHdG含量的檢測(cè),證明CMTD可以顯著降低電離輻射誘導(dǎo)產(chǎn)生的活性氧,提高受照細(xì)胞中的SOD、CAT、GPx和GST活力,降低輻照產(chǎn)生的MDA和8-OHdG含量。實(shí)驗(yàn)結(jié)果提示,西咪替丁通過清除受照細(xì)胞內(nèi)自由基、保護(hù)細(xì)胞內(nèi)抗氧化酶活力、減緩輻射誘導(dǎo)的脂質(zhì)過氧化和DNA氧化損傷,發(fā)揮對(duì)輻射所致細(xì)胞氧化損傷的保護(hù)作用。4.西咪替丁對(duì)電離輻射導(dǎo)致氧化損傷的保護(hù)機(jī)制的初步探索在研究中發(fā)現(xiàn)CMTD能夠降低受照細(xì)胞內(nèi)ROS水平,保護(hù)輻照后動(dòng)物及細(xì)胞的抗氧化酶活力,減少氧化產(chǎn)物的生成,緩解輻照動(dòng)物造血干細(xì)胞損傷,降低輻照細(xì)胞凋亡和DNA損傷,提高其存活率等輻射防護(hù)作用的基礎(chǔ)上。本章節(jié)對(duì)CMTD的作用機(jī)制進(jìn)行了探索。通過體外自由基清除實(shí)驗(yàn),發(fā)現(xiàn)CMTD對(duì)超氧陰離子自由基、羥基自由基、烷基自由基和DPPH自由基均有不同程度的清除作用,尤其是對(duì)羥基自由基的清除能力較強(qiáng)。進(jìn)一步對(duì)內(nèi)源性抗氧化應(yīng)激通路中Nrf2核轉(zhuǎn)錄因子及其下游相關(guān)抗氧化基因進(jìn)行了檢測(cè)。細(xì)胞免疫熒光化學(xué)檢測(cè)細(xì)胞內(nèi)Nrf2發(fā)現(xiàn),CMTD能夠促使Nrf2從細(xì)胞質(zhì)轉(zhuǎn)位于細(xì)胞核;實(shí)時(shí)熒光定量PCR檢測(cè)發(fā)現(xiàn),CMTD能顯著上調(diào)Nrf2下游抗氧化酶基因SOD2和GPx1的表達(dá),與正常組比較,分別上調(diào)3.55倍和6.45倍,而細(xì)胞內(nèi)Nrf2基因表達(dá)變化不大。以上實(shí)驗(yàn)結(jié)果提示,西咪替丁可能通過促進(jìn)Nrf2活化進(jìn)入細(xì)胞核,調(diào)節(jié)下游抗氧化酶相關(guān)基因表達(dá),提高機(jī)體抗氧化能力,減輕輻射對(duì)機(jī)體的氧化損傷。
[Abstract]:......
【學(xué)位授予單位】：上海海洋大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類號(hào)】：R818

【參考文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前10條

1 韓瀠儀;任虹;王丹丹;萬慧潔;岳錦萍;;芫荽對(duì)生物大分子氧化損傷的保護(hù)作用及自由基清除能力[J];食品科學(xué)技術(shù)學(xué)報(bào);2017年01期

2 韋坤華;蔡錦源;董青松;李明杰;白甲坡;劉煒煒;張重義;繆劍華;;雞骨草多糖的微波預(yù)處理提取工藝及其羥基自由基清除作用研究[J];河南工業(yè)大學(xué)學(xué)報(bào)(自然科學(xué)版);2017年01期

3 趙憶寧;何穎;沈先榮;張俊玲;蔣定文;王慶蓉;趙勇;潘迎捷;;西咪替丁對(duì)低劑量電離輻射致大鼠氧化應(yīng)激的保護(hù)作用[J];解放軍醫(yī)學(xué)雜志;2017年02期

4 喻艷;逯海朋;賈亞楠;向偉;粟君;曾令樹;敬成俊;王茜齡;徐立;;桑椹中酚類物質(zhì)極性分布及抗氧化活性評(píng)價(jià)[J];食品與發(fā)酵工業(yè);2017年01期

5 Yuanyuan Ji;Aijun Zhang;Xiaobin Chen;Xiaoxia Che;Kai Zhou;Zhidong Wang;;Sodium humate accelerates cutaneous wound healing by activating TGF-β/Smads signaling pathway in rats[J];Acta Pharmaceutica Sinica B;2016年02期

6 路璐;李德冠;張俊伶;王月英;孟愛民;;不同劑量~(137)Csγ-射線輻射后造血干/祖細(xì)胞輻射敏感性差異研究[J];天津醫(yī)藥;2016年03期

7 張俊玲;何穎;王慶蓉;李娜;蔣定文;侯登勇;劉玉明;陳偉;劉瓊;李珂嫻;宗杰;李佳媚;沈先榮;;西咪替丁對(duì)0.7Gy照射小鼠嗜多染紅細(xì)胞微核的保護(hù)作用[J];解放軍醫(yī)學(xué)雜志;2015年12期

8 曲建偉;;電磁輻射對(duì)人體健康的影響和防護(hù)[J];科技致富向?qū)?2015年15期

9 張琛;孫可;耿珊;劉典鋒;張先平;劉俊;徐春燕;王建偉;王亞平;;輻射損傷導(dǎo)致造血干/祖細(xì)胞衰老的機(jī)理研究[J];細(xì)胞與分子免疫學(xué)雜志;2013年03期

10 宋潔;曹燕;黃茜;張敏;王海英;;國(guó)內(nèi)比格犬的生物學(xué)指標(biāo)研究及相關(guān)應(yīng)用進(jìn)展[J];醫(yī)學(xué)動(dòng)物防制;2012年06期

相關(guān)碩士學(xué)位論文 前3條

1 李娜;星蟲多糖的抗輻射作用研究[D];上海海洋大學(xué);2016年

2 倪振洪;ROS在Bcl-2抑制劑抗淋巴瘤和肝細(xì)胞癌中的作用及機(jī)制研究[D];第三軍醫(yī)大學(xué);2013年

3 劉堯;30mW/cm~2微波對(duì)X射線照射小鼠造血組織損傷的保護(hù)作用及機(jī)制研究[D];瀘州醫(yī)學(xué)院;2013年

，

本文編號(hào)：2343752