【摘要】：背景：對(duì)頭頸部惡性腫瘤進(jìn)行放射治療的同時(shí)，不可避免地引起放射性涎腺損傷，嚴(yán)重影響患者生活質(zhì)量。由于涎腺對(duì)放射線照射極其敏感，且腺體自身修復(fù)能力低下，尚無有效的治療方法。因此，進(jìn)一步探討放射性涎腺損傷的機(jī)制，尋找有效的治療方法迫在眉睫。研究報(bào)道，苯腎上腺素（phenylephrine, PE）可顯著減輕X線照射后早期和晚期大鼠腮腺的損傷，然而其機(jī)制尚不明確。研究表明，煙酰胺磷酸核糖轉(zhuǎn)移酶（nicotinamide phosphoribosyltransferase, Nampt）可增強(qiáng)細(xì)胞抵御氧化應(yīng)激的能力，然而Nampt在放射性涎腺損傷中的作用尚缺乏研究，其表達(dá)與PE的關(guān)系亦缺乏了解。 目的：研究Nampt在大鼠涎腺的表達(dá)及分布；探討苯腎上腺素對(duì)放射損傷早期大鼠頜下腺的保護(hù)作用以及苯腎上腺素對(duì)放射損傷早期大鼠頜下腺Nampt表達(dá)的影響。 第一部分：煙酰胺磷酸核糖轉(zhuǎn)移酶在大鼠涎腺的表達(dá)與定位 方法：取健康成年Wistar大鼠6只，活體取大鼠腮腺、頜下腺和大舌下腺。應(yīng)用免疫組織化學(xué)法檢測(cè)正常大鼠涎腺Nampt的分布；應(yīng)用逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈法（reverse transcription-polymerase chain reaction, RT-PCR）和免疫印跡法（Westernblot）檢測(cè)正常大鼠腮腺、頜下腺和大舌下腺Nampt mRNA和蛋白質(zhì)的表達(dá)。 結(jié)果：大鼠腮腺、頜下腺和大舌下腺均有Nampt的表達(dá)，，Nampt均主要分布于漿液性腺泡細(xì)胞的胞漿和胞核，以及閏管和紋狀管的胞核中。其表達(dá)豐度最高的為腮腺，其次為頜下腺，最少的是大舌下腺。 結(jié)論：大鼠腮腺、頜下腺和大舌下腺均存在Nampt的mRNA和蛋白質(zhì)的表達(dá)，為深入研究Nampt在涎腺生理及病理狀態(tài)下的功能意義提供初步實(shí)驗(yàn)依據(jù)。 第二部分：苯腎上腺素對(duì)放射損傷早期大鼠頜下腺的保護(hù)作用及對(duì)Nampt表達(dá)的影響 方法：健康成年Wistar大鼠18只，隨機(jī)分為空白對(duì)照組、單純照射組及照射后給藥組（腹腔注射苯腎上腺素，5mg/kg，一天兩次）。大鼠腹腔麻醉下用直線加速器給予頜下腺區(qū)域20Gy X射線照射。照射后7天取頜下腺組織，HE染色檢測(cè)各組頜下腺形態(tài)學(xué)變化；免疫組化檢測(cè)PCNA和Nampt在各組頜下腺的分布；脫氧核糖核苷酸末端轉(zhuǎn)移酶末端標(biāo)記法（terminal deoxynucleotidyl transferase(TdT)-mediated dUTP-digoxigenin nick end labeling, TUNEL）法檢測(cè)各組頜下腺細(xì)胞凋亡情況；免疫印跡法檢測(cè)頜下腺Nampt蛋白質(zhì)的表達(dá)。 結(jié)果： 1.光鏡可見單純照射組腺泡細(xì)胞萎縮明顯，核固縮；照射后給藥組腺泡細(xì)胞較之萎縮明顯減輕，與空白組腺泡細(xì)胞形態(tài)相似。 2.免疫組織化學(xué)結(jié)果顯示：?jiǎn)渭冋丈浣M腺泡和導(dǎo)管中PCNA陽性染色細(xì)胞較空白對(duì)照組增加74.86%（P 0.01），照射后給藥組PCNA陽性染色細(xì)胞數(shù)在腺泡及導(dǎo)管細(xì)胞都顯著增加，較單純照射組增加了162.18%（P 0.01）。空白對(duì)照組、單純照射組和照射后藥組PCNA陽性染色細(xì)胞數(shù)（400倍高倍視野下）分別為：17.7±2.27，30.95±3.66和81.15±5.63�？瞻讓�(duì)照組Nampt主要表達(dá)于漿液性腺泡細(xì)胞的胞漿及導(dǎo)管細(xì)胞的細(xì)胞核；單純照射組Nampt的表達(dá)較空白對(duì)照組顯著減少；照射給藥組Nampt的表達(dá)較單純照射組明顯增加。 3. TUNEL法顯示，單純照射組頜下腺細(xì)胞中可見大量的TUNEL陽性細(xì)胞，照射后給藥組頜下腺細(xì)胞中可見個(gè)別的TUNEL陽性細(xì)胞，較單純照射組凋亡細(xì)胞數(shù)顯著減少。TUNEL陽性細(xì)胞計(jì)數(shù)（每個(gè)400倍高倍視野下）在空白對(duì)照組、單純照射組和照射后給藥組分別為：5.13±1.46，57.8±6.35和9.01±2.46。 4. Western blot結(jié)果顯示：?jiǎn)渭冋丈浣MNampt蛋白表達(dá)較空白對(duì)照組降低了44.85%（P＜0.05），照射給藥組Nampt蛋白表達(dá)較單純照射組增加了86.63%（P＜0.05）。 結(jié)論： 1.苯腎上腺素能夠能夠減輕大鼠放射損傷后頜下腺腺泡細(xì)胞萎縮，抑制放射損傷早期大鼠頜下腺腺泡細(xì)胞凋亡，促進(jìn)腺泡及導(dǎo)管細(xì)胞增殖。本研究有望為防治頭頸部腫瘤放射治療后涎腺損傷提供新的策略。 2.苯腎上腺素可上調(diào)放射損傷早期大鼠頜下腺Nampt的表達(dá)，Nampt有望成為臨床治療放射性涎腺損傷的新靶點(diǎn)。
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【學(xué)位授予單位】：大連醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2012
【分類號(hào)】：R965;R818.05

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：2286399