【摘要】：目的：在全基因組水平篩選輻射誘導(dǎo)基因,驗證X射線照射人正常淋巴母細(xì)胞AHH-1基因表達譜的改變,并探討高低劑量照射細(xì)胞后輻射誘導(dǎo)基因質(zhì)和量的差異,為闡明高低劑量輻射效應(yīng)的產(chǎn)生機制和利用基因表達的改變作為輻射生物劑量計提供實驗依據(jù)。 方法：1.用基因芯片技術(shù)檢測0.1、0.5、2、5Gy X射線照射人正常淋巴母細(xì)胞AHH-1后6、20小時全基因組mRNA表達譜的改變,芯片表達譜數(shù)據(jù)通過NimbleScan軟件分析,選擇差異表達≥2倍為輻射誘導(dǎo)基因。2.利用GO方法分析篩選出部分輻射誘導(dǎo)基因的生物學(xué)功能。3.利用RT-PCR、real-time PCR, Western blot方法對部分差異表達基因的芯片結(jié)果進行了驗證。 結(jié)果：1.基因表達譜芯片技術(shù)檢測到X射線照射AHH-1細(xì)胞后6h,0.1Gy照射組上調(diào)基因有760個,下調(diào)基因有1222個；0.5Gy照射組上調(diào)基因349個,下調(diào)基因901個；2Gy照射組上調(diào)基因849個,下調(diào)基因924個；5Gy照射組上調(diào)基因457個,下調(diào)基因744個；在這一時間點四個劑量組共同表達上調(diào)的基因有13個,共同表達下調(diào)的基因有257個。照射后20h,0.1Gy照射組上調(diào)基因463個,下調(diào)基因753個；0.5Gy照射組上調(diào)基因622個,下調(diào)基因454個；2Gy照射組上調(diào)基因353個,下調(diào)基因337個；5Gy照射組上調(diào)基因805個,下調(diào)基因914個照射組,共同表達上調(diào)的基因有80個,共同表達下調(diào)的基因有68個。2.利用GO分析得出,低劑量輻射誘導(dǎo)產(chǎn)生的基因主要參與細(xì)胞間信號通路、信號轉(zhuǎn)導(dǎo)、細(xì)胞/組織防御、內(nèi)環(huán)境穩(wěn)定等過程,而高劑量誘導(dǎo)產(chǎn)生的基因主要參與細(xì)胞凋亡、細(xì)胞增殖、細(xì)胞周期阻滯等過程。3.RT-PCR對各劑量組照射后共同表達的部分基因CDKN2A, RNASE7, TNFRSF19, EGR3進行了驗證,其中RNASE7、EGR3表達上調(diào),CDKN2A、TNFRSF19表達下調(diào)。這些基因的表達變化與基因芯片檢測的結(jié)果一致。Real-time PCR對6h后共同表達的基因PERP和整個實驗組共同表達的基因GCNT3進行了分析,結(jié)果均表明與基因芯片的結(jié)果相吻合；Western blot方法繼續(xù)對PERP蛋白的表達進行了檢測,結(jié)果同樣驗證了PERP是表達下調(diào)的。 結(jié)論：1.運用芯片技術(shù)篩選出大量輻射誘導(dǎo)基因,從mRNA、蛋白水平驗證了與芯片結(jié)果的一致性。2.高低劑量X射線照射后基因表達的改變存在著質(zhì)和量的差異。3.參與特定生物學(xué)過程的部分輻射誘導(dǎo)基因有可能成為潛在的輻射生物劑量計。
[Abstract]:Objective: to screen radiation-induced genes at the whole genome level, to verify the changes of AHH-1 gene expression profile in human normal lymphoblastocytes irradiated by X-rays, and to explore the difference of the quality and quantity of radiation-induced genes after high and low dose irradiation. In order to elucidate the mechanism of radiation effect at high and low doses and to provide experimental basis for biological dosimeter by changing gene expression. Method 1: 1. The gene chip technique was used to detect the changes of genomic mRNA expression profile of human normal lymphoblastoid cells (AHH-1) at 6h after irradiation with 0.1 ~ 0.5g ~ 2Gy X-rays. The microarray expression profile data were analyzed by NimbleScan software, and the differential expression 鈮，

本文編號：2258890