【摘要】：目的利用Lgr5-EGFP-Cre ERT2/ROSA26-stop-EYFP小鼠建立譜系追蹤方法,用于觀察Lgr5+小腸干細(xì)胞在小腸組織更新中的作用,并研究輻射對(duì)小腸干細(xì)胞組織重建的影響。方法通過基因型分析鑒定Lgr5-EGFP-Cre ERT2/ROSA26-stop-EYFP小鼠。他莫西芬誘導(dǎo)小鼠體內(nèi)的熒光蛋白表達(dá),激光共聚焦顯微鏡觀察誘導(dǎo)后小腸干細(xì)胞的分化。采用60Coγ射線(15Gy)照射Lgr5-EGFP-Cre ERT2/ROSA26-stop-EYFP小鼠,觀察輻射對(duì)小腸干細(xì)胞組織重建的影響。結(jié)果提取鼠尾DNA通過PCR方法鑒定Lgr5基因(174bp),獲得雙陽(yáng)性小鼠。他莫西芬(100mg/kg)單次誘導(dǎo)后,激光共聚焦觀察到Lgr5+小腸干細(xì)胞在誘導(dǎo)后5d開始分裂,7d已到達(dá)絨毛頂端,14d少量絨毛全部帶有熒光,45d更多的小腸絨毛中存在熒光細(xì)胞,而且更加稠密。但在15Gy照射后小鼠小腸絨毛脫落嚴(yán)重,隱窩處沒有熒光出現(xiàn)。結(jié)論成功建立了小腸干細(xì)胞譜系追蹤模型,并初步觀察了輻射對(duì)小腸干細(xì)胞損傷的影響。
[Abstract]:Objective to establish a lineage tracing method in Lgr5-EGFP-Cre ERT2/ROSA26-stop-EYFP mice to observe the role of Lgr5 small intestinal stem cells in small intestinal tissue regeneration and to study the effects of radiation on small intestinal stem cell tissue reconstruction. Methods Lgr5-EGFP-Cre ERT2/ROSA26-stop-EYFP mice were identified by genotype analysis. The expression of fluorescent protein was induced by tamoxifen and the differentiation of small intestinal stem cells was observed by laser confocal microscopy. Lgr5-EGFP-Cre ERT2/ROSA26-stop-EYFP mice were irradiated with 60Co 緯-ray (15Gy) to observe the effect of radiation on the tissue reconstruction of small intestinal stem cells. Results DNA was extracted from mouse tail to identify Lgr5 gene (174bp) by PCR method, and double positive mice were obtained. After a single induction by tamoxifen (100mg/kg), Lgr5 small intestinal stem cells were observed to divide at 5 days after induction and reached the top of the villi for 14 days. A small number of villi were found to have fluorescent cells in the villi of the small intestine with fluorescence for 45 days and more dense. However, after 15Gy irradiation, the villi of the small intestine fell off seriously and there was no fluorescence in the crypt. Conclusion the small intestinal stem cell lineage tracing model was successfully established and the effects of radiation on the injury of small intestinal stem cells were preliminarily observed.
【作者單位】： 廣西醫(yī)科大學(xué)研究生院;軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院放射與輻射醫(yī)學(xué)研究所;
【基金】：國(guó)家重大新藥創(chuàng)制專項(xiàng)課題(2013ZX09J13102-02C) 國(guó)家自然科學(xué)基金面上項(xiàng)目(81272997)~~
【分類號(hào)】：R818

【共引文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：2177701