【摘要】：目的:探索運(yùn)動(dòng)性肌損傷(EIMD)后低氧調(diào)控肌細(xì)胞膜損傷的MAPK機(jī)制,并進(jìn)行驗(yàn)證。方法:健康雄性SD大鼠隨機(jī)分為對(duì)照組、常氧24 h、48 h、72 h組和低氧24 h、48 h、72 h組。大鼠以EIMD運(yùn)動(dòng)模型進(jìn)行間歇性下坡跑離心運(yùn)動(dòng),腹腔注射伊文氏藍(lán)熒光染色劑(EBD),取腓腸肌樣本,用激光共聚焦顯微鏡觀察EBD切片和陽性細(xì)胞率(PRC)評(píng)價(jià)膜損傷。用RT-qPCR和Westernblot測(cè)定MAPK的ERK1/2、JUN、p38和BMK1的mRNA表達(dá)、蛋白含量和磷酸化水平。再開展抑制劑實(shí)驗(yàn)以確認(rèn)低氧調(diào)控膜損傷MAPK機(jī)制中的關(guān)鍵信號(hào)通路。結(jié)果:EIMD后,低氧與常氧各組均出現(xiàn)明顯膜損傷,低氧各組陽性細(xì)胞率顯著高于常氧各組和對(duì)照組(P0.01)。低氧組ERK1、p38和BMK1通路的mRNA表達(dá)、蛋白含量和磷酸化水平顯著高于常氧對(duì)應(yīng)組(P0.05),JNK信號(hào)通路蛋白含量和磷酸化水平無顯著變化(P0.05)。抑制劑實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明,ERK1/2和p38抑制劑組的蛋白含量和磷酸化水平無顯著變化(P0.05)。BMK1抑制劑組24 h、48 h的磷酸化水平、陽性細(xì)胞率顯著低于安慰劑對(duì)應(yīng)組(P0.001),且與對(duì)照組無顯著差異(P0.05)。結(jié)論:1)EIMD后低氧明顯加劇膜損傷并造成損傷峰值前移。2)低氧調(diào)控膜損傷主要通過BMK1通路實(shí)現(xiàn),抑制BMK1磷酸化能阻止低氧對(duì)膜損傷的加劇作用。BMK1/ERK5通路是低氧調(diào)控EIMD后膜損傷MAPK機(jī)制的關(guān)鍵途徑。
[Abstract]:Aim: to explore the MAPK mechanism of hypoxic regulation of muscle cell membrane injury after (EIMD). Methods: healthy male Sprague-Dawley rats were randomly divided into control group, normoxic 24 h + 48 h + 72 h group and hypoxia 24 h + 48 h + 72 h group. Rats were subjected to intermittent downhill centrifugal exercise with EIMD model. Samples of gastrocnemius muscle were collected by intraperitoneal injection of Yi Wen blue fluorescent staining (EBD),. EBD sections and positive cell rate (PRC) were observed by confocal laser microscopy to evaluate membrane damage. The mRNA expression, protein content and phosphorylation level of ERK1 / 2 JUNN p38 and BMK1 in MAPK were measured by RT-qPCR and Westernblot. Inhibitor experiments were carried out to identify the key signaling pathways in the mechanism of hypoxic membrane damage to MAPK. Results the membrane damage was observed in both hypoxic and normoxic groups, and the positive cell rate in hypoxic group was significantly higher than that in normoxic group and control group (P0.01). The mRNA expression, protein content and phosphorylation level of ERK1 p38 and BMK1 pathway in hypoxia group were significantly higher than those in normoxic group (P0.05). The results of inhibitor experiment showed that the protein content and phosphorylation level of ERK1 / 2 and p38 inhibitor groups had no significant change (P0.05). The phosphorylation level of BMK1 inhibitor group was significantly lower than that of placebo corresponding group (P0.001), and there was no significant difference between BMK1 inhibitor group and control group (P0.05). Conclusion hypoxia after EIMD significantly increases membrane damage and causes the peak value of injury to shift forward. 2) hypoxic regulatory membrane damage is mainly achieved through the BMK1 pathway. Inhibition of BMK1 phosphorylation can prevent hypoxia from exacerbating membrane damage. BMK1 / ERK5 pathway is the key pathway to regulate the mechanism of EIMD membrane damage after hypoxia.
【作者單位】： 杭州師范大學(xué)體育與健康學(xué)院;北京體育大學(xué);
【基金】：浙江省自然科學(xué)基金面上項(xiàng)目(LY18C110002) 國家自然科學(xué)基金資助項(xiàng)目(31271276) 杭州市社科優(yōu)秀青年人才培育計(jì)劃資助項(xiàng)目(2017RCZX40)
【分類號(hào)】：R873

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本文編號(hào)：2150594