本文選題：法醫(yī)遺傳學(xué) + 短串聯(lián)重復(fù)序列�。� 參考：《法醫(yī)學(xué)雜志》2016年01期

【摘要】：目的建立一套15重快速STR復(fù)合擴增體系。方法選擇14個常染色體基因座以及1個性別基因座,采用Fast Start Taq DNA聚合酶系統(tǒng),以DNA標準品9947A為模板,通過篩選擴增條件、選擇熱啟動酶用量、調(diào)整引物平衡、優(yōu)化快速擴增程序、篩選反應(yīng)緩沖液、選擇反應(yīng)體系以及篩選添加劑等一系列復(fù)合擴增實驗,比較各條件下等位基因丟失和非特異性擴增情況。結(jié)果在以1 ng DNA為模板、0.4μL聚合酶及10×Fast Start高保真反應(yīng)緩沖液構(gòu)成10μL快速體系的條件下,32 min即可獲得標準DNA全部15個STR基因座的完整分型,無等位基因丟失和非特異性擴增現(xiàn)象,等位基因均衡性良好。同時,5%甘油、0.01%明膠、0.05%明膠和5 mmol/L硫酸銨可作為PCR擴增過程中擬加入的反應(yīng)添加劑。結(jié)論本研究建立的15重快速STR復(fù)合擴增體系可以明顯縮短反應(yīng)時間,提高樣品檢測效率。
[Abstract]:Objective to establish a 15-fold rapid STR multiplex amplification system. Methods 14 autosomal loci and 1 sex locus were selected. Fast start Taq DNA polymerase system was used, DNA standard strain 9947A was used as template, the amount of hot priming enzyme was selected and primer balance was adjusted by screening amplification conditions. A series of multiplex amplification experiments such as optimization of rapid amplification program, screening of reaction buffer, selection of reaction system and screening of additives were carried out to compare the allele loss and non-specific amplification under different conditions. Results the complete typing of all 15 STR loci of standard DNA could be obtained by using 1 ng DNA as template, 0.4 渭 L polymerase and 10 脳 Fast start high fidelity reaction buffer as 10 渭 L rapid reaction system. There was no allelic loss or nonspecific amplification. Allele equilibrium was good. At the same time, 5% glycerol, 0. 01% gelatin, 0. 05% gelatin and 5 mmol / L ammonium sulfate can be used as additives in PCR amplification. Conclusion the 15-step rapid STR multiplex amplification system can significantly shorten the reaction time and improve the detection efficiency.
【作者單位】： 中國人民公安大學(xué)刑事科學(xué)技術(shù)學(xué)院;公安部物證鑒定中心北京市現(xiàn)場物證檢驗工程技術(shù)研究中心;公安部物證鑒定中心法醫(yī)遺傳學(xué)公安部重點實驗室;清華大學(xué)醫(yī)學(xué)系統(tǒng)生物學(xué)研究中心;
【基金】：中央級公益性科研院所基本科研業(yè)務(wù)費專項資金計劃(2012JB012) 公安部技術(shù)研究計劃(2014JSYJA011)
【分類號】：D919

【參考文獻】

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1 李謙,李雅青;提高PCR反應(yīng)特異性的幾點策略[J];臨沂師范學(xué)院學(xué)報;2001年04期

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1 陳紅玲,林瑞慶,李國清,宋慧群,朱興全;Contracaecum ogmorhini復(fù)合種分類鑒定特異PCR方法的建立[J];寄生蟲與醫(yī)學(xué)昆蟲學(xué)報;2004年04期

2 常玉華;仇農(nóng)學(xué);;基于PCR技術(shù)快速檢測食品微生物的原理 方法與應(yīng)用[J];農(nóng)產(chǎn)品加工(學(xué)刊);2011年11期

3 王宏,常玉華,仇農(nóng)學(xué);PCR法檢測耐熱耐酸菌條件的優(yōu)化[J];食品與發(fā)酵工業(yè);2004年11期

4 何芳,翁亞彪,曹湛,林瑞慶,陳紅玲,宋慧群,朱興全;Contracaecum rudolphii姊妹種特異PCR鑒定方法的建立[J];畜牧獸醫(yī)學(xué)報;2005年09期

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1 安榆林;光肩星天牛分子遺傳多樣性及PCR鑒定技術(shù)的研究[D];南京林業(yè)大學(xué);2004年

2 常國斌;兩種野生鵪鶉與家鶉進化趨異水平的研究[D];揚州大學(xué);2004年

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2 何鴻舉;PCR技術(shù)快速檢測腐爛蘋果中擴展青霉菌Penicillium Expansum[D];西北農(nóng)林科技大學(xué);2011年

3 常玉華;蘋果濃縮汁中耐熱菌的PCR方法快速檢測研究[D];陜西師范大學(xué);2003年

4 王惠影;家鶉與野生日本鳴鶉進化趨異水平的研究[D];揚州大學(xué);2003年

5 林曉佳;光肩星天牛及其近緣種線粒體DNA COⅠ基因遺傳差異及其PCR鑒定試劑盒的研究[D];南京林業(yè)大學(xué);2004年

6 黃巍;分枝桿菌甾酮C_（1，2）位脫氫酶的初步研究[D];天津科技大學(xué);2005年

7 許明;地方水牛品種遺傳分化水平的研究[D];揚州大學(xué);2005年

8 畢靜瑩;棒曲霉素產(chǎn)生菌Penicillium expansum的PCR快速檢測及其條件優(yōu)化[D];西北農(nóng)林科技大學(xué);2007年

9 姚蓉;雞病毒性呼吸道病原多重RT-PCR檢測方法的建立[D];華中農(nóng)業(yè)大學(xué);2012年

10 孟鵬;半套式PCR技術(shù)檢測土壤中弓形蟲的研究[D];甘肅農(nóng)業(yè)大學(xué);2013年

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1 平原,顧麗華,陳連康;STR系統(tǒng)HUMCSF1PO-HUMTPOX-HUMTH01三位點復(fù)合擴增在上海地區(qū)的頻率分布[J];中國法醫(yī)學(xué)雜志;1998年01期

2 顧麗華,平原,唐建平;STR系統(tǒng)HUMCSF1PO-HUMTPOX-HUMTH01三位點復(fù)合擴增在法醫(yī)學(xué)上的應(yīng)用[J];中國法醫(yī)學(xué)雜志;1998年02期

3 葉懿;吳謹;廖淼;王卓;羅海玻;李英碧;;用熒光標記短串連重復(fù)復(fù)合擴增技術(shù)監(jiān)測骨髓移植存活[J];臨床檢驗雜志;2007年05期

4 戈文東;裴黎;倪萍婭;楊雪瑩;徐小玉;張穎;;線粒體DNA短片段復(fù)合擴增系統(tǒng)鑒別種屬的研究[J];刑事技術(shù);2011年06期

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9 王劍,顧明波,杜慶新,李曉平,陳弄潮;福爾馬林固定石蠟包埋組織的PCR-STR分型[J];中國法醫(yī)學(xué)雜志;2002年03期

10 周強,吳思濵,喻芳,李萍;短片段重復(fù)序列復(fù)合擴增技術(shù)在親子鑒定中的運用[J];貴陽醫(yī)學(xué)院學(xué)報;2005年05期

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1 匡金枝;黎方;朱巍;孫睿;聶同鋼;劉孟男;;復(fù)合擴增SRY-DXZ1-AMEL基因及其法醫(yī)學(xué)性別鑒定[A];加入WTO和中國科技與可持續(xù)發(fā)展——挑戰(zhàn)與機遇、責(zé)任和對策（下冊）[C];2002年

2 萬立華;修崇賢;劉春;曹洋;;中國重慶地區(qū)Amelogemine及9個STR位點群體DNA分型[A];面向21世紀的科技進步與社會經(jīng)濟發(fā)展（上冊）[C];1999年

3 李越;劉超;王穗保;;論制定DNA數(shù)據(jù)中質(zhì)量控制及管理標準的極其重要性[A];中國法醫(yī)學(xué)最新科研與實踐（一）——全國第六次法醫(yī)學(xué)術(shù)交流會論文精選[C];2000年

4 徐波;熊勇華;葉俊華;楊前勇;涂祖新;;犬的五個STR復(fù)合擴增體系的研究[A];中國畜牧獸醫(yī)學(xué)會養(yǎng)犬學(xué)分會第十二次全國養(yǎng)犬學(xué)術(shù)研討會論文集[C];2007年

5 劉健;尤朝陽;鄭秀芬;李曉斌;李伯齡;倪錦堂;;復(fù)合擴增的三個短串聯(lián)重復(fù)序列(STR)位點擴增片段長度多態(tài)性及其法醫(yī)學(xué)應(yīng)用的研究[A];首屆中國法醫(yī)物證學(xué)術(shù)交流會論文匯編[C];1993年

6 李莉;闕庭志;林源;;STR CTT位點復(fù)合擴增及熒光檢測技術(shù)在法醫(yī)學(xué)上的應(yīng)用[A];面向21世紀的科技進步與社會經(jīng)濟發(fā)展（下冊）[C];1999年

7 石美森;李英碧;吳謹;應(yīng)斌武;顏靜;張霽;侯一平;;一組Y染色體STR多色熒光復(fù)合擴增系統(tǒng)的建立及應(yīng)用前景[A];全國第七次法醫(yī)學(xué)術(shù)交流會論文摘要集[C];2004年

8 白麗萍;姜先華;趙賀群;于蛟;;線粒體DNA細胞色素b基因和D環(huán)區(qū)復(fù)合擴增鑒別種屬[A];中國法醫(yī)學(xué)最新科研與實踐（二）——全國第七次法醫(yī)學(xué)術(shù)交流會論文精選[C];2004年

9 吳小潔;孫華明;;熒光STR分析技術(shù)串并案件1例[A];廣東省法醫(yī)學(xué)會成立兩周年暨學(xué)術(shù)交流會論文集（1）[C];2004年

10 唐雙柏;羅斌;呂德堅;成建定;孫宏鈺;畢啟明;李越;劉超;;4個Y STRs基因座的復(fù)合擴增[A];廣東省法醫(yī)學(xué)會成立兩周年暨學(xué)術(shù)交流會論文集（2）[C];2004年

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1 冀強;Y染色體STR復(fù)合擴增及法醫(yī)學(xué)可行性研究[D];四川大學(xué);2003年

2 石美森;Y染色體STR和SNP復(fù)合檢測方法的研究[D];四川大學(xué);2005年

3 戴浩霖;十個新的Y染色體STR的特性及復(fù)合擴增研究[D];四川大學(xué);2004年

4 白雪;miniSTR復(fù)合擴增體系的研制與開發(fā)[D];河北醫(yī)科大學(xué);2009年

5 杜冰;常染色體三個miniSTR同步檢測和mt-SNP的微測序檢測研究[D];四川大學(xué);2007年

6 杜宏;微測序法檢測Y-SNP和mt-SNP的研究[D];四川大學(xué);2006年

7 張海軍;法醫(yī)學(xué)降解檢材DNA分析的新指標探索[D];四川大學(xué);2007年

8 袁萬安;法醫(yī)魚類學(xué)種屬鑒別初步研究[D];四川大學(xué);2006年

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1 張艷萍;DYS-714/723/650/713-plex通用引物嵌合復(fù)合擴增及在法醫(yī)學(xué)實際檢案中的應(yīng)用性研究[D];山西醫(yī)科大學(xué);2010年

2 武尉;三個miniSTR遺傳標記及其熒光標記復(fù)合擴增的法醫(yī)學(xué)應(yīng)用研究[D];四川大學(xué);2007年

3 方月琴;線粒體基因復(fù)合擴增進行種屬鑒定的研究[D];四川大學(xué);2006年

4 賈振軍;新的STR遺傳標記及熒光標記復(fù)合擴增的法醫(yī)學(xué)應(yīng)用研究[D];四川大學(xué);2005年

5 馬克;兩個mini-STR復(fù)合擴增體系的建立及靈敏度驗證[D];吉林大學(xué);2013年

6 吳曉兵;Y染色體STR復(fù)合擴增及法醫(yī)學(xué)可行性研究[D];山西醫(yī)科大學(xué);2008年

7 唐祥勇;5個miniSTR基因座位點復(fù)合擴增體系的檢驗和鑒定[D];重慶醫(yī)科大學(xué);2012年

8 李惠芬;四個X-STR基因座熒光復(fù)合擴增體系的建立及其法醫(yī)遺傳學(xué)研究[D];山西醫(yī)科大學(xué);2009年

9 龍兵;CODIS系統(tǒng)三個miniSTR熒光標記復(fù)合擴增的構(gòu)建及法醫(yī)學(xué)應(yīng)用[D];四川大學(xué);2007年

10 田力;線粒體DNA 16srRNA和ND4基因熒光標記復(fù)合擴增在法醫(yī)學(xué)種屬鑒定中的應(yīng)用研究[D];四川大學(xué);2006年

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本文編號：2096460