本文選題：C57BL近交系小鼠 + 燒傷�。� 參考：《昆明醫(yī)科大學(xué)》2012年博士論文

【摘要】：肝卵圓細(xì)胞在燒傷后的增殖狀況及其對(duì)放射性多臟器傷的作用 第一部分適用于燒傷實(shí)驗(yàn)的C57BL/6小鼠Meeh常數(shù)值的測(cè)定 目的：測(cè)定適用于燒傷實(shí)驗(yàn)的C57BL/6小鼠Meeh常數(shù)(k)值。 方法：24只6-12周正常C57BL/6小鼠,雌雄各半。實(shí)驗(yàn)前第3d在上午8點(diǎn)、中午12點(diǎn)、下午4點(diǎn)、晚上8點(diǎn)、次日凌晨0點(diǎn)和次日凌晨4點(diǎn)稱小鼠體質(zhì)量,依據(jù)24h內(nèi)體質(zhì)量波動(dòng)規(guī)律將24只小鼠隨機(jī)分為上午組、下午組和凌晨組,每組8只雌雄各半。實(shí)驗(yàn)日在上午8點(diǎn)(上午組)、下午4點(diǎn)(下午組)和次日凌晨0點(diǎn)(凌晨組)分別測(cè)定各組小鼠的體質(zhì)量和全身體表面積(BSA)實(shí)際值,并據(jù)此計(jì)算其k值。分別應(yīng)用4個(gè)常用k值(9.1、9.5、10和11.4)計(jì)算出每只小鼠的BSA計(jì)算值。 結(jié)果：24h內(nèi)小鼠的體質(zhì)量差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義,下午4點(diǎn)最低,凌晨0點(diǎn)最高。下午組小鼠k值大于上午組和凌晨組,差別有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。將小鼠常用k值(9.1、9.5、10和11.4)與本實(shí)驗(yàn)所得的3組k值分別進(jìn)行比較,除9.5與凌晨組k值之間差別無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義外,其余比較差別均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05或P0.01)。將其他學(xué)者測(cè)算的C57BL/6小鼠k值(8.95和9.822)與本實(shí)驗(yàn)所得3個(gè)時(shí)點(diǎn)的k值分別進(jìn)行比較,除9.822與下午組k值之間的差別無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義外,其余比較差別均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.01)。使用小鼠常用k值計(jì)算出的BSA計(jì)算值和C57BL/6小鼠的BSA實(shí)測(cè)值之間的差值最大達(dá)到了BSA實(shí)測(cè)值的23%。 結(jié)論：C57BL/6小鼠燒傷實(shí)驗(yàn)時(shí)可按實(shí)驗(yàn)時(shí)間不同選用不同的k值,上午k值宜為9.617,下午為9.802。 第二部分重度燙傷后C57小鼠肝卵圓細(xì)胞的增殖狀況 目的：研究重度燙傷和重度燙傷并膿毒癥時(shí)C57BL/6小鼠肝內(nèi)干細(xì)胞的增殖狀況。 方法：6周齡正常C57BL/6小鼠共58只,雌雄各半。小鼠被隨機(jī)分為4組：肝干細(xì)胞陽(yáng)性對(duì)照組(2雄2雌,共4只)、假燙傷組(3雄3雌,共6只)、燙傷組(21雄21雌,共42只)和燙傷并膿毒癥組(3雄3雌,共6只)。肝干細(xì)胞陽(yáng)性對(duì)照組給予DDC鼠糧,其它三組小鼠給予標(biāo)準(zhǔn)實(shí)驗(yàn)鼠糧,全部小鼠均實(shí)驗(yàn)室飼養(yǎng)2周后實(shí)驗(yàn)。燙傷組行25%Ⅲ度背部燙傷；燙傷并膿毒癥組行25%Ⅲ度背部燙傷聯(lián)合盲腸結(jié)扎穿刺術(shù)。肝干細(xì)胞陽(yáng)性對(duì)照組、假燙傷組和燙傷并膿毒癥組的小鼠肝臟標(biāo)本在燙傷后24h獲取；燙傷組小鼠肝臟標(biāo)本則分別在燙傷后12h、24h、2d、3d、7d、14d和21d獲取,每個(gè)時(shí)間點(diǎn)次隨機(jī)選取6只(3雄3雌)小鼠取材。每只小鼠的肝臟標(biāo)本均行HE染色和CK19免疫組化染色,光學(xué)顯微鏡下進(jìn)行組織學(xué)觀察。 結(jié)果：肝干細(xì)胞陽(yáng)性對(duì)照組全部小鼠的肝臟內(nèi)均有散布的小細(xì)胞增殖區(qū),增生的細(xì)胞呈卵圓細(xì)胞(OC)樣,體積小,胞漿輕度嗜堿性染色,胞核呈淺藍(lán)色,細(xì)胞核與胞漿的比值較大,CK19免疫組化染色陽(yáng)性,增生的OC位于門管區(qū)并構(gòu)成小膽管-終末膽管增生反應(yīng)。在燙傷后24h取材的燙傷組和燙傷并膿毒癥組中均各有1只雄性小鼠的部分肝臟切片偶見小范圍門管區(qū)小細(xì)胞增生,其它假燙傷組、燙傷組和燙傷并膿毒癥組小鼠的肝臟內(nèi)均未見小細(xì)胞增生,三組小鼠肝臟的CK19免疫組化染色均為陰性。 結(jié)論：25%Ⅲ度燙傷和25%Ⅲ度燙傷并膿毒癥時(shí),C57BL/6小鼠肝內(nèi)未見表達(dá)CK19抗原的肝OC增殖。 第三部分外源性肝卵圓細(xì)胞對(duì)放射性多臟器損傷的作用 目的：研究C57BL/6小鼠全身外放射傷后移植肝卵圓細(xì)胞對(duì)機(jī)體的作用。 方法：6周齡健康雌性C57BL/6小鼠共164只,12只小鼠給予DDC鼠糧,其余152只小鼠給予標(biāo)準(zhǔn)實(shí)驗(yàn)鼠糧,實(shí)驗(yàn)室飼養(yǎng)2周后進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。實(shí)驗(yàn)中移植用的肝干細(xì)胞有兩類：卵圓細(xì)胞(OC)混合細(xì)胞(含OC、膽管上皮細(xì)胞、肝臟星形細(xì)胞、竇內(nèi)皮細(xì)胞等來源于肝臟的細(xì)胞)和純化建株的OC。12只喂養(yǎng)DDC鼠糧的小鼠組成肝OC增殖組,進(jìn)行肝細(xì)胞分離實(shí)驗(yàn),提供實(shí)驗(yàn)中用于移植的OC混合細(xì)胞。純化建株的OC來自于第二軍醫(yī)大學(xué)胡以平教授的饋贈(zèng)。標(biāo)準(zhǔn)實(shí)驗(yàn)鼠糧喂養(yǎng)的152只小鼠按實(shí)驗(yàn)要求在60Co放射源下分別進(jìn)行5Gy、6Gy或9Gy的全身性外放射輻照并分入以下5部分實(shí)驗(yàn)中：9Gy全身外放射傷小鼠移植OC混合細(xì)胞的實(shí)驗(yàn)(對(duì)照組20只、OC混合細(xì)胞組20只)、9Gy全身外放射傷小鼠移植OC的實(shí)驗(yàn)(對(duì)照組20只、OC組20只)、6Gy全身外放射傷小鼠移植OC的實(shí)驗(yàn)(對(duì)照組20只、OC組20只)、5Gy全身外放射傷小鼠移植OC的實(shí)驗(yàn)(對(duì)照組10只、OC組10只)和9Gy全身外放射傷小鼠移植Hoechst33342染色的OC的實(shí)驗(yàn)(對(duì)照組6只、OC組6只)。本實(shí)驗(yàn)中所有細(xì)胞懸液均用PBS混懸,OC混合細(xì)胞懸液為1.0×107/ml單細(xì)胞懸液,用于9Gy全身外放射傷小鼠移植OC混合細(xì)胞的實(shí)驗(yàn)；OC懸液和Hoechst33342染色的OC懸液均為1.0×105/ml單細(xì)胞懸液,Hoechst33342染色的OC懸液用于9Gy全身外放射傷小鼠移植Hoechst33342染色的OC的實(shí)驗(yàn),而OC懸液用于其它OC移植實(shí)驗(yàn)。本實(shí)驗(yàn)中的對(duì)照組小鼠經(jīng)尾靜脈注射PBS200μl/只；實(shí)驗(yàn)組小鼠經(jīng)尾靜脈注射細(xì)胞懸液200gl/只。在9Gy全身外放射傷小鼠移植OC混合細(xì)胞的實(shí)驗(yàn)、9Gy全身外放射傷小鼠移植OC的實(shí)驗(yàn)和6Gy全身外放射傷小鼠移植OC的實(shí)驗(yàn)中,觀察每只小鼠的生存時(shí)間、每只死亡小鼠肝、脾、胃腸道的大體表現(xiàn)、以及輻照前第3天和輻照后第7天存活小鼠的外周血細(xì)胞計(jì)數(shù)。在5Gy全身外放射傷小鼠移植OC的實(shí)驗(yàn)中,于輻照前第3天、輻照后第7天、輻照后第14天和輻照后第21天行存活小鼠的外周血細(xì)胞計(jì)數(shù)檢查。在9Gy全身外放射傷小鼠移植Hoechst33342染色的OC的實(shí)驗(yàn)中,輻照后第4天處死全部小鼠,應(yīng)用熒光顯微鏡觀察血涂片、胃、小腸、肝、胰、脾、雙腎、雙肺、心臟、四肢肌肉、皮膚和腦組織的冰凍切片以及骨髓細(xì)胞懸液中Hoechst33342染色的藍(lán)色熒光細(xì)胞的分布情況；對(duì)小鼠全身外放射傷后第4天的小腸行HE染色并對(duì)腸損傷進(jìn)行病理學(xué)評(píng)分。 結(jié)果：9Gy全身外放射傷時(shí),對(duì)照組、OC混合細(xì)胞組和OC組45%-50%的小鼠存在肉眼可見的肝出血點(diǎn),全部小鼠均有小腸萎縮,輻照后第7天存活小鼠的WBC數(shù)為輻照前的0.55%-5.65%。9Gy全身外放射傷時(shí),OC混合細(xì)胞組小鼠生存時(shí)間與對(duì)照組無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異,輻照后第7天兩組間血細(xì)胞計(jì)數(shù)亦沒有差異。9Gy全身外放射傷時(shí),OC組小鼠中位生存時(shí)間(8天)較對(duì)照組(6天)延長(zhǎng),二組間生存率存在統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P0.05),但輻照后第7天兩組間血細(xì)胞計(jì)數(shù)沒有差異。6Gy全身外放射傷時(shí),OC組小鼠生存時(shí)間及輻照后第7天血細(xì)胞計(jì)數(shù)與對(duì)照組無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。5Gy全身外放射傷時(shí),OC組外周血細(xì)胞計(jì)數(shù)在輻照后第7天、第14天和第21天與對(duì)照組均無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。Hoechst33342染色的OC移植入9Gy全身外放射傷機(jī)體后第4天,Hoechst染色細(xì)胞僅少量散在分布于肝臟和脾臟內(nèi),而血涂片、小腸、胰、雙腎、雙肺、心臟、四肢肌肉、皮膚、腦組織以及骨髓細(xì)胞懸液中均未見Hoechst染色藍(lán)色熒光細(xì)胞。9Gy全身外放射傷后第4天,OC組的小腸損傷HE染色病理學(xué)評(píng)分為3.44±0.62,低于對(duì)照組的3.78±0.65,但二者間差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.14) 結(jié)論：9Gy全身外放射傷時(shí),C57BL/6小鼠出現(xiàn)肝損傷、小腸損傷和造血系統(tǒng)損傷等放射性多臟器傷,經(jīng)尾靜脈注射法移植2.0x104個(gè)OC可以延長(zhǎng)機(jī)體的生存時(shí)間,移植OC組小腸損傷有減輕趨勢(shì)。不同輻照劑量導(dǎo)致放射性造血系統(tǒng)損傷時(shí),外源性肝OC均未引起外周血細(xì)胞計(jì)數(shù)發(fā)生統(tǒng)計(jì)學(xué)意義上的變化。Hoechst33342染色法示蹤OC的實(shí)驗(yàn)中,外源性肝OC在宿主體內(nèi)“歸巢”于肝臟。
[Abstract]:......
【學(xué)位授予單位】：昆明醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2012
【分類號(hào)】：R818.74

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：1745599