本文選題：NGR多肽 + CD13受體��； 參考：《第四軍醫(yī)大學(xué)》2015年博士論文

【摘要】：目的:病理性血管生成對(duì)腫瘤的生長(zhǎng)、侵襲和轉(zhuǎn)移至關(guān)重要。含天冬酰胺-甘氨酸-精氨酸序列的分子探針可以特異性結(jié)合新生血管和多種腫瘤細(xì)胞表面高表達(dá)的CD13受體(氨肽酶N)。本研究擬設(shè)計(jì)合成NGR肽單體和二聚體,通過64Cu標(biāo)記進(jìn)行PET腫瘤顯像,篩選腫瘤分子顯像新探針,探索腫瘤顯像新方法;結(jié)合NGR的腫瘤靶向性與腫瘤新生血管生長(zhǎng)抑制因子(VEGI),制備新型NGR-VEGI融合蛋白,通過光學(xué)染料和核素標(biāo)記,進(jìn)行近紅外熒光光學(xué)成像和靶向腫瘤血管系統(tǒng)的核素顯像和治療。本研究基于NGR合成了多個(gè)腫瘤靶向特異性的新型探針,將為無創(chuàng)性早期檢測(cè)腫瘤血管生物過程和有效監(jiān)測(cè)抗腫瘤血管治療提供了新的方向和方法。方法:通過蛋白印記分析和細(xì)胞免疫熒光染色實(shí)驗(yàn)鑒定CD13受體表達(dá)陽性和陰性的細(xì)胞系,建立CD13受體表達(dá)陽性的腫瘤動(dòng)物模型,利用64Cu標(biāo)記的NGR肽單體和二聚體進(jìn)行CD13受體的小動(dòng)物PET在體顯像。含NGR核心序列的NGR單體(ngr1)和二聚體(ngr2)與dota進(jìn)行螯合后在乙酸銨緩沖鹽中分別進(jìn)行64cu標(biāo)記。標(biāo)記后評(píng)估64cu-dota-ngr1和64cu-dota-ngr2的體外穩(wěn)定性、細(xì)胞攝取和細(xì)胞外流,腫瘤模型動(dòng)物經(jīng)尾靜脈注射64cu-dota-ngr1和64cu-dota-ngr2后進(jìn)行生物學(xué)分布及小動(dòng)物pet顯像。制備cy5.5標(biāo)記的ngr-vegi蛋白并測(cè)定其體內(nèi)外生物學(xué)功能,通過靜脈注射于cd13受體表達(dá)陽性的荷瘤裸鼠模型上利用近紅外熒光(nirf,near-infraredfluorescence)成像進(jìn)行光學(xué)顯像和量化分析。最后,使用預(yù)錫化法進(jìn)行ngr-vegi的188re標(biāo)記,探針進(jìn)行體內(nèi)外分析后在cd13受體表達(dá)陽性的荷瘤裸鼠模型上進(jìn)行spect顯像和核素治療實(shí)驗(yàn)。結(jié)果:cd13受體高表達(dá)于人纖維腺瘤ht-1080細(xì)胞,在人結(jié)腸腺癌ht-29細(xì)胞中表達(dá)為陰性。64cu-dota-ngr2與ht-1080細(xì)胞的親和力高于64cu-dota-ngr1,是64cu-dota-ngr1的2倍。小動(dòng)物pet顯像結(jié)果提示64cu-dota-ngr2與64cu-dota-ngr1相比,在ht-1080腫瘤中攝取高且清除慢,而64cu-dota-ngr1與64cu-dota-ngr2在cd13受體表達(dá)陰性的ht-29腫瘤中均攝取低且清除快。此外,64cu-dota-ngr1與64cu-dota-ngr2是通過cd13受體介導(dǎo)與腫瘤進(jìn)行特異性結(jié)合的,注射阻斷劑量的ngr環(huán)肽[c(cngrc)]后發(fā)現(xiàn)腫瘤放射性攝取明顯下降。體外生物學(xué)分布實(shí)驗(yàn)結(jié)果與小動(dòng)物pet顯像結(jié)果一致,表明了探針體內(nèi)結(jié)合的特異性。cy5.5標(biāo)記的ngr-vegi能特異性結(jié)合ht-1080腫瘤,表現(xiàn)出快速的ht-1080腫瘤靶向性,注射后8小時(shí)即達(dá)到最高腫瘤/肌肉比值。探針與過量未標(biāo)記ngr-vegi(20mg/kg)共注射后,腫瘤的特異性攝取明顯下降,表明探針具有體內(nèi)靶向特異性。體外nirf成像進(jìn)一步證實(shí)了體內(nèi)成像的結(jié)果,在注射后8小時(shí)未封閉組顯示出優(yōu)異的腫瘤/肌肉比值(18.93±2.88),封閉組該比值顯著降低(4.92±0.75)。188re-ngr-vegi的spect成像結(jié)果顯示,ht-1080荷瘤裸鼠有良好的腫瘤/本底比值。通過共注射188re-ngr-vegi和未放射性標(biāo)記的ngr-vegi蛋白,腫瘤對(duì)188re-ngr-vegi的攝取明顯降低。生物分布實(shí)驗(yàn)結(jié)果與spect顯像結(jié)果一致,注射188re-ngr-vegi后24小時(shí)仍具有良好的腫瘤/肌肉比值(4.98±0.25)。核素治療實(shí)驗(yàn)結(jié)果提示188re-ngr-vegi(18.5mbq)治療組具有最好的抑瘤效果。結(jié)論:64Cu-DOTA-NGR1與64Cu-DOTA-NGR2在CD13受體表達(dá)強(qiáng)陽性的HT-1080荷瘤裸鼠中均顯示出較高的腫瘤攝取和滯留,是腫瘤特異性的PET顯像探針。與單體相比,二聚體顯示出更高的腫瘤攝取值和更長(zhǎng)的留存時(shí)間,64Cu-DOTA-NGR2有望成為腫瘤PET顯像的新型核素標(biāo)記探針。Cy5.5-NGR-VEGI為CD13受體高表達(dá)腫瘤提供了簡(jiǎn)便快捷、靈敏性高的靶向特異性成像方法。Cy5.5-NGR-VEGI作為一種新型的診斷治療類探針,有望提高腫瘤治療效果。188Re-NGR-VEGI有潛力作為治療診斷劑進(jìn)行CD13受體靶向腫瘤的成像和治療。以上NGR基序介導(dǎo)的靶向性分子影像探針均為腫瘤的診斷和治療提供了新的方向和方法。
[Abstract]:Objective : To investigate the growth , invasion and metastasis of tumor cells by pathological angiogenesis . The molecular probes containing asparagine - glycine - arginine sequences can specifically bind to CD13 receptor ( AMR ) expressed on the surface of tumor cells .

【學(xué)位授予單位】：第四軍醫(yī)大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號(hào)】：R730.55

【相似文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前2條

1 王詠;陳軍;林愛華;方蕓;;NGR多肽修飾的脂質(zhì)體及其抗腫瘤研究進(jìn)展[J];中國中藥雜志;2013年13期

2 ;[J];;年期

相關(guān)會(huì)議論文 前3條

1 鄭艷波;李毅;尚伯楊;吳淑英;甄永蘇;;NGR肽與力達(dá)霉素強(qiáng)化融合蛋白的制備及抗腫瘤活性[A];2009醫(yī)學(xué)前沿論壇暨第十一屆全國腫瘤藥理與化療學(xué)術(shù)會(huì)議論文集[C];2009年

2 侯少平;田維明;崔福齋;魯強(qiáng);徐群淵;;接枝NgR抗體的透明質(zhì)酸水凝膠支持神經(jīng)細(xì)胞黏附并誘導(dǎo)神經(jīng)軸突生長(zhǎng)[A];中國神經(jīng)科學(xué)學(xué)會(huì)第六屆學(xué)術(shù)會(huì)議暨學(xué)會(huì)成立十周年慶祝大會(huì)論文摘要匯編[C];2005年

3 邵明;楊志華;彭烈標(biāo);;骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞對(duì)大鼠腦梗死后神經(jīng)功能恢復(fù)及病灶周圍NgR的影響[A];中華醫(yī)學(xué)會(huì)第十三次全國神經(jīng)病學(xué)學(xué)術(shù)會(huì)議論文匯編[C];2010年

相關(guān)博士學(xué)位論文 前1條

1 馬溫惠;NGR短肽介導(dǎo)腫瘤分子探針的靶向多模態(tài)顯像及核素治療研究[D];第四軍醫(yī)大學(xué);2015年

相關(guān)碩士學(xué)位論文 前2條

1 彭佩;NGR修飾脂質(zhì)體的制備及其腫瘤靶向性研究[D];廣州中醫(yī)藥大學(xué);2014年

2 陳賢飛;靶向腫瘤細(xì)胞CD13的熒光-NGR-釓磁共振對(duì)比劑的體外實(shí)驗(yàn)研究[D];遵義醫(yī)學(xué)院;2014年

，

本文編號(hào)：1734067