本文選題：miRb　切入點(diǎn)：小鼠Bach　出處：《航天醫(yī)學(xué)與醫(yī)學(xué)工程》2017年02期 　論文類型：期刊論文

【摘要】：目的研究B細(xì)胞末端分化過程中miR30b新的作用靶點(diǎn)。方法經(jīng)生物信息學(xué)分析,利用特異性引物以及定點(diǎn)突變引物從小鼠c DNA中分別擴(kuò)增大小為530、361和189bp三個(gè)目的片段,膠回收并對(duì)361和189bp進(jìn)行拼接,獲得野生型、突變型小鼠Bach2 mRNA特異性片段,分別與pmir GLO載體連接,構(gòu)建野生型、突變型重組熒光素酶報(bào)告基因質(zhì)粒pmir GLO-m Bach2、pmir GLO-m Bach2 mt;與miR30b共轉(zhuǎn)染至HEK293 T細(xì)胞,分析其熒光素酶活性。結(jié)果重組熒光素酶報(bào)告基因質(zhì)粒經(jīng)雙酶切及測(cè)序證實(shí)構(gòu)建正確;共轉(zhuǎn)染后,與pmir GLO+miR30b組相比,pmir GLO-m Bach2+miR30b組的熒光素酶活性明顯降低(P0.05),而pmir GLO-m Bach2 mt+miR30b組的熒光素酶活性則無明顯改變(P0.05)。結(jié)論小鼠Bach2 mRNA是miR30b的靶點(diǎn)。
[Abstract]:Objective to study the new target of miR30b during terminal differentiation of B cells. Methods by bioinformatics analysis, three target fragments of 530,361 BP and 189bp were amplified from mouse c DNA by specific primers and site-directed mutated primers, respectively. The wild-type and mutant mouse Bach2 mRNA fragments were isolated from 361-189bp and ligated with pmir GLO vector to construct wild type. The recombinant luciferase reporter gene plasmid pmir GLO-m Bach2pmir GLO-m Bach2 mtwas cotransfected with miR30b into HEK293 T cells to analyze its luciferase activity. Results the recombinant luciferase reporter gene plasmid was correctly constructed by double enzyme digestion and sequencing. Compared with pmir GLO miR30b group, luciferase activity in GLO-m Bach2 miR30b group decreased significantly, but luciferase activity in pmir GLO-m Bach2 Mt miR30b group was not significantly changed. Conclusion Bach2 mRNA is the target of miR30b in mice.
【作者單位】： 山西醫(yī)科大學(xué);山西醫(yī)科大學(xué)第二臨床醫(yī)學(xué)院;
【基金】：山西醫(yī)科大學(xué)博士啟動(dòng)基金(03201426);山西醫(yī)科大學(xué)青年基金(02201518) 山西省面上青年基金(201601D021169)
【分類號(hào)】：R85

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本文編號(hào)：1631179