本文選題：mRNA　切入點：miRNA　出處：《青海大學》2017年碩士論文　論文類型：學位論文

【摘要】：目的研究大鼠腦、肝臟組織3種RNA相對表達量與死亡時間(postmortem interval,PMI)的關系,比較兩組織用于死亡時間推斷的可能性,為RNA在死亡時間推斷方面的應用提供理論依據。方法將48只Wistar大鼠隨機分為6組,斷頸處死后置于海拔2260 m、室溫12±1℃、濕度40±2%的環(huán)境中,分別于死后0 h、24 h、48 h、72 h、120 h、168 h取大鼠腦皮質及肝右外葉。將一部分腦和肝組織用4%多聚甲醛固定后進行HE染色制片觀察。另一部分腦、肝組織提取總RNA,采用實時熒光定量PCR(real-time fluorescence quantitative PCR,RT-q PCR)技術檢測兩組織中miRNA(腦特異性miR-124、肝特異性miR-122)及甘油醛-3-磷酸脫氫酶(glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase,GAPDH)、β-肌動蛋白(β-actin)m RNA的循環(huán)閾值(cyclic threshold,Ct)。用Best Keeper程序篩選內參,對目的RNA的Ct值進行2~(-ΔΔCt)轉換,用SPSS及Graph Pad軟件對其進行單因素方差分析;并對ΔCt值進行曲線回歸分析,構建回歸模型。結果1、腦組織中miR-124的標準差(standard deviation,SD)和變異系數(coefficient of variation,CV)最小,肝組織中miR-122的SD和CV最小。2、腦組織GAPDH、β-actin m RNA的相對表達量2~(-ΔΔCt)在死后72 h內逐漸增加,并于死后72 h達到峰值,之后逐漸下降(P0.05);而肝GAPDH、β-actin m RNA的相對表達量2~(-ΔΔCt)在死后24 h內不變,從死后48 h開始逐漸下降(P0.05)。3、所有目的RNA分子的ΔCt值與PMI的最適回歸模型均為三次模型,且肝組織的相關系數r大于腦組織。最適模型的回歸方程分別為:y_(腦GAPDH m RNA)=3.280-0.028x+2.343×10~(-4)x~2-5.440×10~(-7)x~3,y_(腦β-actin m RNA)=4.231-0.039x+3.985×10~(-4)x~2-1.103×10~(-6)x~3,y_(肝GAPDH m RNA)=4.965-4.460×10~(-3)x+4.328×10~(-4)x~2-1.666×10~(-6)x~3,y_(肝β-actin m RNA)=5.660-0.019x+6.064×10~(-4)x~2-1.947×10~(-6)x~3。結論1、通過內參篩選,認為miR-124和miR-122可以分別作為腦、肝組織的內參。2、在海拔2260 m、溫度12±1℃、濕度40±2%的條件下,大鼠腦組織中GAPDH、β-actin m RNA的相對表達量2~(-ΔΔCt)在死后72 h內逐漸增加,并在72 h達到高峰,之后逐漸下降;大鼠肝組織中GAPDH、β-actin m RNA的相對表達量2~(-ΔΔCt)在死后24 h內不變,從死后48 h開始逐漸下降,肝組織比腦組織更適用于死亡時間推斷。3、在海拔2260 m、溫度12±1℃、濕度40±2%的條件下,大鼠腦、肝組織中GAPDH、β-actin m RNA的ΔCt值與死亡時間的最適回歸模型均為三次模型。
[Abstract]:Objective to study the relationship between the relative expression of three kinds of RNA in brain and liver of rats and postmortem intervalation (PMI), and to compare the possibility of using the two tissues to estimate the time of death. Methods 48 Wistar rats were randomly divided into 6 groups. The rats were killed at 2 260 m above sea level, 12 鹵1 鈩，

本文編號：1577311