本文關(guān)鍵詞：GRP78和caspase12在急性缺血心肌中表達(dá)的實(shí)驗(yàn)性研究

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【摘要】：目的:利用實(shí)驗(yàn)動(dòng)物心肌缺血模型,研究心肌缺血不同時(shí)間點(diǎn)HBFP染色特點(diǎn)及GRP78和Caspase12在心肌中的表達(dá)。方法:90只SD雄性大鼠隨機(jī)分為正常對(duì)照組、假手術(shù)組、缺血30分鐘組、缺血60分鐘組、缺血90分鐘組、缺血120分鐘組,每組15只,利用結(jié)扎冠狀動(dòng)脈左前降支的方法建立心肌缺血模型,采用HE染色、HBFP染色法對(duì)各組心肌進(jìn)行染色,觀察各組中心肌的形態(tài)學(xué)表現(xiàn);應(yīng)用免疫組織化學(xué)(SABC法)技術(shù)檢測(cè)GRP78和caspase12在各組心肌中的表達(dá),并應(yīng)用Image-Pro Plus 6.0圖像分析軟件檢測(cè)各組心肌中GRP78和caspase12表達(dá)的積分光密度(IOD)值;應(yīng)用Western Blot技術(shù)對(duì)各組心肌中GRP78和caspase12表達(dá)進(jìn)行定量檢測(cè),并用Quantity One軟件分析蛋白條帶的灰度值,以目的條帶的灰度值/內(nèi)參GAPDH的灰度值作為蛋白的相對(duì)表達(dá)量。結(jié)果:1.堿性復(fù)紅法(HBFP)染色結(jié)果:正常對(duì)照組、假手術(shù)組、缺血30分鐘組、缺血60分鐘組、缺血90分鐘組、缺血120分鐘組各組正常心肌染成黃色,缺血心肌呈紅色,各組陽性例數(shù)分別為:正常組0例、假手術(shù)組2例、缺血30分鐘組12例、缺血60分鐘組12例、缺血90分鐘組13例、缺血120分鐘組14例,比較各組間陽性率,正常對(duì)照組與假手術(shù)組間差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05),各缺血組與正常對(duì)照組間差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05),各缺血組之間差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05);2.免疫組化結(jié)果:Image-Pro Plus 6.0圖像分析軟件顯示GRP78在正常對(duì)照組、假手術(shù)組、缺血30分、缺血60分、缺血90分及缺血120分組各組積分光密度(IOD)均數(shù)依次為7.8、7.9、136.5、121.5、88.6、69.5;假手術(shù)組與正常對(duì)照組比較,差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05),各缺血組與正常對(duì)照組比較,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05),不同缺血時(shí)間點(diǎn)各組間比較,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05);Caspase12在正常對(duì)照組、假手術(shù)組、缺血30分、缺血60分、缺血90分及缺血120分組各組積分光密度(IOD)均數(shù)依次為80.9、81.3、81.3、103.3、134.7、164.1;假手術(shù)組與正常對(duì)照組相比較,差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05),缺血30分鐘組與正常對(duì)照組比較,差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05),其它各不同缺血時(shí)間點(diǎn)組與正常對(duì)照組比較,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)計(jì)意義(P0.05),不同缺血時(shí)間點(diǎn)各組間比較,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05);3.Western Blot法檢測(cè)結(jié)果:用Quantity one軟件分析指標(biāo)蛋白/內(nèi)參灰度值的均數(shù),GRP78/GAPDH在正常對(duì)照、假手術(shù)、缺血30分、缺血60分、缺血90分、缺血120分均數(shù)分別為6.89、6.96、23.83、19.40、15.09、8.09;除缺血120分組外,各不同缺血時(shí)間點(diǎn)組與正常對(duì)照組相比,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05);Caspase12/GAPDH在正常對(duì)照、假手術(shù)、缺血30分、缺血60分、缺血90分、缺血120分均數(shù)分別為0.42、0.42、0.44、0.64、0.76、1.02;除缺血30分鐘組外,各不同缺血時(shí)間點(diǎn)組與正常對(duì)照組相比,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。結(jié)論:1.堿性復(fù)紅(HBFP)染色心肌缺血時(shí)特異性強(qiáng),但不可以準(zhǔn)確確定心肌缺血時(shí)間;2.免疫組織化學(xué)法及Western Blot法均顯示心肌缺血早期GRP78和caspase12蛋白表達(dá)發(fā)生變化,隨著缺血時(shí)間延伸,GRP78呈下調(diào)改變,Caspase12呈上調(diào)改變,且心肌缺血不同時(shí)段表達(dá)改變呈規(guī)律性,提示GRP78和caspase12或可成為心肌缺血與SCD的參考指標(biāo)。
【學(xué)位授予單位】：皖南醫(yī)學(xué)院
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號(hào)】：D919

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本文編號(hào)：1260836