本文關(guān)鍵詞：輻射敏感基因作為輻射損傷分子生物標(biāo)志物的可行性研究

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【摘要】：目的探索人外周血中輻射敏感基因受照后的時(shí)間、劑量效應(yīng)及其在健康人本底水平的分布情況,為其發(fā)展成為輻射損傷早期分子生物標(biāo)志物提供實(shí)驗(yàn)證據(jù)。方法1.通過(guò)引物特異性驗(yàn)證,探針?lè)翘禺愋耘懦?優(yōu)化反應(yīng)溫度等方式建立熒光定量PCR檢測(cè)方法,構(gòu)建候選基因質(zhì)粒標(biāo)準(zhǔn)品,建立標(biāo)準(zhǔn)曲線。2.利用60Coγ放射源對(duì)3名健康人外周血進(jìn)行照射,照射劑量分別為0、0.5、1、2、4、6、10 Gy,照射后培養(yǎng)0、2、4、8、12和24h,收集外周血,提取總RNA,利用實(shí)時(shí)定量熒光PCR檢測(cè)TRAF4、DDB2、POLH、GADD45A及TNFSF9基因的表達(dá)量,并擬合不同時(shí)間點(diǎn)下的劑量效應(yīng)曲線。3.本底水平研究,采集29名健康成年人的外周血作為本底組,檢驗(yàn)輻射敏感基因在健康人群中的分布情況。4.利用C57BL/6系雄性小鼠進(jìn)行體內(nèi)實(shí)驗(yàn)的驗(yàn)證,對(duì)小鼠直接進(jìn)行0、2、8Gy劑量的照射,照射后0、4、8、12、24、48、72 h檢測(cè)TRAF4、DDB2、GADD45A基因在小鼠體內(nèi)的表達(dá)變化情況,驗(yàn)證敏感基因在體內(nèi)的表達(dá)效應(yīng)。結(jié)果1.成功建立了熒光定量PCR檢測(cè)方法,構(gòu)建候選基因質(zhì)粒標(biāo)準(zhǔn)品,建立標(biāo)準(zhǔn)曲線,為后續(xù)研究奠定基礎(chǔ)。2.人外周血中TRAF4、DDB2、POLH、GADD45A基因受γ射線照射后,有較顯著的時(shí)間及劑量依賴效應(yīng),輻射敏感性好,具有作為輻射損傷分子生物標(biāo)志物的潛力。3.DDB2、POLH、GADD45A基因本底值較低且分布均一,不受性別、年齡等因素的影響,TRAF4基因受年齡因素影響較大。4.C57BL/6系雄性小鼠體內(nèi)照射驗(yàn)證,發(fā)現(xiàn)TRAF4、DDB2、GADD45A基因時(shí)間表達(dá)效應(yīng)與人外周血的表達(dá)效應(yīng)存在不同,可能物種不同或體內(nèi)外差異導(dǎo)致。結(jié)論輻射敏感基因TRAF4、DDB2、POLH、GADD45A具備作為輻射損傷分子生物標(biāo)志物的潛力。本文中建立的實(shí)時(shí)熒光定量檢測(cè)方法操作簡(jiǎn)便、快速,有希望發(fā)展成為一個(gè)新的輻射損傷劑量檢測(cè)的方法。
【學(xué)位授予單位】：青島大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號(hào)】：R818

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本文編號(hào)：1173296