本文關(guān)鍵詞：兔膝骨關(guān)節(jié)炎X線影像學(xué)動(dòng)態(tài)分析及軟骨細(xì)胞傳代后膜電位的變化

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【摘要】：膝骨關(guān)節(jié)炎(Osteoarthritis,OA)是一種以關(guān)節(jié)軟骨退變、滑膜炎、關(guān)節(jié)肌肉的萎縮和軟骨下骨重塑等為特征的慢性關(guān)節(jié)疾病。盡管臨床醫(yī)生一直致力于改進(jìn)骨關(guān)節(jié)炎的治療方法,但因發(fā)病機(jī)理不清且不易早期診斷,治療效果仍然欠佳。近年來(lái),影像學(xué)檢查在OA的診斷、疾病進(jìn)展和治療等方面起到了重要的作用。常規(guī)X線攝影檢查是簡(jiǎn)便、花費(fèi)少、廣泛應(yīng)用的無(wú)創(chuàng)性影像學(xué)檢查方法,它能夠檢測(cè)到與OA相關(guān)的特征,比如軟骨下骨硬化、骨贅、囊腫和關(guān)節(jié)間隙狹窄等變化。如能從X線片的表現(xiàn)確定OA的分期,將對(duì)OA的早期診斷起到很大的幫助。軟骨細(xì)胞作為軟骨的唯一細(xì)胞成分,其生物學(xué)變化和OA的發(fā)生發(fā)展密切相關(guān)。雖然是非興奮性細(xì)胞,大量實(shí)驗(yàn)證實(shí)軟骨細(xì)胞膜具有膜電位(RMP),軟骨細(xì)胞的體積、增殖、分化和代謝等功能對(duì)細(xì)胞內(nèi)外離子濃度變化很敏感,細(xì)胞膜電位控制著通過(guò)膜離子通道進(jìn)出的各種離子的流動(dòng),因此闡明膜電位的變化及其分子機(jī)制對(duì)于深入了解OA的發(fā)病機(jī)制具有重要意義。OA的電生理研究中需要大量的軟骨細(xì)胞,軟骨細(xì)胞來(lái)源有限,而且是高度分化的細(xì)胞,體外培養(yǎng)容易去分化,一般認(rèn)為培養(yǎng)的前3~5代細(xì)胞可以維持軟骨細(xì)胞生物學(xué)特性。尚未有文獻(xiàn)報(bào)道正常細(xì)胞和OA細(xì)胞傳代后軟骨細(xì)胞電生理特性如何變化,尤其是軟骨細(xì)胞最基本的電生理參數(shù)—RMP在傳代過(guò)程中的變化。我們采用Hulth法建立兔雙膝OA模型,應(yīng)用X線攝影技術(shù)對(duì)術(shù)前及術(shù)后的動(dòng)物進(jìn)行動(dòng)態(tài)檢查,觀察了對(duì)照組和OA組X線片中不同表現(xiàn),試圖從X線片表現(xiàn)確定兔OA的分期。采用q RT-PCR技術(shù),觀察了對(duì)照組和OA組4代軟骨細(xì)胞(P1~P4)相關(guān)特征分子基因m RNA表達(dá)的改變;同時(shí)采用膜片鉗技術(shù),測(cè)定4代細(xì)胞的RMP。第一部分兔膝骨關(guān)節(jié)炎X線影像學(xué)動(dòng)態(tài)分析目的:研究對(duì)照組及OA組兔術(shù)后不同時(shí)期的影像學(xué)表現(xiàn)。方法:應(yīng)用Hulth法建立兔雙膝OA模型,在術(shù)前至術(shù)后第12周的時(shí)間內(nèi),每隔2周應(yīng)用數(shù)字化X線攝影技術(shù)(DR)對(duì)其進(jìn)行形態(tài)學(xué)檢查,通過(guò)觀察膝關(guān)節(jié)的影像資料,并依據(jù)關(guān)節(jié)間隙比值、關(guān)節(jié)間隙角、骨贅的總個(gè)數(shù)等指標(biāo)對(duì)其進(jìn)行分析。結(jié)果:正位片可見(jiàn),在12周時(shí)間內(nèi),對(duì)照組兔膝關(guān)節(jié)無(wú)異常表現(xiàn)。與術(shù)前相比,術(shù)后2周及術(shù)后4周的OA組兔膝關(guān)節(jié)無(wú)明顯異常改變;術(shù)后6周,膝關(guān)節(jié)內(nèi)側(cè)緣唇狀骨贅,關(guān)節(jié)間隙狹窄,以內(nèi)側(cè)為著,部分關(guān)節(jié)面出現(xiàn)骨質(zhì)硬化;術(shù)后8周和術(shù)后10周骨贅數(shù)量增多,關(guān)節(jié)間隙狹窄和關(guān)節(jié)面硬化逐漸嚴(yán)重;術(shù)后12周,膝關(guān)節(jié)內(nèi)側(cè)出現(xiàn)較大骨贅,關(guān)節(jié)間隙明顯狹窄,部分關(guān)節(jié)面骨質(zhì)顯著硬化。側(cè)位片對(duì)照組及OA組均未見(jiàn)異常。與術(shù)前相比,OA組動(dòng)物從術(shù)后第6周開(kāi)始,膝關(guān)節(jié)間隙比值減小,膝關(guān)節(jié)關(guān)節(jié)間隙角增大,骨贅總個(gè)數(shù)也隨著術(shù)后時(shí)間的延長(zhǎng)而明顯增加。結(jié)論:從X線片觀察,Hulth模型兔6周之前處于OA的早期階段,6周之后進(jìn)入OA的中晚期階段。第二部分骨關(guān)節(jié)炎兔軟骨細(xì)胞傳代后膜電位的變化目的:觀察正常和骨關(guān)節(jié)炎(OA)兔軟骨細(xì)胞傳代后靜息膜電位(RMP)的變化。方法:采用經(jīng)典Hulth法,制作兔雙腿OA模型。手術(shù)后12周,體外酶解分離膝關(guān)節(jié)軟骨細(xì)胞,并傳代培養(yǎng)。采用q RT-PCR技術(shù),觀察了對(duì)照組和OA組4代軟骨細(xì)胞(P1~P4)相關(guān)特征分子基因m RNA表達(dá)的改變;同時(shí)采用膜片鉗技術(shù),測(cè)定4代細(xì)胞的RMP。結(jié)果:對(duì)照組和OA組的P1~P3代細(xì)胞相似,呈卵圓形或多角形,P4代細(xì)胞以成纖維細(xì)胞樣的梭形為主。分別與同組的P1代細(xì)胞相比,兩組動(dòng)物的P2~P4代軟骨細(xì)胞的II型膠原(COL2A1)和聚集蛋白聚糖(ACAN)的m RNA表達(dá)逐漸減少,而I型膠原(COL1A1)表達(dá)逐漸增多。與對(duì)照組P1代細(xì)胞相比,OA組P1代細(xì)胞COL2A1和ACAN的m RNA表達(dá)減少,軟骨細(xì)胞RMP值明顯降低。分別與各組的P1代細(xì)胞相比,對(duì)照組P4代細(xì)胞RMP數(shù)值減少,而OA組P4代細(xì)胞RMP數(shù)值增加。結(jié)論:正常和OA軟骨細(xì)胞傳代后均會(huì)發(fā)生去分化現(xiàn)象,RMP可以作為描述去分化的指標(biāo),正常和OA軟骨細(xì)胞培養(yǎng)前3代可以保持各自的生物學(xué)特性,適合軟骨組織再生修復(fù)及OA疾病研究使用。
【學(xué)位授予單位】：河北醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號(hào)】：R684.3;R816.8

【參考文獻(xiàn)】

中國(guó)期刊全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前6條

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本文編號(hào)：1143435