本文關鍵詞：矢車菊素-3-O-葡萄糖苷對心臟保護作用的研究

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【摘要】：花色苷(Anthocyanins)是一類水溶性類黃酮組群,廣泛存在于水果和蔬菜中,具有抗氧化、抗動脈粥樣硬化、抗炎等多種生理功能。研究采用熒光光譜法、紫外-可見吸收光譜法、圓二色譜法及分子對接等技術手段,對矢車菊素-3-O-葡萄糖苷(C3G)與牛血清蛋白(BSA)、血紅蛋白(Hb)以及肌紅蛋白(Mb)之間的相互作用進行了探究,并計算了C3G與蛋白質結合后的游離濃度,為研究花色苷在體內的轉運、分布、貯存和發(fā)揮生理功效提供了理論依據(jù)。在此研究基礎上,利用Langendorff離體心臟灌流技術,進一步研究了C3G對大鼠離體心臟缺血再灌注損傷(MIRI)的保護作用,揭示了C3G對大鼠心臟MIRI的保護機制可能與自噬有關,為花色苷功能食品、藥品的開發(fā)提供理論參考。研究內容主要分為以下兩個部分:1.第一部分運用熒光光譜、紫外-可見吸收光譜、圓二色譜以及分子對接等多種方法研究了在體外模擬生理條件下C3G與三種蛋白質(BSA、Hb和Mb)之間的相互作用。熒光光譜以及時間分辨熒光試驗結果表明,C3G與三種蛋白質相互作用的猝滅機制均為靜態(tài)猝滅;根據(jù)結合常數(shù)Ka值的大小可判斷與C3G結合能力排序是:BSAMbHb;三種蛋白質與C3G的熱力學參數(shù)及分子對接試驗表明C3G與BSA、Hb和Mb之間的作用力類型主要為氫鍵與范德華力;C3G與BSA、Hb和Mb的結合距離分別為2.52 nm、2.53 nm和2.62nm。同步熒光光譜、三維熒光光譜和圓二色譜的研究結果均表明,C3G與三種蛋白質之間發(fā)生了相互作用,并且使蛋白質的二級結構發(fā)生了變化;在加入C3G后,BSA的α-螺旋含量降低了,而Hb和Mb的α-螺旋含量相比之前有所增加。經過計算,與BSA和Hb相互作用后的游離C3G的濃度分別為:fu92%和fu93%。2.第二部分采用Langendorff離體心臟灌流技術研究了C3G對大鼠心臟缺血再灌注的保護作用。心率監(jiān)測結果顯示,對大鼠離體心臟進行C3G前處理,能明顯改善大鼠心肌功能。理化指標的檢測結果表明,C3G的加入可減少心肌細胞乳酸脫氫酶(LDH)的釋放以及冠脈流出液中肌酸激酶同工酶(CK-MB)的含量,從而降低心肌細胞的損傷程度,改善心肌的功能。蛋白質免疫印跡結果顯示,給予C3G后,心肌組織中Beclin-1的表達量和LC3-II/LC3-I的比例顯著下降,提示C3G對大鼠心肌細胞的自噬具有一定的抑制作用。綜合結果表明,C3G在體內是通過抑制自噬從而起到對大鼠MIRI的保護作用。
【關鍵詞】：矢車菊素-3-O-葡萄糖苷 蛋白質 光譜法 心肌缺血再灌注損傷 自噬
【學位授予單位】：山東師范大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2016
【分類號】：TS201.2;R151
【目錄】：

• 中英文名詞術語對照6-7
• 中文摘要7-9
• 英文摘要9-11
• 第一章 綜述11-25
• 1 花色苷的研究概述11-14
• 1.1 花色苷的結構與分類11-12
• 1.2 花色苷的生理功能12-14
• 2 小分子與蛋白質的相互作用的研究14-18
• 2.1 蛋白質的研究概述14-15
• 2.2 小分子與蛋白質作用的研究方法15-18
• 3 自噬及其在MIRI中的作用研究概述18-22
• 3.1 自噬的分類及過程19-20
• 3.2 自噬的信號途徑20
• 3.3 自噬的常見檢測方法20-21
• 3.4 自噬在心肌缺血再灌注損傷中的作用21-22
• 4 花色苷功能性研究進展22-23
• 5 本文選題意義、研究內容和創(chuàng)新點23-25
• 第二章 矢車菊素3O-葡萄糖苷與三種蛋白質的相互作用機理25-52
• 1 引言25-26
• 2 材料與方法26-30
• 2.1 試劑26
• 2.2 儀器26-27
• 2.3 實驗方法27-30
• 3 結果與討論30-50
• 3.1 C3G對BSA/Hb/Mb紫外-可見吸收光譜30-31
• 3.2 C3G對BSA/Hb/Mb熒光光譜的影響31-33
• 3.3 熒光猝滅機制33-37
• 3.4 結合常數(shù)和結合位點數(shù)的確定37-38
• 3.5 熱力學參數(shù)及結合力類型的確定38
• 3.6 非輻射能量轉移理論探究C3G與BSA/Hb/Mb的相互作用38-40
• 3.7 C3G對BSA/Hb/Mb二級結構的影響40-49
• 3.8 C3G與BSA和Hb相結合的平衡濃度49-50
• 4 本章結論50-52
• 第三章 矢車菊素3O-葡萄糖苷對大鼠離體心臟缺血再灌注損傷的保護作用52-64
• 1 引言52
• 2 材料與方法52-58
• 2.1 動物52
• 2.2 試劑52-53
• 2.3 儀器53-54
• 2.4 試劑的配制54
• 2.5 實驗方法54-57
• 2.6 統(tǒng)計方法57-58
• 3 結果與討論58-63
• 3.1 游離C3G的計算58
• 3.2 C3G對大鼠心率的影響58-59
• 3.3 C3G對大鼠離體心臟冠脈流出液中心肌酶的影響59-61
• 3.4 C3G對大鼠心肌組織中Beclin-1 和LC3蛋白表達量的影響61-63
• 4 本章結論63-64
• 第四章 結論64-65
• 第五章 展望65-66
• 參考文獻66-74
• 攻讀學位期間發(fā)表論文情況74-75
• 致謝75

【參考文獻】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 李Z，

本文編號：765396