本文關鍵詞：重金屬納米鎳致癌分子機制研究

  更多相關文章： 納米鎳 JB6細胞 致癌性 沒食子兒茶素沒食子酸酯 MAPK信號通路

【摘要】：目的：本研究采用小鼠上皮JB6細胞作為研究對象，通過體外試驗來探索重金屬納米鎳可能的致癌毒性機制并選用合適的抗氧化劑來抑制納米鎳的毒性。為納米鎳潛在致癌性的評價、防治和拮抗藥物的開發(fā)提供科學依據(jù)。 方法：1、通過MTT試驗來檢測不同濃度納米鎳（0-10μg/cm2）對JB6細胞增殖的影響（即單純納米鎳染毒組），以及加入濃度為10μM的沒食子兒茶素沒食子酸酯（-Epigallocatechin-3-gallate, EGCG）對經(jīng)不同濃度納米鎳染毒后細胞增殖的影響（抗氧化劑組）。 2、使用流式細胞儀對處理后兩組JB6細胞的細胞周期和細胞凋亡情況進行檢測。 3、通過熒光探針染料對處理后的兩組JB6細胞進行染色，并在激光共聚焦顯微鏡下觀察細胞微絲結(jié)構(gòu)和氧化應激水平的變化。 4、通過螢光色素酶試驗來檢測處理后兩組JB6細胞中AP-1和NF-κB轉(zhuǎn)錄因子的表達情況。 5、通過蛋白印跡法檢測處理后兩組JB6細胞中MAPK信號通路相關蛋白的表達情況。 結(jié)果：1、細胞增殖試驗結(jié)果顯示：在經(jīng)不同濃度納米鎳染毒24h后，細胞存活數(shù)目隨染毒濃度的升高而逐漸減少，而EGCG可對染毒后的細胞起到一定的保護作用，尤其在7.5和10μg/cm2的納米鎳染毒濃度。 2、細胞凋亡和周期試驗結(jié)果顯示：納米鎳造成的細胞死亡主要以凋亡為主，且低濃度的納米鎳可以將JB6細胞阻滯在G0/G1期，而高濃度的鎳納米顆粒能將細胞阻滯在G2/M期。而EGCG對納米鎳造成的細胞凋亡具有一定保護作用且能將納米鎳染毒后的細胞維持在一個較高的G0/G1期比例。 3、經(jīng)高濃度的納米鎳染毒（7.5、10μg/cm2）后，JB6細胞微絲的正常結(jié)構(gòu)逐漸消失并圍繞細胞核形成明顯的致密束。EGCG能在一定程度上緩解納米鎳染毒造成的微絲結(jié)構(gòu)破壞，但無法阻止微絲致密束的形成。 4、EGCG能明顯降低納米鎳染毒后細胞內(nèi)ROS和O2-水平。 5、納米鎳能夠上調(diào)JB6細胞中Ap-1和NF-κB等轉(zhuǎn)錄因子的表達水平，而EGCG能起到抑制作用。 6、納米鎳能上調(diào)MAPK通路磷酸化的水平而抗氧化劑能降低該通路磷酸化水平的表達。 結(jié)論：1、納米鎳能抑制JB6細胞的增殖同時增加細胞凋亡；抗氧化劑EGCG能抑制納米鎳的毒性并對細胞起到保護作用。 2、低濃度納米鎳染毒后能促進細胞凋亡而高濃度可能會損傷細胞DNA，EGCG能對納米鎳引起的致癌性起到一定的抑制作用。 3、納米鎳對JB6細胞的毒性可能通過氧化應激損傷來實現(xiàn)，而EGCG能降低細胞內(nèi)氧化應激水平。 4、納米鎳可能通過上調(diào)AP-1和NF-κB轉(zhuǎn)錄因子的水平來實現(xiàn)其致癌毒性，而抗氧化劑能在一定程度上拮抗該作用。 5、納米鎳通過上調(diào)MAPK細胞信號通路尤其是P38和ERK1/2的磷酸化水平來實現(xiàn)其致癌性，，而抗氧化劑能下調(diào)MAPK細胞信號通路的磷酸化水平從而起到保護作用。
【關鍵詞】：納米鎳 JB6細胞 致癌性 沒食子兒茶素沒食子酸酯 MAPK信號通路
【學位授予單位】：寧波大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2014
【分類號】：R114
【目錄】：

• 摘要4-6
• Abstract6-11
• 引言11-15
• 1 材料15-21
• 1.1 實驗材料15
• 1.1.1 重金屬納米鎳15
• 1.1.2 實驗細胞株15
• 1.1.3 抗氧化劑材料15
• 1.2 實驗試劑15-19
• 1.2.1 細胞培養(yǎng)相關試劑及配置15-16
• 1.2.2 實驗及其他輔助試劑及配置16-19
• 1.3 主要實驗儀器19-21
• 2 研究方法21-27
• 2.1 納米材料的配置及物理特征檢測21
• 2.2 細胞培養(yǎng)及處理21-22
• 2.2.1 細胞復蘇21
• 2.2.2 細胞換液21
• 2.2.3 細胞傳代21
• 2.2.4 細胞凍存21-22
• 2.3 MTT 實驗22
• 2.4 細胞周期實驗22-23
• 2.4.1 細胞接種及染毒22
• 2.4.2 細胞收集22-23
• 2.4.3 細胞固定及流式細胞儀檢測23
• 2.5 細胞凋亡實驗23
• 2.5.1 細胞接種及染毒23
• 2.5.2 細胞收集23
• 2.5.3 細胞處理及流式細胞儀檢測23
• 2.6 細胞微絲結(jié)構(gòu)觀察實驗23-24
• 2.6.1 準備爬片和接種染毒23
• 2.6.2 微絲熒光染色23-24
• 2.7 細胞自由基（ROS）生成狀況觀察實驗24
• 2.7.1 準備爬片和接種染毒24
• 2.7.2 細胞自由基染色24
• 2.8 螢光色素酶檢測基因（Luciferase 法）表達實驗24
• 2.9 蛋白免疫印跡（West-blotting 法）實驗24-26
• 2.9.1 蛋白提取24-25
• 2.9.2 BCA 法測定總蛋白質(zhì)含量25
• 2.9.3 蛋白印跡實驗25-26
• 2.10 統(tǒng)計數(shù)據(jù)分析26-27
• 3 實驗結(jié)果27-41
• 3.1 納米鎳的物理特征27-28
• 3.2 單純納米鎳染毒組和抗氧化劑組中 JB6 細胞生存率變化28-29
• 3.3 單純納米鎳染毒組和抗氧化劑組中 JB6 細胞形態(tài)學觀察29-31
• 3.4 單純納米鎳染毒組和抗氧化劑組中 JB6 細胞周期變化31-33
• 3.5 單純納米鎳染毒組和抗氧化劑組中 JB6 細胞凋亡變化33-35
• 3.6 單純納米鎳染毒組和抗氧化劑組中 JB6 細胞微絲結(jié)構(gòu)變化35-37
• 3.7 單純納米鎳染毒組和抗氧化劑組自由基變化情況37
• 3.8 單純納米鎳染毒組和抗氧化劑組螢光色素酶變化37-38
• 3.9 單純納米鎳染毒組和加抗氧化劑組 MAPK 通路蛋白變化38-41
• 4 討論41-45
• 4.1 單純納米鎳和加抗氧化劑對 JB6 細胞的生存率、細胞周期、細胞凋亡等的影響41-42
• 4.2 單純納米鎳和加抗氧化劑對 JB6 細胞內(nèi)氧化應激及細胞骨架的影響42-43
• 4.3 單純納米鎳和加抗氧化劑對 JB6 細胞中轉(zhuǎn)錄因子及 MAPK 通路蛋白的影響43-44
• 4.4 研究的展望和本研究的局限性44-45
• 5 結(jié)論45-46
• 6 參考文獻46-52
• 7 附錄A：綜述52-62
• 參考文獻58-62
• 8 附錄 B：英文縮略詞62-64
• 9 在學研究成果64-66
• 致謝66

【參考文獻】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前2條

1 劉紅云;白偉;張智勇;胡友彪;趙宇亮;劉年慶;;納米氧化物對斑馬魚胚胎孵化率的影響[J];中國環(huán)境科學;2009年01期

2 黃琴琴;王永祿;李學明;;納米載體材料毒理學效應及其作用機制研究進展[J];中國藥房;2011年21期

本文編號：711147