本文關鍵詞：醋酸鉛對體外培養(yǎng)小鼠睪丸間質(zhì)細胞的毒性作用及凋亡機理的研究

  更多相關文章： 醋酸鉛 小鼠 睪丸間質(zhì)細胞 氧化損傷 細胞凋亡 死亡受體途徑

【摘要】：隨著環(huán)境鉛污染和職業(yè)鉛暴露的日趨嚴重,鉛對人類和動物的生殖毒性倍受關注,但鉛的生殖毒性機制還不很清楚。睪丸間質(zhì)細胞作為生精細胞的支架,可為生精細胞提供必需的營養(yǎng)物質(zhì),能合成與分泌雄激素結合蛋白為生精細胞提供高濃度的雄激素環(huán)境,并具備一定的吞噬功能等,是體內(nèi)一種非常重要的雄性生殖細胞。因此,在本研究中,選用小鼠睪丸間質(zhì)細胞(TM3細胞)為研究對象,探討鉛對雄性動物生殖細胞的損傷作用及機制,為進一步研究開發(fā)新型鉛特效解毒藥提供試驗基礎和理論依據(jù),并為防治由重金屬引發(fā)的畜禽繁殖機能障礙提供新的切入點。 研究目的：以體外培養(yǎng)TM3細胞為模型,觀察堿式醋酸鉛對其凋亡的影響,進而探索凋亡死亡受體途徑的機制。 研究方法：體外培養(yǎng)小鼠睪丸間質(zhì)細胞,胰酶消化傳代后,待細胞密度達到80%,將細胞分為四組,分別加入0,2,10,50μmol/L的醋酸鉛染毒TM3細胞,作用24h后,采用MTT法檢測醋酸鉛對細胞增殖的影響；用氮藍四唑(NBT)顯色法檢測SOD活性變化,用硫代巴比妥酸法測定細胞中MDA的含量,間接法檢測細胞中GSH-Px活力,ABTS法檢測總抗氧化能力即T-AOC;Hoechest33258和Annexin-FITC/PI雙染法檢測細胞凋亡；Westernblot檢測Caspase-8,FAS,FASI蛋白含量,以及Caspase-8阻斷劑對細胞凋亡的抑制作用。 結果：TM3細胞在36℃、5%CO2環(huán)境下生長良好,12-36h為細胞對數(shù)生長期。醋酸鉛抑制TM3細胞增殖；試驗所選濃度2,10,50μM醋酸鉛均顯著降低抗氧化酶SOD、GSH-Px活性以及總抗氧化能力T-AOC,升高MDA的含量從而引起細胞氧化損傷；研究表明醋酸鉛誘導細胞凋亡,最高細胞凋亡率可達33.87%,且通過死亡受體途徑的FAS/FAS-L途徑誘導TM3細胞凋亡。主要表現(xiàn)為：醋酸鉛組的FAS, FAS-L, Caspase-8蛋白含量與對照組相比顯著增多,以及Caspase-8抑制劑(C21H34N4O10)顯著抑制醋酸鉛所誘導的TM3細胞凋亡。 結論：醋酸鉛對TM3細胞的毒性作用,主要是通過脂質(zhì)過氧化作用引起細胞的氧化損傷,誘導細胞凋亡而實現(xiàn)的,FAS/FAS-L介導的死亡受體信號轉導通路在調(diào)控TM3細胞凋亡中起著重要作用。
【關鍵詞】：醋酸鉛 小鼠 睪丸間質(zhì)細胞 氧化損傷 細胞凋亡 死亡受體途徑
【學位授予單位】：河南農(nóng)業(yè)大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2014
【分類號】：R114
【目錄】：

• 致謝4-7
• 附錄7-8
• 摘要8-9
• 文獻綜述9-15
• 1 選題目的及意義9-10
• 2 鉛在人體的吸收、分布和代謝10
• 2.1 鉛的吸收10
• 2.2 鉛的分布10
• 2.3 鉛的排泄10
• 3 鉛的毒性作用10-12
• 3.1 鉛對生殖的毒性作用10-11
• 3.2 鉛對雄性生殖毒理可能機制11-12
• 3.3 鉛對細胞凋亡的影響12
• 4 細胞凋亡12-13
• 4.1 細胞凋亡的特征12-13
• 4.2 細胞凋亡死亡受體通路13
• 5 睪丸間質(zhì)細胞13-15
• 第一部分 醋酸鉛對TM_3細胞的毒性作用15-33
• 1 材料與方法15-20
• 1.1 主要試劑與儀器15-17
• 1.1.1 試驗材料15
• 1.1.2 主要試劑15-16
• 1.1.3 主要儀器16-17
• 1.1.4 主要試劑配制17
• 1.2 試驗方法17-20
• 1.2.1 細胞培養(yǎng)17
• 1.2.2 MTT法檢測細胞活力17
• 1.2.3 細胞染毒及分組17
• 1.2.4 細胞內(nèi)總蛋白提取17-18
• 1.2.5 總蛋白含量的測定18
• 1.2.6 SOD、MDA及GSH-Px、T-AOC的測定18-20
• 1.2.7 Hechst33258凋亡檢測20
• 1.2.8 Annexin-FITC/PI雙染20
• 1.3 統(tǒng)計學分析20
• 2 結果與分析20-31
• 2.1 正常TM_3細胞的細胞形態(tài)20-21
• 2.2 醋酸鉛對TM_3細胞的細胞毒性21-22
• 2.3 細胞中T-SOD、MDA、GSH-Px及T-AOC的測定22-26
• 2.3.1 T-SOD活性的測定22-23
• 2.3.2 MDA含量的測定23-24
• 2.3.3 GSH-Px活力的測定24-25
• 2.3.4 T-AOC含量的測定25-26
• 2.4 Hoechst 33258對細胞凋亡的檢測26-28
• 2.6 Annexin V-FITC/PI雙染色法檢測TM_3細胞凋亡28-31
• 3 討論31-33
• 第二部分 醋酸鉛誘導TM3細胞凋亡機理的研究33-47
• 1 材料與方法33-38
• 1.1 主要試劑與儀器33-36
• 1.1.1 試驗材料33
• 1.1.2 主要試劑33-34
• 1.1.3 主要儀器34-35
• 1.1.4 主要試劑配制35-36
• 1.2 試驗方法36-38
• 1.2.1 Western blot檢測Caspase-8,FAS,FAS-L蛋白含量36-37
• 1.2.2 Annexin-FITC/PI雙染檢測Caspase-8抑制劑對醋酸鉛誘導TM_3細胞凋亡的影響37-38
• 1.3 統(tǒng)計學分析38
• 2 結果與分析38-44
• 2.1 Western blot檢測Caspase-8、FAS、FAS-L蛋白含量38-42
• 2.1.1 Caspase-8蛋白含量的檢測38-39
• 2.1.2 FAS蛋白含量的檢測39-40
• 2.1.3 FAS-L蛋白含量的檢測40-42
• 2.2 Annexin-FITC/PI雙染檢測Caspase-8抑制劑對醋酸鉛誘導TM_3細胞凋亡的影響42-44
• 3 討論44-47
• 參考文獻47-51
• Abstract51-53
• 作者簡介53

【參考文獻】

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9 李s

本文編號：675631