本文關(guān)鍵詞：醋酸鉛對(duì)體外培養(yǎng)小鼠睪丸間質(zhì)細(xì)胞的毒性作用及凋亡機(jī)理的研究

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【摘要】：隨著環(huán)境鉛污染和職業(yè)鉛暴露的日趨嚴(yán)重,鉛對(duì)人類和動(dòng)物的生殖毒性倍受關(guān)注,但鉛的生殖毒性機(jī)制還不很清楚。睪丸間質(zhì)細(xì)胞作為生精細(xì)胞的支架,可為生精細(xì)胞提供必需的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì),能合成與分泌雄激素結(jié)合蛋白為生精細(xì)胞提供高濃度的雄激素環(huán)境,并具備一定的吞噬功能等,是體內(nèi)一種非常重要的雄性生殖細(xì)胞。因此,在本研究中,選用小鼠睪丸間質(zhì)細(xì)胞(TM3細(xì)胞)為研究對(duì)象,探討鉛對(duì)雄性動(dòng)物生殖細(xì)胞的損傷作用及機(jī)制,為進(jìn)一步研究開(kāi)發(fā)新型鉛特效解毒藥提供試驗(yàn)基礎(chǔ)和理論依據(jù),并為防治由重金屬引發(fā)的畜禽繁殖機(jī)能障礙提供新的切入點(diǎn)。 研究目的：以體外培養(yǎng)TM3細(xì)胞為模型,觀察堿式醋酸鉛對(duì)其凋亡的影響,進(jìn)而探索凋亡死亡受體途徑的機(jī)制。 研究方法：體外培養(yǎng)小鼠睪丸間質(zhì)細(xì)胞,胰酶消化傳代后,待細(xì)胞密度達(dá)到80%,將細(xì)胞分為四組,分別加入0,2,10,50μmol/L的醋酸鉛染毒TM3細(xì)胞,作用24h后,采用MTT法檢測(cè)醋酸鉛對(duì)細(xì)胞增殖的影響；用氮藍(lán)四唑(NBT)顯色法檢測(cè)SOD活性變化,用硫代巴比妥酸法測(cè)定細(xì)胞中MDA的含量,間接法檢測(cè)細(xì)胞中GSH-Px活力,ABTS法檢測(cè)總抗氧化能力即T-AOC;Hoechest33258和Annexin-FITC/PI雙染法檢測(cè)細(xì)胞凋亡；Westernblot檢測(cè)Caspase-8,FAS,FASI蛋白含量,以及Caspase-8阻斷劑對(duì)細(xì)胞凋亡的抑制作用。 結(jié)果：TM3細(xì)胞在36℃、5%CO2環(huán)境下生長(zhǎng)良好,12-36h為細(xì)胞對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期。醋酸鉛抑制TM3細(xì)胞增殖；試驗(yàn)所選濃度2,10,50μM醋酸鉛均顯著降低抗氧化酶SOD、GSH-Px活性以及總抗氧化能力T-AOC,升高M(jìn)DA的含量從而引起細(xì)胞氧化損傷；研究表明醋酸鉛誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡,最高細(xì)胞凋亡率可達(dá)33.87%,且通過(guò)死亡受體途徑的FAS/FAS-L途徑誘導(dǎo)TM3細(xì)胞凋亡。主要表現(xiàn)為：醋酸鉛組的FAS, FAS-L, Caspase-8蛋白含量與對(duì)照組相比顯著增多,以及Caspase-8抑制劑(C21H34N4O10)顯著抑制醋酸鉛所誘導(dǎo)的TM3細(xì)胞凋亡。 結(jié)論：醋酸鉛對(duì)TM3細(xì)胞的毒性作用,主要是通過(guò)脂質(zhì)過(guò)氧化作用引起細(xì)胞的氧化損傷,誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡而實(shí)現(xiàn)的,FAS/FAS-L介導(dǎo)的死亡受體信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路在調(diào)控TM3細(xì)胞凋亡中起著重要作用。
【關(guān)鍵詞】：醋酸鉛 小鼠 睪丸間質(zhì)細(xì)胞 氧化損傷 細(xì)胞凋亡 死亡受體途徑
【學(xué)位授予單位】：河南農(nóng)業(yè)大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2014
【分類號(hào)】：R114
【目錄】：

• 致謝4-7
• 附錄7-8
• 摘要8-9
• 文獻(xiàn)綜述9-15
• 1 選題目的及意義9-10
• 2 鉛在人體的吸收、分布和代謝10
• 2.1 鉛的吸收10
• 2.2 鉛的分布10
• 2.3 鉛的排泄10
• 3 鉛的毒性作用10-12
• 3.1 鉛對(duì)生殖的毒性作用10-11
• 3.2 鉛對(duì)雄性生殖毒理可能機(jī)制11-12
• 3.3 鉛對(duì)細(xì)胞凋亡的影響12
• 4 細(xì)胞凋亡12-13
• 4.1 細(xì)胞凋亡的特征12-13
• 4.2 細(xì)胞凋亡死亡受體通路13
• 5 睪丸間質(zhì)細(xì)胞13-15
• 第一部分 醋酸鉛對(duì)TM_3細(xì)胞的毒性作用15-33
• 1 材料與方法15-20
• 1.1 主要試劑與儀器15-17
• 1.1.1 試驗(yàn)材料15
• 1.1.2 主要試劑15-16
• 1.1.3 主要儀器16-17
• 1.1.4 主要試劑配制17
• 1.2 試驗(yàn)方法17-20
• 1.2.1 細(xì)胞培養(yǎng)17
• 1.2.2 MTT法檢測(cè)細(xì)胞活力17
• 1.2.3 細(xì)胞染毒及分組17
• 1.2.4 細(xì)胞內(nèi)總蛋白提取17-18
• 1.2.5 總蛋白含量的測(cè)定18
• 1.2.6 SOD、MDA及GSH-Px、T-AOC的測(cè)定18-20
• 1.2.7 Hechst33258凋亡檢測(cè)20
• 1.2.8 Annexin-FITC/PI雙染20
• 1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析20
• 2 結(jié)果與分析20-31
• 2.1 正常TM_3細(xì)胞的細(xì)胞形態(tài)20-21
• 2.2 醋酸鉛對(duì)TM_3細(xì)胞的細(xì)胞毒性21-22
• 2.3 細(xì)胞中T-SOD、MDA、GSH-Px及T-AOC的測(cè)定22-26
• 2.3.1 T-SOD活性的測(cè)定22-23
• 2.3.2 MDA含量的測(cè)定23-24
• 2.3.3 GSH-Px活力的測(cè)定24-25
• 2.3.4 T-AOC含量的測(cè)定25-26
• 2.4 Hoechst 33258對(duì)細(xì)胞凋亡的檢測(cè)26-28
• 2.6 Annexin V-FITC/PI雙染色法檢測(cè)TM_3細(xì)胞凋亡28-31
• 3 討論31-33
• 第二部分 醋酸鉛誘導(dǎo)TM3細(xì)胞凋亡機(jī)理的研究33-47
• 1 材料與方法33-38
• 1.1 主要試劑與儀器33-36
• 1.1.1 試驗(yàn)材料33
• 1.1.2 主要試劑33-34
• 1.1.3 主要儀器34-35
• 1.1.4 主要試劑配制35-36
• 1.2 試驗(yàn)方法36-38
• 1.2.1 Western blot檢測(cè)Caspase-8,FAS,FAS-L蛋白含量36-37
• 1.2.2 Annexin-FITC/PI雙染檢測(cè)Caspase-8抑制劑對(duì)醋酸鉛誘導(dǎo)TM_3細(xì)胞凋亡的影響37-38
• 1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析38
• 2 結(jié)果與分析38-44
• 2.1 Western blot檢測(cè)Caspase-8、FAS、FAS-L蛋白含量38-42
• 2.1.1 Caspase-8蛋白含量的檢測(cè)38-39
• 2.1.2 FAS蛋白含量的檢測(cè)39-40
• 2.1.3 FAS-L蛋白含量的檢測(cè)40-42
• 2.2 Annexin-FITC/PI雙染檢測(cè)Caspase-8抑制劑對(duì)醋酸鉛誘導(dǎo)TM_3細(xì)胞凋亡的影響42-44
• 3 討論44-47
• 參考文獻(xiàn)47-51
• Abstract51-53
• 作者簡(jiǎn)介53

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：675631