發(fā)布時間：2017-07-21 03:00

  本文關(guān)鍵詞：基于顏色判定的RT-LAMP技術(shù)檢測HCoV-NL63冠狀病毒基因

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【摘要】：建立了一種適合于國境口岸簡便、快速、靈敏和特異檢測人冠狀病毒NL63(HCoV-NL63)的核酸檢測方法。通過建立基于顏色判定的逆轉(zhuǎn)錄環(huán)介導(dǎo)等溫擴(kuò)增(Reverse transcription loop-mediated isothermal amplification,RT-LAMP)技術(shù),針對HCoV-NL63核衣殼蛋白(Nucleocapsid,N)基因序列設(shè)計出6條特異性引物,在等溫條件下(63℃)進(jìn)行擴(kuò)增反應(yīng)60min,在擴(kuò)增前加入鈣黃綠素作為反應(yīng)指示劑,并結(jié)合濁度儀進(jìn)行實時監(jiān)測,以最終反應(yīng)顏色變化作為結(jié)果判斷標(biāo)準(zhǔn)。利用該方法對同種屬其他人冠狀病毒、諾如病毒、流感病毒進(jìn)行檢測,以分析該方法的診斷特異性。應(yīng)用該方法對梯度稀釋的HCoV-NL63病毒RNA進(jìn)行檢測,以分析該方法的診斷靈敏性,并與常規(guī)real-time RT-PCR方法進(jìn)行比較。結(jié)果顯示,本研究建立的基于顏色判定的RT-LAMP方法在短時間內(nèi)(40min)即可達(dá)到對HCoV-NL63的快速檢測。該檢測方法與加入其它病毒RNA模板溶液顏色均不產(chǎn)生改變,具有較高的檢測特異性。檢測靈敏性最低檢測下限為1 600拷貝/反應(yīng)。本研究建立的基于顏色判定的RT-LAMP方法可實現(xiàn)對HCoV-NL63冠狀病毒現(xiàn)場快速檢測,具有在國境口岸以及基層醫(yī)療機(jī)構(gòu)和疫區(qū)現(xiàn)場推廣應(yīng)用的潛力。
【作者單位】： 無錫出入境檢驗檢疫局中國檢驗檢疫科學(xué)研究院(無錫)人體攜帶病原體研究室;中國疾病預(yù)防控制中心病毒病預(yù)防控制所病毒病應(yīng)急技術(shù)中心;南京醫(yī)科大學(xué)基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院江蘇省現(xiàn)代病原生物學(xué)重點實驗室;
【關(guān)鍵詞】： HCoV-NL RT-LAMP 快速檢測
【基金】：傳染病重大專項(2014ZX10004001-002,2013ZX10004001)
【分類號】：R440;R185
【正文快照】： 人冠狀病毒NL63(Human coronavirus NL63,HCoV-NL63)屬于冠狀病毒科(family Coronaviri-dae)、冠狀病毒屬(genus Coronavirus)的成員,基因組為單鏈正鏈的RNA,全長約27.5kb,與HCoV-229E同屬于冠狀病毒屬α亞組[1]。HCoV-NL63自2004年首次從荷蘭一名患有急性呼吸道感染兒童的鼻

【相似文獻(xiàn)】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 周伯平,陳心春,王火生,李美忠,胡毅文,杜凡,徐六妹,楊桂林;一種新型冠狀病毒基因的克隆和序列分析與傳染性非典型肺炎病原學(xué)的調(diào)查[J];中華實驗和臨床病毒學(xué)雜志;2003年02期

2 ;農(nóng)業(yè)部疫源調(diào)查組:人類SARS病毒來自野生動物[J];養(yǎng)殖與飼料;2003年07期

3 陶生策,楊仁全,李澤,張治位,周一鳴,張瓊,朱沛軒,杜建宇,趙傳贊,馬清梅,任麗麗,王璨,蔣迪,劉彥華,楊華衛(wèi),榮利,安爽,李U，

本文編號：571088