本文關鍵詞：東北某水源地源水及生活飲用水糞便污染微生物調(diào)查與溯源研究

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【摘要】：水是人類生存不可或缺的,但目前尚有一些人得不到衛(wèi)生安全的飲用水,也有人因為飲水受到微生物污染死于水傳性疾病(water-borne disease)。生活污水和糞便有時會隨雨水徑流匯集入水體,成為水受到生物性污染的重要來源。目前我國主要通過檢測菌落總數(shù)、總大腸菌群、耐熱大腸菌群和大腸埃希氏菌對水體微生物污染進行相關監(jiān)測和評估,但這四種微生物指標都僅能用數(shù)量來表明水體受到微生物污染的程度,卻無法顯示出水體中糞便污染物的真正來。微生物源示蹤(Microbial Source Tracking, MST)技術的提出,恰好可以解決這一問題。本課題對東北某地的水源水及生活飲用水受糞便污染微生物相關狀況進行調(diào)查,并選擇大腸埃希氏菌作為指示菌,對水體微生物污染來源進行溯源及判定,為治理水體糞便污染提供依據(jù),并且為該地區(qū)建立大腸埃希氏菌基因指紋圖譜庫打下基礎。目的調(diào)查研究東北某水源地源水及生活飲用水中的糞便微生物污染狀況,在此基礎上進行追蹤溯源研究,建立己知來源的大腸埃希氏菌rep-PCR基因指紋圖譜庫,分離培養(yǎng)來自水樣品中的未知來源大腸埃希氏菌,判斷其污染來源。為治理水污染采取有效的管理和控制措施提供技術支持。方法于2015年夏秋兩季,分別對東北某水源地的源水和生活飲用水進行采集,同時在水廠上游沿河的自然村采集人和動物糞便。水樣檢測包括菌落總數(shù)、總大腸菌群、大腸埃希氏菌3項衛(wèi)生微生物學指標和大腸埃希氏菌0157：H7、沙門氏菌、志賀氏菌、副溶血性弧菌及金黃色葡萄球菌5項病原微生物學指標。腹瀉便檢測上述水中的5種病原微生物學指標,同時所有糞便和水樣均分離培養(yǎng)大腸埃希氏菌。提取大腸埃希氏菌基因組DNA,選擇BOX AIR作為rep-PCR引物進行擴增,水平瓊脂糖凝膠電泳。利用Bionumerics 7.1軟件對rep-PCR結(jié)果進行聚類分析,首先建立已知源大腸埃希氏菌特征指紋庫,再根據(jù)不同來源進行分組,分別按照七種來源(人、豬、牛、羊、雞、鴨、鵝),三種來源(人類、畜類和禽類),兩種來源(人和動物)進行判別分析,最后用該軟件將水中分離的未知源大腸埃希氏菌rep-PCR指紋圖譜與已知源指紋圖譜進行比對,判別污染來源。結(jié)果(1)水源水及生活飲用水糞便污染微生物調(diào)查結(jié)果經(jīng)消毒處理的水、自備井水、水源水的微生物指標不合格率分別為20.00%、95.45%和54.00%。總大腸菌群和大腸埃希氏菌超標是造成水樣不合格率較高的主要因素,提示該地區(qū)水源水及生活飲用水存在糞便污染。(2)大腸埃希氏菌檢出結(jié)果經(jīng)鑒定最終共獲得1044株大腸埃希氏菌,其中水來源116株,糞便來源928株。(3)致病菌檢出結(jié)果共檢出8株致病菌,分別在水樣品中檢出2株腸沙門菌雙相亞利桑那亞種,1株以色列沙門氏菌。在人的腹瀉便中檢出1株副溶血性弧菌；雞來源的腹瀉便中檢出1株都柏林沙門氏菌；分別在鴨和豬來源的便中檢出3株腸沙門菌雙相亞利桑那亞種(其中鴨來源1株、豬來源2株)。所有樣品中大腸埃希氏菌0157：H7、志賀氏菌及金黃色葡萄球菌均未檢出。(4)已知源大腸埃希氏菌特征指紋庫的建立從928株已知來源的大腸埃希氏菌的rep-PCR電泳初篩結(jié)果中共選出816株菌的指紋圖譜建立了已知來源的人及禽畜類動物源的指示菌DNA指紋庫。(5)未知源與已知源指紋圖譜比對結(jié)果104株從水樣中分離的大腸埃希氏菌,按照三分類來源判斷結(jié)果為30株(28.8%)來源于禽類,17株(16.3%)來源于畜類,18株(17.3%)來源于人類,39株(37.5%)來源未知。按照兩分類來源判斷結(jié)果為18株(17.8%)來源于人,72株(69.2%)來源于動物,14株(13.5%)來源未知。結(jié)論(1)該地區(qū)存在水源水及生活飲用水受糞便污染的情況,應加強水體微生物指標監(jiān)測,預防介水傳染病的發(fā)生。(2)綜合本次溯源研究結(jié)果,認為rep-PCR技術可以判別來源于動物和人的大腸埃希氏菌的差異,該地區(qū)糞便污染主要來源于動物,應加強管理。
【關鍵詞】：水 糞便 rep-PCR 大腸埃希氏菌 溯源
【學位授予單位】：中國疾病預防控制中心
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2016
【分類號】：R123.1
【目錄】：

• 中文摘要6-8
• Abstract8-11
• 縮略語表11-12
• 第一章 緒論12-25
• 一 MST技術13-21
• 1 源指示物的選擇13-14
• 2 源指示物的檢測14-18
• 3 源解析18-21
• 二 PCR及電泳技術21-24
• 1 PCR原理21-22
• 2 PCR反應影響因素22
• 3 電泳技術22-24
• 三 課題研究的意義24-25
• 第二章 北某水源地源水及生活飲用水糞便污染微生物調(diào)查25-30
• 1 材料與儀器25
• 2 試驗方法25-26
• 3 結(jié)果與分析26-28
• 4 討論28-30
• 第三章 北某水源地源水及生活飲用水糞便污染微生物溯源研究30-47
• 一 菌株的收集與保藏30-34
• 1 材料與儀器30
• 2 實驗與方法30-32
• 3 結(jié)果32-33
• 4 討論33-34
• 二 大腸埃希氏菌基因組DNA提取與濃度的測定34-37
• 1 材料與儀器34
• 2 實驗方法34-36
• 3 結(jié)果36
• 4 討論36-37
• 三 REP-PCR37-39
• 1 材料與儀器37
• 2 實驗方法37-38
• 3 結(jié)果38-39
• 4 討論39
• 四 瓊脂糖凝膠電泳39-45
• 1 材料與儀器39-40
• 2 實驗方法40-41
• 3 結(jié)果41-44
• 4 討論44-45
• 五 凝膠圖像分析及統(tǒng)計分析45-47
• 1 材料與儀器45
• 2 實驗方法45
• 3 結(jié)果45-46
• 4 討論46-47
• 本研究結(jié)論與思考47-48
• 本次研究不足48-49
• 致謝49-50
• 參考文獻50-56
• 附錄56-67
• 個人簡歷67
• 發(fā)表論文情況67-68
• 附件68-72

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