本文關(guān)鍵詞：胞內(nèi)鈣重分布在鉛所誘導(dǎo)的大鼠腎小管上皮細(xì)胞凋亡中的作用

  更多相關(guān)文章： 鉛 細(xì)胞凋亡 細(xì)胞內(nèi)鈣分布 腎小管上皮細(xì)胞

【摘要】：鉛是環(huán)境中一種常見的污染物,能夠通過多種方式進(jìn)入機(jī)體并對機(jī)體造成損傷;鉛對機(jī)體的損傷呈多系統(tǒng)性和多器官性。其中,腎臟是鉛毒性損傷的重要靶器官之一,而腎小管是鉛腎毒性損傷的靶部位。前期研究表明,氧化應(yīng)激所誘導(dǎo)的細(xì)胞凋亡在鉛染毒所致原代大鼠腎小管上皮細(xì)胞毒性損傷中發(fā)揮主導(dǎo)作用;同時,鉛誘導(dǎo)大鼠腎小管上皮細(xì)胞凋亡過程中伴隨胞漿鈣超載。作為重要的凋亡信號,胞漿鈣受制于線粒體與內(nèi)質(zhì)網(wǎng)的調(diào)控;二者均為重要的胞內(nèi)鈣庫,在胞內(nèi)鈣穩(wěn)態(tài)調(diào)控中發(fā)揮重要作用。因此,鉛誘導(dǎo)大鼠腎小管上皮細(xì)胞胞漿鈣水平升高的來源及胞內(nèi)鈣重分布對凋亡的影響有待于研究。本研究以原代培養(yǎng)的大鼠腎小管上皮細(xì)胞為體外染毒模型,采用胞漿Ca2+特異性探針Fluo-4-AM,線粒體Ca2+特異性探針dihydro-Rhod-2-AM和內(nèi)質(zhì)網(wǎng)Ca2+特異性探針Mag-Fluo-4-AM結(jié)合共聚焦顯微技術(shù)分別檢測鉛暴露對胞漿、線粒體和內(nèi)質(zhì)網(wǎng)不同區(qū)域Ca2+水平的影響。其次,腎小管細(xì)胞分別經(jīng)含鈣和無鈣兩種培養(yǎng)體系進(jìn)行不同時間(0,1,2 h)鉛暴露,采用流式細(xì)胞術(shù)檢測其對胞漿鈣水平的影響。細(xì)胞經(jīng)胞漿鈣螯合劑BAPTA-AM預(yù)孵育30 min,進(jìn)行鉛染毒,檢測胞漿鈣與線粒體鈣水平的變化。細(xì)胞進(jìn)行鉛與內(nèi)質(zhì)網(wǎng)鈣釋放通道受體(IP3R)特異性抑制劑2-APB共孵育12 h,檢測其對鉛所誘導(dǎo)胞內(nèi)鈣重分布的影響。同時,采用放射免疫分析法、免疫印跡分析法和定量PCR法分別檢測鉛染毒對IP3含量、IP3R兩種亞型IP3R-1與IP3R-2蛋白表達(dá)及基因轉(zhuǎn)錄水平的影響。最后,分別檢測BAPTA-AM與2-APB對鉛所誘導(dǎo)腎小管上皮細(xì)胞凋亡的影響。結(jié)果表明:在鉛暴露過程中,胞漿鈣超載主要來源于細(xì)胞內(nèi);胞漿鈣超載伴隨線粒體鈣超載和內(nèi)質(zhì)網(wǎng)鈣水平降低,而2-APB可顯著改變鉛所致的這種胞內(nèi)不同區(qū)域鈣分布。BAPTA-AM僅一定程度緩解鉛所誘導(dǎo)的線粒體鈣水平升高,表明線粒體鈣超載主要來源于內(nèi)質(zhì)網(wǎng)。鉛染毒導(dǎo)致腎小管上皮細(xì)胞胞內(nèi)IP3含量升高,IP3R-1與IP3R-2基因轉(zhuǎn)錄和蛋白表達(dá)量均顯著升高。此外,2-APB和BAPTA-AM均可顯著抑制鉛誘導(dǎo)的大鼠腎小管上皮細(xì)胞凋亡�？傊�,在鉛暴露過程中,IP3-IP3R介導(dǎo)的內(nèi)質(zhì)網(wǎng)鈣釋放是大鼠腎小管上皮細(xì)胞胞漿鈣超載與線粒體鈣超載的主要原因;胞內(nèi)鈣重分布參與調(diào)控細(xì)胞凋亡,而內(nèi)質(zhì)網(wǎng)鈣釋放在這其中發(fā)揮主導(dǎo)作用。
【關(guān)鍵詞】：鉛 細(xì)胞凋亡 細(xì)胞內(nèi)鈣分布 腎小管上皮細(xì)胞
【學(xué)位授予單位】：山東農(nóng)業(yè)大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號】：R114
【目錄】：

• 中文摘要10-11
• Abstract11-13
• 1 前言13-22
• 1.1 鉛的污染狀況及毒性研究進(jìn)展13-14
• 1.1.1 鉛的理化性質(zhì)13
• 1.1.2 鉛的污染狀況13-14
• 1.1.3 鉛的腎毒性研究進(jìn)展14
• 1.2 細(xì)胞凋亡研究進(jìn)展14-17
• 1.2.1 死亡受體通路15
• 1.2.2 線粒體通路15-16
• 1.2.3 內(nèi)質(zhì)網(wǎng)通路16-17
• 1.3 鈣離子信號與細(xì)胞凋亡17-22
• 1.3.1 胞內(nèi)鈣離子正常分布狀況18
• 1.3.2 胞內(nèi)鈣穩(wěn)態(tài)的維持18-20
• 1.3.3 鈣穩(wěn)態(tài)失衡與細(xì)胞凋亡20-22
• 2 材料與方法22-37
• 2.1 實驗動物22
• 2.2 主要試劑22-23
• 2.3 主要儀器23-24
• 2.4 實驗所用溶液的配制24-27
• 2.4.1 磷酸鹽緩沖液的配制24
• 2.4.2 含鈣及無鈣DMEM-F12細(xì)胞培養(yǎng)基的配制與除菌24-25
• 2.4.3 醋酸鉛溶液的配制25
• 2.4.4 2-APB的配制25
• 2.4.5 BAPTA-AM的配制25
• 2.4.6 10 × Western Blot蛋白質(zhì)電泳緩沖液的配制25
• 2.4.7 10 × Western Blot蛋白質(zhì)電轉(zhuǎn)印緩沖液的配制25
• 2.4.8 30 %丙烯酰胺/甲叉雙丙烯酰胺溶液(Acr/Bic)的配制25-26
• 2.4.9 10%SDS溶液的配制26
• 2.4.10 10%過硫酸銨(APS)溶液的配制26
• 2.4.11 10 × TBS溶液的配制26
• 2.4.12 1 × TBST工作液的配制26
• 2.4.13 5 % Western Blot封閉緩沖液的配制26
• 2.4.14 鼠尾膠原的制備26-27
• 2.4.15 HCl和NaOH溶液配制27
• 2.5 試驗方法27-37
• 2.5.1 SD大鼠腎小管上皮細(xì)胞原代培養(yǎng)及傳代培養(yǎng)27
• 2.5.2 試驗分組27
• 2.5.3 流式細(xì)胞儀檢測細(xì)胞凋亡27-28
• 2.5.4 胞漿鈣離子濃度的檢測28-29
• 2.5.5 線粒體鈣離子濃度的檢測29-30
• 2.5.6 內(nèi)質(zhì)網(wǎng)鈣離子濃度的檢測30-31
• 2.5.7 IP_3含量的檢測31
• 2.5.8 蛋白質(zhì)免疫印跡試驗(Western Blot)31-33
• 2.5.9 熒光定量PCR33-36
• 2.5.10 統(tǒng)計學(xué)分析36-37
• 3 結(jié)果與分析37-59
• 3.1 鉛誘導(dǎo)大鼠腎小管上皮細(xì)胞胞漿鈣超載37-40
• 3.2 鉛暴露誘導(dǎo)大鼠腎小管上皮細(xì)胞不同區(qū)域鈣分布紊亂40-42
• 3.3 鉛暴露對大鼠腎小管上皮細(xì)胞線粒體鈣及內(nèi)質(zhì)網(wǎng)鈣水平的影響42-45
• 3.4 鉛誘導(dǎo)線粒體鈣超載的來源45-49
• 3.5 2-APB對鉛暴露所誘導(dǎo)胞內(nèi)鈣分布紊亂的影響49-53
• 3.6 鉛暴露對大鼠腎小管上皮細(xì)胞內(nèi)IP_3含量的影響53-54
• 3.7 鉛暴露對胞內(nèi)IP_3R-1 和IP_3R-2 mRNA和蛋白表達(dá)水平的影響54-57
• 3.7.1 鉛暴露對IP_3R-1 和IP_3R-2 的mRNA表達(dá)水平的影響54-55
• 3.7.2 鉛暴露對IP_3R-1 和IP_3R-2 蛋白表達(dá)水平的影響55-57
• 3.8 2-APB或BAPTA-AM對鉛所誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡的影響57-59
• 4 討論59-64
• 4.1 鉛暴露誘導(dǎo)大鼠腎小管上皮細(xì)胞鈣分布紊亂59-60
• 4.2 內(nèi)質(zhì)網(wǎng)與鈣分布紊亂60-61
• 4.3 IP_3R通道介導(dǎo)的內(nèi)質(zhì)網(wǎng)鈣釋放61-62
• 4.4 鈣分布紊亂與細(xì)胞凋亡62-64
• 5 結(jié)論64-65
• 參考文獻(xiàn)65-74
• 致謝74

【相似文獻(xiàn)】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 吳雄飛,王東,劉宏,范連慧,金錫御,宋關(guān)斌,吳澤志;腎小管上皮細(xì)胞模擬缺血缺氧時黏附力的改變[J];中華腎臟病雜志;2001年06期

2 黃全勇,黃巨恩;慶大霉素對培養(yǎng)的腎小管上皮細(xì)胞毒性作用的研究進(jìn)展[J];解剖學(xué)研究;2003年01期

3 陳玲,賈汝漢,邱昌建,丁國華;脫氫抗壞血酸對高糖誘導(dǎo)腎小管上皮細(xì)胞產(chǎn)生氧自由基的影響[J];中華腎臟病雜志;2005年10期

4 李開龍,王建民,趙玲,張建國,何婭妮,楊聚榮,陳林;缺血再灌注損傷后腎小管上皮細(xì)胞的衰老演變及其意義[J];中華腎臟病雜志;2005年10期

5 羅昌霞;張永;張建鄂;李濤;;白蛋白誘導(dǎo)腎小管上皮細(xì)胞凋亡的實驗研究[J];中國醫(yī)師雜志;2006年05期

6 宋新文;鄧存良;盛云建;陳楓;王明勇;史小玲;;外周血單個核細(xì)胞對腎小管上皮細(xì)胞凋亡影響研究[J];中國煤炭工業(yè)醫(yī)學(xué)雜志;2006年03期

7 田少江;丁國華;陳鋮;賈俊亞;梁偉;;表面活性蛋白A調(diào)節(jié)腎小管上皮細(xì)胞巨噬細(xì)胞炎癥蛋白2的表達(dá)及其機(jī)制的探討[J];中華腎臟病雜志;2006年05期

8 劉麗敏;劉華鋼;黃巨恩;李校X;肖健;;酸性成纖維細(xì)胞生長因子對體外培養(yǎng)腎小管上皮細(xì)胞存活與增殖的影響[J];中國藥理學(xué)通報;2007年06期

9 劉華鋼;黃巨恩;劉麗敏;王慧杰;胡文娟;李校X;肖健;;酸性成纖維細(xì)胞生長因子對慶大霉素和順鉑所致腎小管上皮細(xì)胞損傷的保護(hù)作用[J];現(xiàn)代生物醫(yī)學(xué)進(jìn)展;2007年12期

10 楊汝春;魯盈;朱曉玲;王永鈞;;白介素-1β誘導(dǎo)腎小管上皮細(xì)胞向間充質(zhì)細(xì)胞轉(zhuǎn)化的實驗研究[J];醫(yī)學(xué)研究雜志;2007年11期

中國重要會議論文全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 于澄釩;黃曉波;許清泉;陳亮;胡衛(wèi)國;王曉峰;;納米細(xì)菌對腎小管上皮細(xì)胞的損傷作用及晶體滯留的影響研究[A];第十七屆全國泌尿外科學(xué)術(shù)會議論文匯編[C];2010年

2 劉燕;蒲蕾;楊立川;劉先蓉;樊均明;;洛伐他汀對轉(zhuǎn)化生長因子-β誘導(dǎo)的腎小管上皮細(xì)胞-肌成纖維細(xì)胞轉(zhuǎn)分化的影響[A];“中華醫(yī)學(xué)會腎臟病學(xué)分會2004年年會”暨“第二屆全國中青年腎臟病學(xué)術(shù)會議”論文匯編[C];2004年

3 朱加明;丁小強(qiáng);張曉麗;劉春鳳;;己糖胺通路活化介導(dǎo)腎小管上皮細(xì)胞表型和功能的改變[A];中華醫(yī)學(xué)會腎臟病學(xué)分會2006年學(xué)術(shù)年會論文集[C];2006年

4 李健;李曉玫;王海燕;;低密度脂蛋白誘導(dǎo)的腎小管上皮細(xì)胞活化介導(dǎo)腎間質(zhì)成纖維細(xì)胞生物學(xué)表型變化[A];中國細(xì)胞生物學(xué)學(xué)會第七次會議論文摘要匯編[C];1999年

5 朱吉莉;丁國華;王學(xué)玉;;血管緊張素Ⅱ通過抑制蛋白激酶B誘導(dǎo)腎小管上皮細(xì)胞凋亡[A];“中華醫(yī)學(xué)會腎臟病學(xué)分會2004年年會”暨“第二屆全國中青年腎臟病學(xué)術(shù)會議”論文匯編[C];2004年

6 楊曉;張春;鄧安國;朱忠華;;結(jié)締組織生長因子在腎小管上皮細(xì)胞細(xì)胞外基質(zhì)積聚中的作用[A];“中華醫(yī)學(xué)會腎臟病學(xué)分會2004年年會”暨“第二屆全國中青年腎臟病學(xué)術(shù)會議”論文匯編[C];2004年

7 張瑜;周建華;;肝素對腎小管上皮細(xì)胞膜結(jié)合補(bǔ)體調(diào)節(jié)蛋白表達(dá)的影響及意義[A];中華醫(yī)學(xué)會第十四次全國兒科學(xué)術(shù)會議論文匯編[C];2006年

8 楊雅麗;程曉霞;;腎小管上皮細(xì)胞凋亡在腎間質(zhì)纖維化中的作用及其防治的研究進(jìn)展[A];2009全國時間生物醫(yī)學(xué)學(xué)術(shù)會議論文集[C];2009年

9 譚玉莉;黃妍;楊亦彬;;魚膽汁毒素致腎小管上皮細(xì)胞死亡方式及實施干預(yù)的試驗研究[A];貴州省醫(yī)學(xué)會腎臟病學(xué)分會2008年學(xué)術(shù)年會論文匯編[C];2008年

10 喬f^;陳香美;吳鏑;丁瑞;師鎖柱;謝院生;洪權(quán);呂楊;王兆霞;尹忠;;衰老大鼠腎臟缺血/再灌注損傷中腎小管上皮細(xì)胞不同凋亡途徑的研究[A];“中華醫(yī)學(xué)會腎臟病學(xué)分會2004年年會”暨“第二屆全國中青年腎臟病學(xué)術(shù)會議”論文匯編[C];2004年

中國重要報紙全文數(shù)據(jù)庫 前1條

1 華紅梅;藥損腎先“知”[N];醫(yī)藥養(yǎng)生保健報;2006年

中國博士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 倪s，

本文編號：519366