本文關(guān)鍵詞：原花青素對鉛誘導的大鼠肝毒性的保護作用研究

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【摘要】：鉛(Lead,Pb)具有柔軟、高延展性和抗腐蝕等特點,被廣泛應(yīng)用到現(xiàn)代工業(yè)中,尤其是在發(fā)展中國家。盡管全球范圍內(nèi)已經(jīng)采取了各種措施來控制Pb污染,但是每年仍約有2萬噸的Pb以煙塵的形式排放到空氣中,對人畜健康產(chǎn)生巨大的威脅。約33%被吸收入血的Pb會儲存到肝臟中,對肝臟造成嚴重的損傷。因此,有效地減少Pb在肝臟內(nèi)的蓄積和對肝組織的損傷是亟待解決的問題。葡萄籽提取物原花青素(Grape seed proanthocyanidin extract,GSPE)是一種天然抗氧化劑,具有抗炎、抗細菌、抗癌、保護心臟、肝臟和神經(jīng)等多種生物學作用。本研究采取體內(nèi)試驗和體外試驗相結(jié)合的方法,來研究GSPE對Pb誘導的大鼠肝臟的損傷、在肝臟和骨中的蓄積、血細胞DNA損傷、氧化應(yīng)激和細胞凋亡水平的保護作用。體內(nèi)試驗選用6-8周Wistar大鼠40只,隨機分成4組,分組情況為Control組、GSPE組、Pb組和Pb+GSPE組,試驗周期為30 d。Control組大鼠自由飲水,每天灌服用于溶解GSPE的生理鹽水;GSPE組大鼠自由飲水,每天灌服200 mg/kg GSPE溶液;Pb組大鼠飲水中添加2.51 g/L醋酸鉛,每天灌服生理鹽水;Pb+GSPE組大鼠飲水中添加2.5 g/L醋酸鉛,每天灌服GSPE(200 mg/kg)溶液。30 d后,采取試劑盒方法檢測氧化應(yīng)激相關(guān)指標(超氧化物歧化酶、谷胱甘肽和丙二醛)、細胞凋亡和DNA損傷,生化分析儀測定肝功能指標丙氨酸轉(zhuǎn)氨酶(Alanine aminotransferase,ALT)和天冬氨酸轉(zhuǎn)氨酶(Aspartate transaminase,AST),采用血球分析儀測定紅細胞(Red blood cell,RBC)數(shù)量和血紅蛋白(Hemoglobin,Hb)濃度,火焰原子吸收光譜法測定肝臟和骨中的Pb含量,免疫印跡試驗檢測Nrf2信號通路和細胞凋亡信號通路相關(guān)蛋白的表達水平。體外試驗原代培養(yǎng)Wistar大鼠肝細胞,經(jīng)糖原染色鑒定肝細胞后,分別進行Pb和GSPE添加,分組如下:Control組、GSPE組(100 mg/L)、Pb組(100μM)和Pb(100μM)+GSPE(100 mg/L)組,GSPE先添加2 h,然后加入Pb孵育24 h,采用試劑盒的方法,按照說明書提供的方法檢測肝細胞活率、乳酸脫氫酶釋放和肝細胞活性氧(Reactive oxygen species,ROS)水平。結(jié)果表明:GSPE能夠緩解Pb誘導的RBC數(shù)量下降和Hb濃度的降低。由ALT、AST活性和肝組織病理切片結(jié)果可見,GSPE的添加有效地減弱Pb對肝臟的損傷。與Control組相比,Pb組超氧化物歧化酶和谷胱甘肽水平顯著降低,丙二醛含量顯著增加,這些指標提示機體處于氧化應(yīng)激狀態(tài),而GSPE減弱了Pb誘導的氧化應(yīng)激。Pb組肝臟和骨中Pb含量增加,GSPE處理后骨中的Pb蓄積明顯降低;同時,GSPE降低了肝細胞凋亡水平和DNA損傷程度。Pb+GSPE組Nrf2通路相關(guān)蛋白Nrf2、Keap 1、NQO1和HO-1蛋白表達顯著高于Pb組。與Pb組相比,GSPE+Pb組凋亡相關(guān)通路中Bcl-2和Bcl-xl的蛋白表達顯著增加,Bax和P53蛋白表達顯著降低。體外試驗結(jié)果表明,GSPE能夠阻止Pb誘導的肝細胞活率降低和細胞毒性增加,根據(jù)ROS水平檢測結(jié)果可知,GSPE能夠減少Pb誘導的ROS產(chǎn)生,達到降低氧化應(yīng)激的效果。綜上所述,GSPE可以通過減少肝臟細胞凋亡和氧化損傷降低Pb誘導的肝毒性。本研究的開展為將GSPE應(yīng)用于動物Pb中毒的防治提供理論依據(jù)和實踐基礎(chǔ)。
【關(guān)鍵詞】：鉛 原花青素 肝臟 氧化應(yīng)激 凋亡
【學位授予單位】：東北農(nóng)業(yè)大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2016
【分類號】：R114
【目錄】：

• 摘要8-10
• 英文摘要10-12
• 1 前言12-17
• 1.1 鉛（Lead，Pb）及其毒性12-15
• 1.1.1 概述12
• 1.1.2 Pb的毒代動力學12-13
• 1.1.3 Pb的毒性13
• 1.1.4 Pb與氧化應(yīng)激13-14
• 1.1.5 Pb與凋亡14
• 1.1.6 Pb與Nrf2信號轉(zhuǎn)導通路14-15
• 1.2 GSPE及其藥理作用15-16
• 1.2.1 概述15
• 1.2.2 GSPE的生物活性15-16
• 1.3 試驗?zāi)康呐c意義16-17
• 2 材料與方法17-25
• 2.1 材料17-19
• 2.1.1 主要試劑17
• 2.1.2 主要試劑配制17-18
• 2.1.3 主要儀器18-19
• 2.2 方法19-24
• 2.2.1 體內(nèi)試驗19-22
• 2.2.2 體外試驗22-24
• 2.3 數(shù)據(jù)處理24-25
• 3 結(jié)果25-36
• 3.1 大鼠肝組織病理學變化25
• 3.2 肝臟和骨中Pb蓄積的變化25-26
• 3.3 血漿中肝功能指標的變化26
• 3.4 全血中RBC數(shù)量和Hb濃度變化26-27
• 3.5 肝臟勻漿中氧化應(yīng)激相關(guān)指標的變化27
• 3.6 肝臟細胞凋亡變化27-29
• 3.7 外周血中DNA氧化損傷的變化29-30
• 3.8 GSPE對Nrf2信號通路的影響30-32
• 3.9 GSPE對凋亡信號通路的影響32-33
• 3.10 大鼠原代肝細胞形態(tài)及鑒定33
• 3.11 GSPE對Pb暴露大鼠肝細胞活率的影響33-34
• 3.12 GSPE對Pb暴露大鼠肝細胞LDH釋放的影響34
• 3.13 GSPE對Pb暴露大鼠肝細胞ROS生成的影響34-36
• 4 討論36-42
• 4.1 GSPE對Pb暴露大鼠肝臟組織損傷的影響36
• 4.2 GSPE對Pb暴露大鼠肝臟和骨中Pb蓄積的影響36-37
• 4.3 GSPE對Pb暴露大鼠血液學的影響37-38
• 4.4 GSPE對Pb暴露大鼠肝臟氧化應(yīng)激的影響38
• 4.5 GSPE對Pb暴露大鼠肝臟細胞凋亡的影響38-39
• 4.6 GSPE對Pb暴露大鼠DNA損傷的影響39
• 4.7 GSPE對Pb暴露大鼠肝臟Nrf2信號通路的影響39-40
• 4.8 GSPE對體外Pb誘導肝細胞活率和LDH釋放的影響40
• 4.9 GSPE對體外Pb誘導肝細胞ROS生成的影響40-41
• 附圖41-42
• 5 結(jié)論42-43
• 致謝43-44
• 參考文獻44-52
• 附錄52-53
• 攻讀碩士學位期間發(fā)表的學術(shù)論文53

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本文編號：516066