本文關(guān)鍵詞：丙烯腈誘導(dǎo)的氧化應(yīng)激對(duì)雄性大鼠睪丸細(xì)胞NF-κB信號(hào)通路影響的研究，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：目的:探索丙烯腈(Acrylonitrile,ACN)引起雄性大鼠睪丸氧化應(yīng)激對(duì)NF-κB信號(hào)通路的影響,以及NF-κB激活后對(duì)凋亡相關(guān)基因的調(diào)節(jié)作用,為進(jìn)一步研究ACN的睪丸生殖毒性機(jī)制提供依據(jù)。方法:將50只SPF級(jí)健康成年SD雄性大鼠,按體重隨機(jī)分為5組,每組10只,飼養(yǎng)于甘肅中醫(yī)藥大學(xué)SPF級(jí)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心,自由進(jìn)食及飲水,適應(yīng)性飼養(yǎng)一周后,以12.5、25、50 mg/kg ACN、50 mg/kg ACN+300 mg/kg N-乙酰半胱氨酸(N-acetylcysteine,NAC)灌胃,聯(lián)合組NAC灌胃30分鐘后再灌ACN,對(duì)照組大鼠給予等體積玉米油,1次/天,6天/周,共13周。每隔3天監(jiān)測(cè)一次體重,末次采血后處死動(dòng)物。(1)分離大鼠睪丸、附睪等臟器并稱(chēng)重,計(jì)算臟器系數(shù)。(2)制備睪丸HE染色病理切片,光鏡下觀(guān)察睪丸組織結(jié)構(gòu)改變。(3)可見(jiàn)光分光光度法檢測(cè)睪丸組織中超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽過(guò)氧化物酶(GSH-Px)、還原型谷胱甘肽/氧化型谷胱甘肽比值(GSH/GSSG)、丙二醛(MDA)。(4)免疫熒光染色法檢測(cè)睪丸核因子-κB(NF-κB)激活及核轉(zhuǎn)移。(5)Real-Time PCR檢測(cè)睪丸Bax、Bcl-2基因表達(dá)情況。(6)Western Blot檢測(cè)睪丸p65、IKK、IκB、p-IκB、Bax、Bcl-2蛋白表達(dá)情況。結(jié)果:(1)實(shí)驗(yàn)開(kāi)始前及染毒過(guò)程中各劑量組大鼠體重之間比較均無(wú)顯著性差異(P0.05)。中、高劑量染毒組大鼠睪丸臟器系數(shù)與對(duì)照組比較顯著降低(P0.05)。各劑量組間大鼠附睪臟器系數(shù)比較無(wú)顯著性差異(P0.05)。(2)光鏡下可見(jiàn),中劑量染毒組大鼠睪丸曲細(xì)精管密集程度較低,初級(jí)精母細(xì)胞染色程度豐富、數(shù)量較多,睪丸間質(zhì)細(xì)胞較少,輪廓較清晰。高劑量染毒組大鼠睪丸曲細(xì)精管排列稀疏,密集程度低,管徑變小,各級(jí)生精細(xì)胞排列不規(guī)則,數(shù)量少,睪丸間質(zhì)稀疏、間質(zhì)細(xì)胞數(shù)量少、輪廓不清晰。(3)低、高劑量染毒組大鼠睪丸GSH/GSSG比值、GSH-Px酶活性與對(duì)照組比較顯著降低(P0.05)。中、高劑量染毒組大鼠睪丸MDA含量與對(duì)照組比較顯著升高(P0.05)。NAC預(yù)處理后,高ACN+NAC組大鼠睪丸MDA含量與高ACN組比較顯著降低(P0.05);高ACN+NAC組大鼠睪丸GSH/GSSG比值與高ACN組比較顯著升高(P0.05);(4)免疫熒光結(jié)果顯示,高ACN組大鼠睪丸p65蛋白表達(dá)升高,轉(zhuǎn)移入細(xì)胞核p65升高,表明高ACN組大鼠睪丸NF-κB被激活。用NAC提前處理后p65蛋白表達(dá)及核轉(zhuǎn)移顯著減少。Western Blot結(jié)果示,高劑量染毒組大鼠睪丸IKK-α/β蛋白、p65蛋白、p-IκB蛋白表達(dá)與對(duì)照組比較顯著升高(P0.05),IκB蛋白表達(dá)與對(duì)照組比較顯著降低(P0.05)。高ACN+NAC聯(lián)合染毒組大鼠睪丸IKK-α/β蛋白、p65蛋白、p-IκB蛋白表達(dá)與高ACN組比較顯著降低(P0.05),IκB蛋白表達(dá)與高ACN組比較顯著升高(P0.05)。(5)RT-PCR和Western Blot結(jié)果示,高劑量染毒組大鼠睪丸Bax mRNA及蛋白表達(dá)水平與對(duì)照組比較顯著升高(P0.05)。高劑量染毒組大鼠睪丸Bcl-2 mRNA及蛋白表達(dá)水平與對(duì)照組比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。高ACN+NAC聯(lián)合染毒組大鼠睪丸Bax mRNA及蛋白表達(dá)水平與高ACN組比較顯著降低(P0.05)。結(jié)論:(1)ACN亞慢性染毒可引起大鼠睪丸發(fā)生病理性損傷。(2)ACN引起的睪丸損傷可能與氧化應(yīng)激有關(guān)。(3)ACN誘導(dǎo)睪丸細(xì)胞發(fā)生氧化應(yīng)激,激活了NF-κB信號(hào)通路,上調(diào)了促凋亡基因Bax表達(dá),這可能是大鼠睪丸細(xì)胞發(fā)生凋亡的機(jī)制之一。
【關(guān)鍵詞】：ACN 生殖損傷 氧化應(yīng)激 NF-κB 細(xì)胞凋亡
【學(xué)位授予單位】：蘭州大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類(lèi)號(hào)】：R114
【目錄】：

• 中文摘要3-5
• Abstract5-9
• 第一章 前言9-13
• 1.1 概述9
• 1.2 ACN的一般毒性及致癌性9-10
• 1.3 ACN的生殖系統(tǒng)毒性10-11
• 1.3.1 ACN的雌性生殖毒性10-11
• 1.3.2 ACN的雄性生殖毒性11
• 1.4 ACN引起生殖損傷的機(jī)制研究11-13
• 1.4.1 氧化應(yīng)激11
• 1.4.2 細(xì)胞凋亡11-13
• 第二章 材料與方法13-23
• 2.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物及分組13
• 2.2 實(shí)驗(yàn)試劑及實(shí)驗(yàn)儀器13-15
• 2.3 技術(shù)路線(xiàn)圖15-16
• 2.4 體重及臟器系數(shù)的稱(chēng)量16
• 2.5 氧化還原相關(guān)酶的測(cè)定16
• 2.6 睪丸組織HE染色病理切片制備16-17
• 2.7 NF-κB激活-核轉(zhuǎn)錄免疫熒光檢測(cè)步驟17
• 2.8 Western Blot檢測(cè)步驟17-20
• 2.9 RT-PCR檢測(cè)步驟20-22
• 2.10 統(tǒng)計(jì)分析22-23
• 第三章 結(jié)果23-31
• 3.1 體重及臟器系數(shù)23-24
• 3.2 病理學(xué)改變24
• 3.3 ACN染毒對(duì)大鼠睪丸抗氧化能力及脂質(zhì)過(guò)氧化的影響24-26
• 3.4 NAC對(duì)ACN引起睪丸氧化損傷的干預(yù)作用26
• 3.5 ACN染毒及NAC干預(yù)后對(duì)大鼠睪丸NF-κB信號(hào)通路的影響26-28
• 3.6 ACN染毒及NAC干預(yù)后大鼠睪丸Bax、Bcl-2 mRNA及蛋白變化28-31
• 第四章 討論31-35
• 4.1 ACN對(duì)大鼠睪丸臟器系數(shù)及組織病理學(xué)影響31
• 4.2 ACN誘導(dǎo)大鼠睪丸氧化應(yīng)激及NAC的干預(yù)作用31-33
• 4.3 氧化應(yīng)激激活NF-κB信號(hào)通路的機(jī)制探討33
• 4.4 NF-κB信號(hào)通路激活后對(duì)凋亡相關(guān)基因表達(dá)的調(diào)節(jié)作用33-35
• 第五章 結(jié)論35-36
• 不足之處及展望36-37
• 參考文獻(xiàn)37-42
• 在學(xué)期間的研究成果42-43
• 致謝43-44
• 附錄44-45

【相似文獻(xiàn)】

中國(guó)期刊全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前10條

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本文編號(hào)：484754