本文關(guān)鍵詞：丙烯腈誘導(dǎo)的氧化應(yīng)激對雄性大鼠睪丸細胞NF-κB信號通路影響的研究，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：目的:探索丙烯腈(Acrylonitrile,ACN)引起雄性大鼠睪丸氧化應(yīng)激對NF-κB信號通路的影響,以及NF-κB激活后對凋亡相關(guān)基因的調(diào)節(jié)作用,為進一步研究ACN的睪丸生殖毒性機制提供依據(jù)。方法:將50只SPF級健康成年SD雄性大鼠,按體重隨機分為5組,每組10只,飼養(yǎng)于甘肅中醫(yī)藥大學(xué)SPF級實驗動物中心,自由進食及飲水,適應(yīng)性飼養(yǎng)一周后,以12.5、25、50 mg/kg ACN、50 mg/kg ACN+300 mg/kg N-乙酰半胱氨酸(N-acetylcysteine,NAC)灌胃,聯(lián)合組NAC灌胃30分鐘后再灌ACN,對照組大鼠給予等體積玉米油,1次/天,6天/周,共13周。每隔3天監(jiān)測一次體重,末次采血后處死動物。(1)分離大鼠睪丸、附睪等臟器并稱重,計算臟器系數(shù)。(2)制備睪丸HE染色病理切片,光鏡下觀察睪丸組織結(jié)構(gòu)改變。(3)可見光分光光度法檢測睪丸組織中超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽過氧化物酶(GSH-Px)、還原型谷胱甘肽/氧化型谷胱甘肽比值(GSH/GSSG)、丙二醛(MDA)。(4)免疫熒光染色法檢測睪丸核因子-κB(NF-κB)激活及核轉(zhuǎn)移。(5)Real-Time PCR檢測睪丸Bax、Bcl-2基因表達情況。(6)Western Blot檢測睪丸p65、IKK、IκB、p-IκB、Bax、Bcl-2蛋白表達情況。結(jié)果:(1)實驗開始前及染毒過程中各劑量組大鼠體重之間比較均無顯著性差異(P0.05)。中、高劑量染毒組大鼠睪丸臟器系數(shù)與對照組比較顯著降低(P0.05)。各劑量組間大鼠附睪臟器系數(shù)比較無顯著性差異(P0.05)。(2)光鏡下可見,中劑量染毒組大鼠睪丸曲細精管密集程度較低,初級精母細胞染色程度豐富、數(shù)量較多,睪丸間質(zhì)細胞較少,輪廓較清晰。高劑量染毒組大鼠睪丸曲細精管排列稀疏,密集程度低,管徑變小,各級生精細胞排列不規(guī)則,數(shù)量少,睪丸間質(zhì)稀疏、間質(zhì)細胞數(shù)量少、輪廓不清晰。(3)低、高劑量染毒組大鼠睪丸GSH/GSSG比值、GSH-Px酶活性與對照組比較顯著降低(P0.05)。中、高劑量染毒組大鼠睪丸MDA含量與對照組比較顯著升高(P0.05)。NAC預(yù)處理后,高ACN+NAC組大鼠睪丸MDA含量與高ACN組比較顯著降低(P0.05);高ACN+NAC組大鼠睪丸GSH/GSSG比值與高ACN組比較顯著升高(P0.05);(4)免疫熒光結(jié)果顯示,高ACN組大鼠睪丸p65蛋白表達升高,轉(zhuǎn)移入細胞核p65升高,表明高ACN組大鼠睪丸NF-κB被激活。用NAC提前處理后p65蛋白表達及核轉(zhuǎn)移顯著減少。Western Blot結(jié)果示,高劑量染毒組大鼠睪丸IKK-α/β蛋白、p65蛋白、p-IκB蛋白表達與對照組比較顯著升高(P0.05),IκB蛋白表達與對照組比較顯著降低(P0.05)。高ACN+NAC聯(lián)合染毒組大鼠睪丸IKK-α/β蛋白、p65蛋白、p-IκB蛋白表達與高ACN組比較顯著降低(P0.05),IκB蛋白表達與高ACN組比較顯著升高(P0.05)。(5)RT-PCR和Western Blot結(jié)果示,高劑量染毒組大鼠睪丸Bax mRNA及蛋白表達水平與對照組比較顯著升高(P0.05)。高劑量染毒組大鼠睪丸Bcl-2 mRNA及蛋白表達水平與對照組比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05)。高ACN+NAC聯(lián)合染毒組大鼠睪丸Bax mRNA及蛋白表達水平與高ACN組比較顯著降低(P0.05)。結(jié)論:(1)ACN亞慢性染毒可引起大鼠睪丸發(fā)生病理性損傷。(2)ACN引起的睪丸損傷可能與氧化應(yīng)激有關(guān)。(3)ACN誘導(dǎo)睪丸細胞發(fā)生氧化應(yīng)激,激活了NF-κB信號通路,上調(diào)了促凋亡基因Bax表達,這可能是大鼠睪丸細胞發(fā)生凋亡的機制之一。
【關(guān)鍵詞】：ACN 生殖損傷 氧化應(yīng)激 NF-κB 細胞凋亡
【學(xué)位授予單位】：蘭州大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號】：R114
【目錄】：

• 中文摘要3-5
• Abstract5-9
• 第一章 前言9-13
• 1.1 概述9
• 1.2 ACN的一般毒性及致癌性9-10
• 1.3 ACN的生殖系統(tǒng)毒性10-11
• 1.3.1 ACN的雌性生殖毒性10-11
• 1.3.2 ACN的雄性生殖毒性11
• 1.4 ACN引起生殖損傷的機制研究11-13
• 1.4.1 氧化應(yīng)激11
• 1.4.2 細胞凋亡11-13
• 第二章 材料與方法13-23
• 2.1 實驗動物及分組13
• 2.2 實驗試劑及實驗儀器13-15
• 2.3 技術(shù)路線圖15-16
• 2.4 體重及臟器系數(shù)的稱量16
• 2.5 氧化還原相關(guān)酶的測定16
• 2.6 睪丸組織HE染色病理切片制備16-17
• 2.7 NF-κB激活-核轉(zhuǎn)錄免疫熒光檢測步驟17
• 2.8 Western Blot檢測步驟17-20
• 2.9 RT-PCR檢測步驟20-22
• 2.10 統(tǒng)計分析22-23
• 第三章 結(jié)果23-31
• 3.1 體重及臟器系數(shù)23-24
• 3.2 病理學(xué)改變24
• 3.3 ACN染毒對大鼠睪丸抗氧化能力及脂質(zhì)過氧化的影響24-26
• 3.4 NAC對ACN引起睪丸氧化損傷的干預(yù)作用26
• 3.5 ACN染毒及NAC干預(yù)后對大鼠睪丸NF-κB信號通路的影響26-28
• 3.6 ACN染毒及NAC干預(yù)后大鼠睪丸Bax、Bcl-2 mRNA及蛋白變化28-31
• 第四章 討論31-35
• 4.1 ACN對大鼠睪丸臟器系數(shù)及組織病理學(xué)影響31
• 4.2 ACN誘導(dǎo)大鼠睪丸氧化應(yīng)激及NAC的干預(yù)作用31-33
• 4.3 氧化應(yīng)激激活NF-κB信號通路的機制探討33
• 4.4 NF-κB信號通路激活后對凋亡相關(guān)基因表達的調(diào)節(jié)作用33-35
• 第五章 結(jié)論35-36
• 不足之處及展望36-37
• 參考文獻37-42
• 在學(xué)期間的研究成果42-43
• 致謝43-44
• 附錄44-45

【相似文獻】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 才秀蓮;郭海;王國秀;伍冬梅;;錳對大鼠睪丸毒性效應(yīng)的研究[J];遵義醫(yī)學(xué)院學(xué)報;2009年05期

2 曹連吉;高雨仁;李榮華;閻八一;;大鼠睪丸的組織化學(xué)觀察[J];山西醫(yī)學(xué)院學(xué)報;1982年03期

3 邰友娟,姜艷香,許小平,侯中林;鄰苯二甲酸二辛酯對大鼠睪丸形態(tài)學(xué)研究[J];衛(wèi)生毒理學(xué)雜志;1993年S1期

4 鐘先玖,周元陵,范衛(wèi);乙二醇對大鼠睪丸和附睪中某些酶的影響[J];衛(wèi)生毒理學(xué)雜志;1993年S1期

5 陳國元,魯翠榮,熊世洲,莫傳偉,譚明家,劉固國;氟硒對大鼠睪丸聯(lián)合作用影響的初探[J];職業(yè)衛(wèi)生與病傷;1998年01期

6 朱善良,陳龍,高偉,周娟,蔣英子;鎘致大鼠睪丸脂質(zhì)過氧化及酶活性變化研究[J];中國公共衛(wèi)生;2003年06期

7 邵迎紅,母義明,李明,李江源;衰老對雄性大鼠睪丸類固醇合成功能的影響[J];第二軍醫(yī)大學(xué)學(xué)報;2004年05期

8 黃簡抒,鐘先玖,吳鑫,金泰^

本文編號：484754