發(fā)布時(shí)間：2017-06-21 01:10

  本文關(guān)鍵詞：氯化鑭通過NF-κB通路調(diào)控RANKL誘導(dǎo)破骨細(xì)胞分化成熟的體外實(shí)驗(yàn)研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：目的：通過體外實(shí)驗(yàn)觀察一定濃度氯化鑭對(duì)RANKL誘導(dǎo)的破骨細(xì)胞分化成熟的影響及對(duì)破骨細(xì)胞分化成熟主要相關(guān)信號(hào)通路因子在蛋白及磷酸化水平表達(dá)的作用，為進(jìn)一步研究鑭元素對(duì)于破骨細(xì)胞分化成熟的影響以及未來對(duì)鑭元素更多的基礎(chǔ)研究提供理論參考。 方法：體外提取小鼠骨髓來源的巨噬細(xì)胞（Bone Marrow-derived Macrophage,BMM），并使用核因子κB受體活化配體（Receptor Activitor of NuclearFactor-kappaB Ligand，RANKL）及巨噬細(xì)胞集落刺激因子（Macrophage-ColonyStimulating Factor，M-CSF）體外誘導(dǎo)培養(yǎng)其分化為成熟的破骨細(xì)胞。使用CCK-8檢測加入不同濃度氯化鑭對(duì)細(xì)胞活性的影響并選取合適的實(shí)驗(yàn)濃度進(jìn)行后續(xù)相關(guān)實(shí)驗(yàn)。按研究目的并結(jié)合CCK-8結(jié)果將細(xì)胞隨機(jī)分為五組：空白對(duì)照組（A組）、陽性對(duì)照組（B組）、50μmol/L低濃度氯化鑭組（C組）、100μmol/L中濃度氯化鑭組（D組）、200μmol/L高濃度氯化鑭組（E組）。采用TRAP （TartrateResistant Acid Phosphatase）染色檢測各組成熟破骨細(xì)胞的數(shù)量及細(xì)胞TRAP陽性染色面積。Western Blot檢測氯化鑭的加入對(duì)破骨細(xì)胞分化成熟重要通路NF-κB信號(hào)通路相關(guān)因子（p65及IκBα等）在蛋白及磷酸化水平及對(duì)破骨細(xì)胞重要轉(zhuǎn)錄因子活化T細(xì)胞核因子1蛋白（NFATc1）表達(dá)的影響。 結(jié)果：CCK-8檢測在24、48、72、96小時(shí)時(shí)間點(diǎn)，800μM及以下濃度的氯化鑭對(duì)BMM細(xì)胞的生存未見明顯影響，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05），但當(dāng)濃度超過800μM時(shí)，可見相對(duì)明顯的細(xì)胞毒作用和生長抑制作用（P＜0.05）。 TRAP染色發(fā)現(xiàn)，空白對(duì)照組未見破骨細(xì)胞生成，而B、C、D、E組均有成熟破骨細(xì)胞生成，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。C、D、E組在加入不同濃度氯化鑭后相較B組只加RANKL誘導(dǎo)的破骨細(xì)胞分化成熟均受到不同程度的抑制，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），且加入不同濃度氯化鑭的C、D、E組各組間差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。 WesternBlot檢測結(jié)果發(fā)現(xiàn)，氯化鑭可抑制NF-κB通路的激活,并在長期過程中減少破骨細(xì)胞重要轉(zhuǎn)錄因子蛋白NFATc1的表達(dá)。 結(jié)論：本實(shí)驗(yàn)中適當(dāng)濃度范圍的氯化鑭對(duì)細(xì)胞未見明顯細(xì)胞毒作用；氯化鑭可在一定程度上抑制RANKL誘導(dǎo)的破骨細(xì)胞的分化成熟，減少活化T細(xì)胞核因子1蛋白（NFATc1）的表達(dá)，且作用在一定范圍內(nèi)與劑量成一定的量效關(guān)系。其機(jī)制可能與氯化鑭能夠抑制破骨細(xì)胞NF-κB通路相關(guān)因子的激活作用有關(guān)。
【關(guān)鍵詞】：氯化鑭 破骨細(xì)胞 NF-κB BMM RANKL
【學(xué)位授予單位】：南昌大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2014
【分類號(hào)】：R114
【目錄】：

• 摘要3-5
• ABSTRACT5-10
• 第1章 引言10-13
• 第2章 材料與方法13-21
• 2.1 實(shí)驗(yàn)材料13-15
• 2.1.1 實(shí)驗(yàn)細(xì)胞來源13
• 2.1.2 主要實(shí)驗(yàn)試劑及配制13-14
• 2.1.3 主要實(shí)驗(yàn)儀器及設(shè)備14-15
• 2.2 實(shí)驗(yàn)方法15-20
• 2.2.1 實(shí)驗(yàn)用品的滅菌15
• 2.2.2 骨髓誘導(dǎo)培養(yǎng)法培養(yǎng)破骨細(xì)胞15-16
• 2.2.3 實(shí)驗(yàn)分組及處理16
• 2.2.4 CCK-8 細(xì)胞毒性檢測16-17
• 2.2.5 TRAP 染色17
• 2.2.6 Western Blot 檢測 NF-κB 通路激活早期指標(biāo) p65、IκB 及相對(duì)應(yīng)磷酸化指標(biāo)的表達(dá)17-20
• 2.2.7 Western Blot 檢測破骨細(xì)胞分化成熟重要轉(zhuǎn)錄因子蛋白 NFATc1 的表達(dá)20
• 2.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析20-21
• 第3章 結(jié)果21-28
• 3.1 CCK-8 細(xì)胞毒性檢測結(jié)果21-23
• 3.2 TRAP 染色破骨細(xì)胞計(jì)數(shù)及染色面積百分比23-24
• 3.3 氯化鑭對(duì)破骨細(xì)胞 NF-κB 信號(hào)通路相關(guān)指標(biāo) p65、IκB 在蛋白及相磷酸化的影響24-27
• 3.4 氯化鑭對(duì)破骨細(xì)胞分化成熟重要轉(zhuǎn)錄因子蛋白 NFATc1 表達(dá)的影響27-28
• 第4章 討論28-35
• 4.1 破骨細(xì)胞與人工關(guān)節(jié)假體松動(dòng)和骨代謝異常相關(guān)疾病的關(guān)系28-29
• 4.2 破骨細(xì)胞分化成熟相關(guān)信號(hào)通路29-31
• 4.3 鑭系元素概述其對(duì)破骨細(xì)胞活性的影響31-32
• 4.4 氯化鑭對(duì)破骨細(xì)胞分化成熟的影響32
• 4.5 使用 BMM 細(xì)胞誘導(dǎo)破骨細(xì)胞的分化成熟32-33
• 4.6 缺點(diǎn)與不足33
• 4.7 總結(jié)與展望33-35
• 第5章 結(jié)論35-36
• 致謝36-37
• 參考文獻(xiàn)37-40
• 附圖40-42
• 攻讀學(xué)位期間的研究成果42-43
• 綜述43-53
• 參考文獻(xiàn)50-53

【參考文獻(xiàn)】

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  本文關(guān)鍵詞：氯化鑭通過NF-κB通路調(diào)控RANKL誘導(dǎo)破骨細(xì)胞分化成熟的體外實(shí)驗(yàn)研究，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

本文編號(hào)：467319