本文關(guān)鍵詞：苦蕎蛋白對腸道菌群調(diào)節(jié)作用的研究，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：本文以苦蕎為研究材料,并以硫酸銨鹽沉淀法制備的苦蕎蛋白為研究對象。通過體外純培養(yǎng)測定濁度探究其對乳酸桿菌(植物乳桿菌、嗜酸乳桿菌)生長和對其膽酸鹽耐受能力的影響。再通過體外模擬胃腸道消化與結(jié)腸發(fā)酵過程,采用菌落計數(shù)、熒光定量PCR、PCR-TGGE與氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用分析相結(jié)合的方法,探究其對腸道中主要菌群(雙歧桿菌、乳酸桿菌、腸球菌、腸桿菌、產(chǎn)氣莢膜梭菌、柔嫩梭菌、擬桿菌)數(shù)量、結(jié)構(gòu)、pH及代謝產(chǎn)物短鏈脂肪酸(乙酸、丙酸、丁酸及乳酸)的影響。結(jié)果如下：(1)在純培養(yǎng)條件下發(fā)酵至32 h時,不同濃度的苦蕎蛋白(1、3和5 mg/mL)使植物乳桿菌和嗜酸乳桿菌培養(yǎng)液的濁度(OD600)分別顯著(p0.05)提高12%、26%、35%和15%、27%、31%；同時,苦蕎蛋白使植物乳桿菌和嗜酸乳桿菌在膽酸鹽(膽酸鈉、甘氨膽酸鈉)環(huán)境下培養(yǎng)液的濁度分別顯著增加了1.6、8.7和4.1、8.3倍,表明苦蕎蛋白能促進乳酸桿菌生長且可提高對膽酸鹽的耐受作用。(2)在體外模擬結(jié)腸環(huán)境發(fā)酵至32 h時,菌落計數(shù)表明高劑量的苦蕎蛋白組(HD)使雙歧桿菌、乳酸桿菌的數(shù)量較空白對照組(CK)分別顯著(p0.05)增加了5.9、4.3倍,而使腸球菌、腸桿菌、產(chǎn)氣莢膜梭菌的數(shù)量較空白對照組分別顯著(p0.05)降低了65%、72%、78%。熒光定量PCR的結(jié)果也基本一致,還發(fā)現(xiàn)HD可使柔嫩梭菌含量從107.10增加到108.15 copies/mL,使擬桿菌含量顯著(p0.05)減少了77%。(3)苦蕎蛋白可降低腸道pH和顯著性地促進短鏈脂肪酸的產(chǎn)生(p0.05),且HD分別使乙酸、丙酸、丁酸、乳酸顯著(p0.05)增加了8.9、33.8、27.3、25.6倍。(4)苦蕎蛋白能夠增加腸道菌群多樣性而且隨著苦蕎蛋白濃度的增加,其多樣性也隨之增加,另外,其促進作用顯著性高于酪蛋白對照組(p0.05)。苦蕎蛋白能夠促進乳酸菌等益生菌群的增殖抑制腸球菌等有害菌群的生長,這種抑制作用可能與苦蕎蛋白可以提高腸道中短鏈脂肪酸含量,能夠降低腸道環(huán)境的pH值有關(guān)。因此,苦蕎蛋白可能是一種具有類似于益生元作用的功能因子。
【關(guān)鍵詞】：苦蕎蛋白 膽酸鹽 腸道菌群 短鏈脂肪酸 熒光定量PCR
【學(xué)位授予單位】：上海應(yīng)用技術(shù)大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號】：R151;TQ920.1
【目錄】：

• 摘要5-6
• ABSTRACT6-11
• 第1章 緒論11-19
• 1.1 苦蕎概述11
• 1.2 苦蕎蛋白的研究現(xiàn)狀11-13
• 1.2.1 苦蕎蛋白的組成11
• 1.2.2 苦蕎蛋白的營養(yǎng)價值11-12
• 1.2.3 苦蕎蛋白的生理活性功能12-13
• 1.3 腸道微生物的研究現(xiàn)狀13-17
• 1.3.1 腸道菌群的組成及特點13-14
• 1.3.2 腸道菌群的主要代謝產(chǎn)物14
• 1.3.3 腸道菌群的主要功能14
• 1.3.4 腸道菌群多樣性的分析技術(shù)14-17
• 1.4 本課題研究目的及意義17-19
• 1.4.1 研究目的17-18
• 1.4.2 研究意義18-19
• 第2章 苦蕎蛋白對乳酸桿菌生長的影響19-27
• 2.1 實驗材料試劑及儀器19
• 2.1.1 實驗材料19
• 2.1.2 實驗試劑19
• 2.1.3 實驗儀器19
• 2.2 方法19-20
• 2.2.1 苦蕎蛋白的制備19-20
• 2.2.2 苦蕎蛋白對乳酸桿菌生長的影響20
• 2.2.3 苦蕎蛋白對乳酸桿菌在膽酸鹽環(huán)境中生長的影響20
• 2.2.4 數(shù)據(jù)分析20
• 2.3 分析與討論20-26
• 2.3.1 苦蕎蛋白對乳酸桿菌生長的影響20-23
• 2.3.2 乳酸桿菌膽酸鹽耐受性分析23-24
• 2.3.3 苦蕎蛋白對乳酸桿菌耐受膽酸鹽的影響24-26
• 2.4 小結(jié)26-27
• 第3章 苦蕎蛋白體外發(fā)酵對腸道菌群的影響27-46
• 3.1 實驗材料試劑及儀器27-28
• 3.1.1 實驗材料27
• 3.1.2 實驗試劑27-28
• 3.1.3 實驗儀器28
• 3.2 方法28-33
• 3.2.1 實驗動物喂養(yǎng)28
• 3.2.2 苦蕎蛋白體外消化實驗28-29
• 3.2.3 體外模型模擬人體發(fā)酵過程29
• 3.2.4 細菌基因組DNA的提取29
• 3.2.5 傳統(tǒng)培養(yǎng)計數(shù)的測定29-30
• 3.2.6 熒光定量PCR的測定30-31
• 3.2.7 發(fā)酵液pH的測定31
• 3.2.8 短鏈脂肪酸含量的測定31-33
• 3.2.9 數(shù)據(jù)分析33
• 3.3 分析與討論33-45
• 3.3.1 傳統(tǒng)培養(yǎng)計數(shù)法測定苦蕎蛋白對腸道菌群的影響33-38
• 3.3.2 定量PCR法測定苦蕎蛋白對腸道菌群的影響38-42
• 3.3.3 苦蕎蛋白體外發(fā)酵對pH變化的影響42
• 3.3.4 苦蕎蛋白體外發(fā)酵對短鏈脂肪酸變化的影響42-45
• 3.4 本章小結(jié)45-46
• 第4章 PCR-TGGE法測定苦蕎蛋白對腸道菌群結(jié)構(gòu)的影響46-53
• 4.1 實驗材料試劑及儀器46-47
• 4.1.1 實驗試劑46-47
• 4.1.2 實驗儀器47
• 4.2 方法47-49
• 4.2.1 細菌基因組DNA的提取47
• 4.2.2 PCR擴增47-48
• 4.2.3 PCR產(chǎn)物的純化48
• 4.2.4 溫度梯度凝膠電泳(TGGE)48
• 4.2.5 TGGE指紋圖譜分析48-49
• 4.2.6 數(shù)據(jù)分析49
• 4.3 分析與討論49-52
• 4.3.1 PCR擴增產(chǎn)物的分析49
• 4.3.2 TGGE最佳溫度梯度的確定49-50
• 4.3.3 TGGE圖譜分析50-52
• 4.4 本章小結(jié)52-53
• 第5章 結(jié)論與展望53-54
• 5.1 主要結(jié)論53
• 5.2 研究展望53-54
• 參考文獻54-60
• 致謝60-61
• 攻讀學(xué)位期間所開展的科研項目和發(fā)表的學(xué)術(shù)論文61

  本文關(guān)鍵詞：苦蕎蛋白對腸道菌群調(diào)節(jié)作用的研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

本文編號：453141