本文關鍵詞：電離輻射對小鼠小腸絨毛上皮細胞和固有層纖維細胞作用的基因表達譜研究，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：研究背景:早前在研究C60(OH)24-SLN-E的對小鼠輻射防護作用研究時,發(fā)現(xiàn)經過6 Gy 60Co?射線照后21天的小鼠小腸固有層細胞中的γ-H2AX foci數量遠多于小腸絨毛上皮細胞,這一現(xiàn)象提示兩種細胞在DNA修復能力上存在差異。目的:探索小腸絨毛上皮細胞和固有層細胞在DNA損傷修復能力產生差異的分子機制,尋找治療腸型放射病的關鍵靶分子。方法:(1)小鼠小腸絨毛上皮細胞和固有層纖維細胞在體外進行原代培養(yǎng)和傳代。再將每種細胞各分為兩組,實驗組細胞經過6Gy X線照射并修復6小時;對照組不照射。(2)細胞照射后6小時,用western blot檢測分析γ-H2AX的蛋白表達水平。(3)細胞照射后6小時,提取每個樣品的總RNA,合成標記探針c DNA并與基因芯片進行雜交,通過芯片掃描獲得基因表達數據并進行差異基因篩選,進一步對差異基因進行GO分析和PATHWAY分析。結果:(1)成功培養(yǎng)并獲得原代小腸絨毛上皮細胞和固有層纖維細胞。(2)X射線照射并修復6小時后,小鼠小腸絨毛上皮細胞和固有層纖維細胞的γ-H2AX蛋白表達量都上升,但兩者之間沒有顯著的差別。(3)在參與DSB非同源末端連接和同源重組修復的基因表達中,兩種細胞有9個基因存在表達差異,包括POLM、XRCC5、FEN1、XRCC2、POLD3、POLD2、EME1、RAD54B和BRCA2基因,且在小腸絨毛上皮細胞的表達都顯著高于固有層纖維細胞。照射后6小時,固有層纖維細胞中RAD54B表達明顯下調;除上述9個基因存在差異表達外,RAD51和RPA2也有差異表達,同樣在小腸絨毛上皮細胞的表達都顯著高于固有層纖維細胞。除此之外,受照后的兩種細胞中,參與細胞凋亡和細胞周期調控的部分基因也有表達差異。結論:本課題成功獲得了原代培養(yǎng)的小鼠小腸絨毛上皮細胞和固有層纖維細胞并用于基因表達差異的研究。研究發(fā)現(xiàn),由于參與DNA非同源末端連接和同源重組修復相關蛋白明顯高表達,受照小鼠小腸絨毛上皮細胞DNA雙鏈斷裂修復能力明顯強于固有層纖維細胞,其中RAD54B基因的下調表達可能在受照小腸固有層纖維細胞DNA雙鏈斷裂修復延遲方面發(fā)揮重要作用。
【關鍵詞】：小腸絨毛上皮細胞 小腸固有層纖維細胞 原代培養(yǎng) DNA損傷修復 基因芯片
【學位授予單位】：蘇州大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2015
【分類號】：R818
【目錄】：

• 中文摘要4-6
• Abstract6-11
• 引言11-14
• 第一部分 小鼠小腸絨毛上皮細胞和固有層纖維細胞的原代培養(yǎng)14-20
• 一、實驗材料14-15
• 1.實驗對象14
• 2.主要試劑14-15
• 3.主要儀器和設備15
• 二、實驗方法15-16
• 1.原代培養(yǎng)皿的準備15
• 2.上皮細胞的前處理15
• 3.組織塊培養(yǎng)法15-16
• 4.酶消化分離法16
• 5.原代細胞傳代16
• 6.原代細胞復蘇16
• 三、實驗結果16-18
• 四、討論18-19
• 五、小結19-20
• 第二部分 小鼠小腸絨毛上皮細胞和固有層纖維細胞的 Γ-H2AX蛋白分析20-26
• 一、實驗材料20-21
• 1.實驗對象20
• 2.主要試劑20-21
• 3.主要儀器和設備21
• 二、實驗方法21-23
• 1.原代細胞的處理21
• 2.蛋白樣制備21-22
• 3. BCA法測蛋白濃度22
• 4.蛋白變性22
• 5.制 15%的SDS-PAGE膠22
• 6.加樣和垂直電泳22
• 7.轉膜22-23
• 8.封閉與抗體孵育23
• 9.上機23
• 三、實驗結果23
• 四、討論23-25
• 五、小結25-26
• 第三部分 小鼠小腸絨毛上皮細胞和固有層纖維細胞基因表達譜的研究26-54
• 一、實驗材料26-28
• 1.實驗對象26
• 2.主要試劑26-27
• 3.主要儀器和設備27-28
• 二、實驗方法28-31
• 1.提取TOTAL RNA28
• 2.總RNA的純化28-29
• 3.CDNA第一鏈和第二鏈一步法合成29
• 4.熒光標記CRNA合成29
• 5.CRNA純化29-30
• 6.CRNA濃度測定30
• 7.熒光分子濃度及摻入率計算30
• 8.CRNA樣品片段化和芯片雜交30-31
• 9.芯片洗滌31
• 10.芯片掃描31
• 三、實驗結果31-47
• 1.RNA樣品質檢基本信息31-33
• 2.基因芯片檢測結果33-47
• 四、討論47-52
• 五、小結52-54
• 全文總結54-55
• 參考文獻55-59
• 綜述59-69
• 參考文獻66-69
• 中英文縮略詞對照表69-70
• 致謝70-72

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  本文關鍵詞：電離輻射對小鼠小腸絨毛上皮細胞和固有層纖維細胞作用的基因表達譜研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

本文編號：449076