目的:本研究建立雌性大鼠妊娠期及哺乳期暴露鄰苯二甲酸二(2-乙基)己酯(di-2-ethylhexylphthalate,DEHP)模型,探討暴露DEHP是否誘導(dǎo)仔鼠腎臟發(fā)生上皮細(xì)胞-間充質(zhì)轉(zhuǎn)化(epithelial-mesenchymaltransition,EMT);采用大鼠腎小管近端上皮細(xì)胞系NRK52E來研究DEHP暴露對(duì)腎臟發(fā)生EMT的影響,以及Wnt/β-catenin信號(hào)通路在其中的調(diào)控作用。實(shí)驗(yàn)方法:采用8-10周齡、體重為230-250g的健康Wistar大鼠,適應(yīng)性喂養(yǎng)后根據(jù)體重隨機(jī)分組,分別為對(duì)照組、低劑量DEHP暴露組(30mg/kg/d)、中劑量DEHP暴露組(300 m g/kg/d)以及高劑量DEHP暴露組(750mg/kg/d),每個(gè)劑量組中有孕鼠14-16只。在仔鼠PN21時(shí)斷乳,分籠飼養(yǎng),各組均停止灌胃。選取PN28天仔鼠腎臟組織,Masson(Masson’striclhrome stain)染色以觀察腎臟病理學(xué)變化;Western-Blot檢測(cè)腎臟EMT進(jìn)程。體外實(shí)驗(yàn)采用腎小管近端上皮細(xì)胞系NRK52E為研究對(duì)象,建立DEHP暴露模型。CCK-8...

【文章頁數(shù)】：56 頁

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
英文縮略語
1 前言
2 材料和方法
    2.1 主要試劑和儀器
        2.1.1 主要試劑
        2.1.2 主要儀器
    2.2 研究對(duì)象和分組
        2.2.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物
        2.2.2 動(dòng)物分組與DEHP暴露模型的建立
    2.3 Masson染色
    2.4 動(dòng)物腎臟總蛋白提取和定量,Western-Blot檢測(cè)
        2.4.1 蛋白提取和定量
        2.4.2 Western-Blot檢測(cè)
    2.5 細(xì)胞培養(yǎng)
        2.5.1 細(xì)胞復(fù)蘇
        2.5.2 細(xì)胞傳代
        2.5.3 細(xì)胞凍存
        2.5.4 細(xì)胞活力測(cè)定
        2.5.5 細(xì)胞分組和處理
    2.6 細(xì)胞總蛋白的提取、定量和檢測(cè)
    2.7 細(xì)胞免疫熒光
    2.8 統(tǒng)計(jì)分析
3 結(jié)果
    3.1 孕哺期母體DEHP暴露所致仔鼠腎臟形態(tài)學(xué)改變
    3.2 孕哺期母體DEHP暴露誘導(dǎo)仔鼠腎臟發(fā)生EMT
    3.3 DEHP暴露對(duì)NRK52E細(xì)胞活力的影響
    3.4 DEHP暴露誘導(dǎo)NEK52E發(fā)生EMT
    3.5 DEHP暴露激活Wnt/β-catenin通路信號(hào)
    3.6 Wnt/β-catenin Agonist1通過激活Wnt/β-cate nin通路促進(jìn)DEHP暴露后EMT的發(fā)生
    3.7 IWR-1通過下調(diào)Wnt/β-catenin信號(hào)通路抑制DEHP暴露后EMT的發(fā)生
4 討論
5 結(jié)論
本研究創(chuàng)新性的自我評(píng)價(jià)
參考文獻(xiàn)
綜述 環(huán)境內(nèi)分泌干擾物暴露對(duì)腎臟的影響研究進(jìn)展
    參考文獻(xiàn)
實(shí)踐報(bào)告
攻讀學(xué)位期間取得的研究成果
致謝
個(gè)人簡歷



本文編號(hào)：3845501