發(fā)布時間：2017-05-01 19:13

  本文關(guān)鍵詞：甲硝唑獸藥殘留酶聯(lián)免疫分析方法，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：論文針對動物源性食品中甲硝唑及其結(jié)構(gòu)類似物的非法添加,研究并建立了系統(tǒng)的酶聯(lián)免疫檢測方法。 對于甲硝唑,從其結(jié)構(gòu)類似物1-(2-氨乙基)-甲基-5-硝基咪唑二鹽酸鹽出發(fā)合成半抗原,通過戊二醛一步法使其咪唑環(huán)上的氨基直接與載體蛋白連接。從其本身出發(fā)合成半抗原采用了琥珀酸酐及氯乙酸乙酯法及Linker法。對于Linker法,選擇牛甲狀腺素蛋白作為載體蛋白并使其先與2,2-(乙烯二氧)雙(乙胺)連接,接著使用甲硝唑與N-N二琥珀酰亞胺基碳酸酯連接,最后兩者繼續(xù)進(jìn)行連接形成一個超長鏈完全抗原。對于琥珀酸酐及氯乙酸乙酯修飾半抗原法,采用琥珀酸酐連接法使甲硝唑與載體蛋白之間連接上一個7原子長度的鏈等。以上種種方法共制備出10種完全抗原。 按照不同的免疫方案免疫新西蘭大耳白兔,最后由戊二醛法制備的完全抗原得到高特異性和高靈敏度的多克隆抗體。利用混合酸酐法將由甲硝唑制備出的半抗原MSA與辣根過氧化物酶偶聯(lián)制備酶標(biāo)。通過優(yōu)化包被抗體量、酶標(biāo)稀釋倍數(shù)、封閉液、緩沖液pH、發(fā)光底物溶液和發(fā)光酶標(biāo)板,建立了直接競爭酶聯(lián)免疫法與化學(xué)發(fā)光直接競爭酶聯(lián)免疫法CLEIA。直接競爭酶聯(lián)免疫法對甲硝唑的靈敏度(IC50)為0.30±0.04μg/mL,檢出限(IC15)為0.036±0.003μg/mL。建立的CLEIA方法對甲硝唑靈敏度(IC50)為0.022±0.004μg/mL,檢出限(IC15)為0.004±0.0003μg/mL。 在直接競爭酶聯(lián)免疫法中對于二甲硝基咪唑、替硝唑、奧硝唑的交叉反應(yīng)率為194%、76%、115%,說明本文建立的方法除了可以檢測甲硝唑獸藥殘留外,可以同時檢測其他三種硝基咪唑類藥物多殘留。選擇雞肉、蝦樣品進(jìn)行添加回收實(shí)驗(yàn),樣品被分別添加了濃度為1.2μg/g、6μg/g、20μg/g的甲硝唑,經(jīng)過基質(zhì)影響的消除后應(yīng)用所建立的直接競爭酶聯(lián)免疫法檢測,回收率在58.54%到111.64%之間。 本研究建立的兩種檢測方法靈敏度高,特異性好,適合多種禽類及水產(chǎn)品中甲硝唑及硝基咪唑類藥物多殘留的快速檢測。
【關(guān)鍵詞】：甲硝唑 硝基咪唑類 酶聯(lián)免疫 直接競爭 化學(xué)發(fā)光
【學(xué)位授予單位】：天津科技大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2014
【分類號】：S859.84;R155.5
【目錄】：

• 摘要4-5
• ABSTRACT5-8
• 1 前言8-18
• 1.1 硝基咪唑類藥物簡介8-11
• 1.1.1 硝基咪唑類藥物的抗菌特性及作用機(jī)制9
• 1.1.2 硝基咪唑類藥物對動物及人類的影響9-10
• 1.1.3 硝基咪唑藥的藥代動力學(xué)10
• 1.1.4 硝基咪唑類藥物對食品的污染及殘留限量10-11
• 1.2 酶聯(lián)免疫分析法概述11-15
• 1.2.1 基本原理11
• 1.2.2 半抗原的合成與完全抗原的制備11-12
• 1.2.3 抗體的制備12-13
• 1.2.4 酶聯(lián)免疫吸附測定法的類型13-15
• 1.3 甲硝唑的常用分析方法簡介15-16
• 1.3.1 甲硝唑的儀器分析法簡介及其研究現(xiàn)狀15
• 1.3.2 甲硝唑的酶聯(lián)免疫方法簡介及其研究現(xiàn)狀15-16
• 1.3.3 甲硝唑?qū)嶋H樣品分析的基質(zhì)影響及其消除方法16
• 1.4 論文研究的目的及意義16-17
• 1.5 研究內(nèi)容17-18
• 2 材料與方法18-31
• 2.1 實(shí)驗(yàn)材料18-21
• 2.1.1 實(shí)驗(yàn)藥品與試劑18-19
• 2.1.2 儀器及設(shè)備19-20
• 2.1.3 基質(zhì)樣品20
• 2.1.4 常用溶液的配制20-21
• 2.2 實(shí)驗(yàn)方法21-31
• 2.2.1 甲硝唑半抗原的制備21-22
• 2.2.2 甲硝唑免疫原的制備22-24
• 2.2.3 甲硝唑包被原的制備24
• 2.2.4 酶標(biāo)抗原的制備24-25
• 2.2.5 甲硝唑多克隆抗體的制備25-27
• 2.2.6 甲硝唑直接競爭酶聯(lián)免疫檢測方法的建立27-28
• 2.2.7 化學(xué)發(fā)光直接競爭酶聯(lián)免疫檢測方法(CLEIA)的建立28-29
• 2.2.8 甲硝唑抗體特異性的測定29-30
• 2.2.9 樣品前處理30
• 2.2.10 樣品的添加回收實(shí)驗(yàn)30-31
• 3 結(jié)果與討論31-48
• 3.1 甲硝唑半抗原及完全抗原的設(shè)計(jì)與表征31-36
• 3.1.1 甲硝唑半抗原及完全抗原設(shè)計(jì)思路31
• 3.1.2 合成半抗原的結(jié)構(gòu)表征31-33
• 3.1.3 免疫原鑒定33-36
• 3.2 甲硝唑抗體的制備36-37
• 3.2.1 抗血清親和性的測定36
• 3.2.2 抗體的純化及濃度測定36-37
• 3.3 直接競爭酶聯(lián)免疫檢測法的建立37-39
• 3.3.1 甲硝唑直接競爭酶聯(lián)免疫工作條件的篩選37-38
• 3.3.2 直接競爭酶聯(lián)免疫方法標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制38-39
• 3.4 化學(xué)發(fā)光直接競爭酶聯(lián)免疫法檢測法(CLEIA)的建立39-42
• 3.4.1 甲硝唑化學(xué)發(fā)光直接競爭酶聯(lián)免疫法工作條件的篩選39-41
• 3.4.2 化學(xué)發(fā)光直接競爭酶聯(lián)免疫法標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制41-42
• 3.5 甲硝唑直接競爭ELISA及CLEIA檢測方法性能指標(biāo)的評價42-44
• 3.5.1 檢測限42
• 3.5.2 精密度42-44
• 3.6 甲硝唑抗體的特異性的測定44-45
• 3.7 樣品基質(zhì)影響的消除45-47
• 3.7.1 雞肉的基質(zhì)消除45-46
• 3.7.2 蝦的基質(zhì)消除46-47
• 3.8 樣品添加回收實(shí)驗(yàn)47-48
• 4 結(jié)論48-49
• 5 展望49-50
• 6 參考文獻(xiàn)50-56
• 7 攻讀碩士學(xué)位期間發(fā)表論文情況56-57
• 8 致謝57

【參考文獻(xiàn)】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前9條

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  本文關(guān)鍵詞：甲硝唑獸藥殘留酶聯(lián)免疫分析方法，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

本文編號：339501