本文關(guān)鍵詞：氯乙烯亞慢性染毒對(duì)大鼠肝組織和外周血周期相關(guān)microRNAs表達(dá)的影響，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：目的:檢測(cè)氯乙烯染毒大鼠肝組織中周期相關(guān)miRNAs(mir-122、mir-125b、mir-192、mir-195、mir-21)表達(dá)的改變,探討其在肝細(xì)胞周期改變中的作用;同時(shí)檢測(cè)血清中相應(yīng)miRNAs的表達(dá),為氯乙烯暴露早期標(biāo)志物的研究提供依據(jù)。方法:1.動(dòng)物處理:按體重將96只SPF級(jí)雄性SD大鼠隨機(jī)分為三個(gè)染毒組(5mg/kg組、25mg/kg組和125mg/kg組)和對(duì)照組,每組24只。采用腹腔注射相應(yīng)體積的氯乙烯氣體進(jìn)行染毒,對(duì)照組注射25mg/kg清潔空氣,每周3次。分別于染毒第6周、8周、12周末,每組隨機(jī)選取8只大鼠收集肝組織和血液。2.肝細(xì)胞周期檢測(cè):新鮮肝組織約100mg制備細(xì)胞懸液,用預(yù)冷的70%乙醇4℃過(guò)夜固定細(xì)胞,然后用400μlPI染液暗處染色30min(期間搖晃數(shù)次),最后使用流式細(xì)胞儀進(jìn)行檢測(cè)。3.實(shí)時(shí)熒光定量PCR:將提取合格的RNA(肝組織提取200nt的小片段RNA,血清中提取總RNA)反轉(zhuǎn)錄合成cDNA,實(shí)時(shí)熒光定量(SYBR染料法)檢測(cè)不同染毒時(shí)間各miRNAs的表達(dá)量。獲得每個(gè)樣本的擴(kuò)增產(chǎn)物Ct值,結(jié)果采用2-△△Ct法計(jì)算各miRNAs相對(duì)于對(duì)照組的表達(dá)量。4.統(tǒng)計(jì)方法:所有數(shù)據(jù)均使用spss19.0進(jìn)行整理和分析。對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行方差齊性檢驗(yàn);若方差齊,進(jìn)行單因素方差分析,若方差不齊,進(jìn)行秩和檢驗(yàn)(Kruskal-Wallis H檢驗(yàn));檢驗(yàn)水準(zhǔn)為0.05。定量數(shù)據(jù)如服從正態(tài)分布,則以±s表示;不服從正態(tài)分布,則以中位數(shù)和四分位數(shù)間距表示。結(jié)果:1.大鼠狀況:染毒期間,動(dòng)物狀況良好,沒(méi)有出現(xiàn)明顯中毒癥狀。2.肝細(xì)胞周期檢測(cè):第6周,125mg/kg組g0/g1期細(xì)胞百分比(75.61±9.10%)與對(duì)照組(66.83±9.30%)相比增加,且差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p0.05);第8周,三個(gè)劑量組g0/g1期、s期和g2/m期細(xì)胞百分比與對(duì)照組相比均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(p0.05);第12周,125mg/kg組s期細(xì)胞百分比(10.03±3.58%)與對(duì)照組(5.79±2.55%)相比增加,且差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p0.05)。3.肝組織中mirnas的表達(dá):5種mirnas的相對(duì)表達(dá)量均呈現(xiàn)出明顯的劑量效應(yīng)和時(shí)間效應(yīng)。隨著染毒劑量的增加:第6周,各mirnas的相對(duì)表達(dá)量顯著上調(diào)(p0.05);第8周,mir-125b、mir-21的相對(duì)表達(dá)量顯著下調(diào)(p0.05);第12周,各mirnas的相對(duì)表達(dá)量顯著下調(diào)(p0.05)。隨著時(shí)間的延長(zhǎng):對(duì)照組和5mg/kg組,各mirnas的相對(duì)表達(dá)量差異無(wú)顯著性(p0.05);25mg/kg組和125mg/kg組,各mirnas的相對(duì)表達(dá)量顯著下調(diào)(p0.05),且125mg/kg組下調(diào)更明顯,但25mg/kg組mir-195的相對(duì)表達(dá)量各時(shí)間點(diǎn)差異無(wú)顯著性(p0.05)。從染毒第8周開始,各mirnas在25mg/kg組和125mg/kg組的相對(duì)表達(dá)量均低于對(duì)照組(5mg/kg組與對(duì)照組相比表達(dá)略增高,但差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義),且隨著劑量的增加和時(shí)間的延長(zhǎng)下調(diào)更加明顯。4.血清中mirnas的表達(dá):mir-122、mir-125b、mir-21的相對(duì)表達(dá)量均不顯示顯著的劑量效應(yīng)和時(shí)間效應(yīng)。mir-192相對(duì)表達(dá)量有顯著的時(shí)間效應(yīng)(p0.05),表現(xiàn)為先增加后降低,但兩兩比較無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異;mir-195相對(duì)表達(dá)量有顯著的時(shí)間效應(yīng)(p0.05),表現(xiàn)為先降低后增加,但兩兩比較無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。5.肝組織和血清中mirnas相關(guān)性分析:進(jìn)行肝組織和血清中表達(dá)的相關(guān)性分析,5種mirnas均未發(fā)現(xiàn)有顯著相關(guān)性(p0.05)。結(jié)論:1.氯乙烯破壞肝細(xì)胞g1/s關(guān)卡,使肝細(xì)胞短時(shí)間停滯于g1期,隨著時(shí)間的延長(zhǎng),細(xì)胞進(jìn)入s期的比例增加。2.氯乙烯染毒6周,大鼠肝組織mirnas(mir-122、mir-125b、mir-192、mir-195、mir-21)表達(dá)上調(diào),從第8周開始下調(diào),并且到第12周時(shí)下調(diào)更加顯著。3.肝組織mirnas(mir-122、mir-125b、mir-192、mir-195、mir-21)表達(dá)量的變化可能與肝細(xì)胞周期g1/s關(guān)卡調(diào)控有關(guān)。4.低豐度的mi RNAs可能在氯乙烯致肝損傷中發(fā)揮重要作用。5.在肝組織與血清中,miRNAs(mir-122、mir-125b、mir-192、mir-195和mir-21)表達(dá)量的變化不同。6.血清mir-192和mir-195可否作為氯乙烯早期暴露的標(biāo)志物,還需要進(jìn)一步研究證實(shí)。
【關(guān)鍵詞】：氯乙烯 細(xì)胞周期 肝細(xì)胞 血清 microRNAs
【學(xué)位授予單位】：山西醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號(hào)】：R114
【目錄】：

• 中文摘要6-9
• 英文摘要9-12
• 前言12-14
• 第一部分 氯乙烯染毒大鼠肝細(xì)胞周期的檢測(cè)14-23
• 1 材料與方法14-16
• 1.1 主要儀器與試劑14
• 1.2 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物14-15
• 1.3.肝細(xì)胞周期檢測(cè)15
• 1.4.統(tǒng)計(jì)分析15-16
• 2 結(jié)果16-20
• 2.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物一般情況16-17
• 2.2 肝細(xì)胞周期分布17-20
• 3 討論20-22
• 4 小結(jié)22-23
• 第二部分 氯乙烯染毒大鼠肝組織中miRNAs的表達(dá)情況23-37
• 1 材料與方法23-27
• 1.1 主要儀器和試劑23-24
• 1.2 實(shí)驗(yàn)方法24-26
• 1.3.統(tǒng)計(jì)分析26-27
• 2 結(jié)果27-33
• 2.1 小片段RNA提取質(zhì)量27
• 2.2.肝組織5種miRNAs的擴(kuò)增曲線和熔解曲線27-29
• 2.3.肝組織5種miRNAs的相對(duì)表達(dá)量29-33
• 3 討論33-36
• 4 小結(jié)36-37
• 第三部分 氯乙烯染毒大鼠血清中miRNAs的表達(dá)情況37-47
• 1 材料與方法37-39
• 1.1 主要儀器和試劑37
• 1.2 實(shí)驗(yàn)方法37-38
• 1.3 統(tǒng)計(jì)方法38-39
• 2 結(jié)果39-44
• 2.1 血清總RNA提取質(zhì)量39
• 2.2.血清5種miRNAs的擴(kuò)增曲線和熔解曲線39-41
• 2.3.血清5種miRNAs的相對(duì)表達(dá)量41-44
• 3 討論44-46
• 4 小結(jié)46-47
• 本研究的創(chuàng)新與局限47-48
• 參考文獻(xiàn)48-51
• 綜述51-59
• 參考文獻(xiàn)56-59
• 致謝59-60
• 在學(xué)期間承擔(dān)/參與的科研課題與研究成果60-61
• 個(gè)人簡(jiǎn)歷61

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