本文關(guān)鍵詞：武漢市部分菜場食品中產(chǎn)志賀毒素大腸桿菌的分布和生物學(xué)特征，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：產(chǎn)志賀毒素大腸桿菌(Shiga toxin producing Escherichia coli,STEC)是一種重要的食源性致病菌,可引起暴發(fā)性流行感染事件,近年來該菌引起人的感染致病事件日益增加。本課題主要研究武漢市售食品中STEC的流行狀況,同時對分離株的毒力基因、志賀毒素滴度、生物膜及耐藥性等進(jìn)行鑒定,以確定這些菌株的生物學(xué)特征。從22家菜場和超市采集樣品161份,進(jìn)行PCR檢測,有35份樣品污染有O157型STEC,20份樣品污染非O157型STEC,其中4份樣品污染有O45型STEC,1份樣品污染有O145型STEC,1份污染有O111型STEC。污染了STEC的55份樣品中只檢出stx1基因的有1份(1.8%),只檢出stx2基因的有41份(74.5%),同時檢出stx1和stx2基因的有13份(23.6%)。污染O157型STEC的樣品有27份eae基因檢測結(jié)果呈陽性,污染非O157型STEC的樣品沒有檢測出hly基因。綜合分析發(fā)現(xiàn),O157型STEC在豬肉樣品中的檢出率最高;而非O157型STEC在牛肉樣品中的檢出率最高;同時在禽類樣品中也檢測出O157型STEC,但未檢測出非O157型STEC;魚肉和蔬菜樣品沒有檢測出STEC。對27份eae基因檢測呈陽性的樣品通過免疫磁珠收集、血清學(xué)鑒定、菌落PCR復(fù)篩進(jìn)行分離。共分離出5株O157菌株。對其毒力基因檢測發(fā)現(xiàn),有4株菌攜帶eae、hly、ehx A基因。EC5.11僅攜帶stx2基因,其余3株菌還同時攜帶stx1基因和stx2基因。分離株EC9.102不攜帶上述毒力基因。除EC9.102僅攜帶rfbO157基因外,其余四株菌均攜帶fli CH7和rfbO157基因,說明這四株菌為O157:H7血清型。在Vero細(xì)胞毒性試驗(yàn)中,對5株分離株進(jìn)行Stx毒素檢測,結(jié)果菌株EC9.102濾液對Vero細(xì)胞生長無明顯影響,其余4株O157:H7菌均對Vero細(xì)胞有明顯的毒性。4株菌的毒素滴度有一定差異,其中EC9.101和EC9.12與臨床菌株EC150的毒力相同,菌株的毒素滴度為1×104CD50/m L。采用分型引物對4株O157:H7菌的stx基因亞型進(jìn)行鑒定。結(jié)果發(fā)現(xiàn)除EC5.11外,其余3株菌stx基因亞型為stx1a和stx2a。通過對EC5.11的stx2基因全長測序,并進(jìn)行序列比對發(fā)現(xiàn),其stx2基因?yàn)閟tx2c亞型。q基因鑒定顯示,EC5.11為q21型,其余3株菌為q933型。對4株O157:H7分離株采用K-B紙片擴(kuò)散法進(jìn)行耐藥性檢測,結(jié)果顯示4株菌對頭孢噻肟、慶大霉素、氯霉素、環(huán)丙沙星、頭孢吡肟、新霉素及氨芐青霉素均呈現(xiàn)高敏反應(yīng);四環(huán)素和多粘菌素B對其中3株菌抑制效果很強(qiáng),但對另一株菌EC9.12抑制有限,該菌對這兩種抗生素呈中介反應(yīng)。實(shí)驗(yàn)中還設(shè)計了兩種選擇性平板對非O157型STEC進(jìn)行初步分離,發(fā)現(xiàn)非O157型STEC與O157型STEC菌落形態(tài)區(qū)別不大。本次實(shí)驗(yàn)從武漢市售食品中分離到4株O157:H7菌,這是首次從武漢市售食品中分離出產(chǎn)志賀毒素的O157型STEC,其中EC5.11是致病性很高的stx2c亞型,說明武漢市O157的毒力狀況發(fā)生了改變,存在感染和流行O157的潛在風(fēng)險,應(yīng)該引起足夠的重視。O45是發(fā)現(xiàn)最多的非O157型STEC,這與國外報道的有所不同。表明STEC在武漢市的分布狀況可能與歐美國家不同,需要對武漢市的非O157型STEC進(jìn)行更深入的研究,為武漢市STEC的防控提供更系統(tǒng)的數(shù)據(jù)。
【關(guān)鍵詞】：產(chǎn)志賀毒素大腸桿菌 Vero細(xì)胞毒性試驗(yàn) stx分型 分離鑒定 藥敏實(shí)驗(yàn)
【學(xué)位授予單位】：武漢輕工大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號】：R155.5
【目錄】：

• 摘要4-6
• ABSTRACT6-13
• 1 緒論13-23
• 1.1 STEC的生物學(xué)特性13-14
• 1.2 STEC的毒力因子14-16
• 1.2.1 志賀毒素14-15
• 1.2.2 緊密素及AE損傷15-16
• 1.2.3 腸溶血素16
• 1.2.4 凝集素16
• 1.3 STEC的分離鑒定方法16-20
• 1.3.1 富集培養(yǎng)16-17
• 1.3.2 STEC的平板分離17-18
• 1.3.3 STEC的PCR檢測方法18-19
• 1.3.4 STEC的免疫磁珠分離法19
• 1.3.5 Vero細(xì)胞毒性試驗(yàn)19-20
• 1.3.6 血清凝集試驗(yàn)20
• 1.4 STEC的污染現(xiàn)狀20-21
• 1.5 研究目的與意義21-23
• 2 實(shí)驗(yàn)材料和方法23-46
• 2.1 實(shí)驗(yàn)材料23-27
• 2.1.1 實(shí)驗(yàn)菌株23
• 2.1.2 主要試劑23-24
• 2.1.3 相關(guān)試劑的配制24-25
• 2.1.4 試驗(yàn)儀器與設(shè)備25-27
• 2.2 實(shí)驗(yàn)方法27-46
• 2.2.1 食品中STEC的分離篩選流程27-28
• 2.2.2 食品中O157的檢測28-30
• 2.2.3 非O157型STEC檢測30-31
• 2.2.4 O157單菌的分離31-32
• 2.2.5 非O157型STEC的分離32-33
• 2.2.6 O157分離株毒力因子鑒定33-35
• 2.2.7 Vero細(xì)胞毒性試驗(yàn)35-37
• 2.2.8 分離菌q基 因檢測37
• 2.2.9 分離菌stx基因亞型鑒定37-38
• 2.2.10 菌株EC5.11 stx2基因克隆測序38-41
• 2.2.11 藥物敏感性試驗(yàn)41-43
• 2.2.12 生物膜試驗(yàn)43
• 2.2.13 噬菌體試驗(yàn)43-45
• 2.2.14 培養(yǎng)基添加劑對非O157型STEC生長的影響45
• 2.2.15 選擇性培養(yǎng)基對STEC的篩選作用45-46
• 3 結(jié)果與分析46-68
• 3.1 食品中STEC的流行特點(diǎn)46-49
• 3.2 非O157型STEC的檢測及分離49-50
• 3.3 O157菌株的分離50-52
• 3.4 毒力因子檢測52-55
• 3.5 Vero細(xì)胞毒性試驗(yàn)55-57
• 3.6 q基因檢測57-58
• 3.7 stx亞型鑒定58-59
• 3.8 EC5.11 stx2基因的克隆59-61
• 3.9 EC5.11 stx2基因測序與分析61
• 3.10 藥物敏感性試驗(yàn)61-62
• 3.11 生物膜試驗(yàn)62-63
• 3.12 噬菌體的誘導(dǎo)63-64
• 3.13 添加劑對STEC的影響64-65
• 3.14 選擇性培養(yǎng)基對STEC的篩選結(jié)果65-68
• 4 結(jié)論68-70
• 參考文獻(xiàn)70-80
• 致謝80-81
• 攻讀學(xué)位期間的研究成果81

【相似文獻(xiàn)】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前1條

1 ;恒天立信公司-FONG’STEC系列多功能高溫染色機(jī)[J];染整技術(shù);2014年07期

中國碩士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫 前4條

1 鄭冬冬;武漢市部分菜場食品中產(chǎn)志賀毒素大腸桿菌的分布和生物學(xué)特征[D];武漢輕工大學(xué);2015年

2 白向?qū)?中國動物源性產(chǎn)志賀毒素大腸桿菌的分離及菌株特征分析[D];中國疾病預(yù)防控制中心;2013年

3 陳先亮;江蘇某地區(qū)部分牛場產(chǎn)志賀毒素大腸桿菌的分離鑒定及其遺傳相關(guān)性分析[D];揚(yáng)州大學(xué);2012年

4 徐婷婷;產(chǎn)志賀毒素大腸桿菌O26 LPS單克隆抗體的研制及單克隆抗體膠體金免疫層析方法的建立[D];揚(yáng)州大學(xué);2011年

  本文關(guān)鍵詞：武漢市部分菜場食品中產(chǎn)志賀毒素大腸桿菌的分布和生物學(xué)特征，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

本文編號：337785