本文關(guān)鍵詞：D-絲氨酸在鉛暴露致大鼠神經(jīng)損傷中的實(shí)驗(yàn)研究，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：目的本研究通過(guò)建立D-絲氨酸(D-Ser)干預(yù)的鉛暴露大鼠模型,觀察大鼠海馬組織中N-甲基-D-天冬氨酸(NMDA)受體表達(dá)、Ca2+濃度以及氨基酸類神經(jīng)遞質(zhì)含量等方面的變化,初步闡明D-Ser對(duì)大鼠學(xué)習(xí)記憶功能的影響機(jī)制。方法1實(shí)驗(yàn)動(dòng)物及分組:21天健康雄性SPF級(jí)SD大鼠60只,體重140-160g,適應(yīng)性喂養(yǎng)一周后隨機(jī)分為4組,分別為空白對(duì)照組(500mg/kg醋酸鈉)、鉛暴露組(500mg/kg醋酸鉛+隔日生理鹽水注射)、D-Ser低劑量組(500mg/kg醋酸鉛+隔日30mg/kg D-Ser腹腔注射)、D-Ser高劑量組(500mg/kg醋酸鉛+隔日60mg/kg D-Ser腹腔注射)。采用自由飲水方式連續(xù)染毒8周。2應(yīng)用Morris水迷宮進(jìn)行神經(jīng)行為學(xué)測(cè)試。3應(yīng)用電感耦合等離子體質(zhì)譜儀(ICP-MS)分析大鼠組織中鉛元素含量。4應(yīng)用流式細(xì)胞術(shù)分析大鼠海馬神經(jīng)細(xì)胞凋亡率、海馬細(xì)胞Ca2+濃度以及活性氧(ROS)含量。5應(yīng)用HE染色法觀察大鼠海馬組織病理改變;6應(yīng)用尼氏染色法觀察大鼠海馬神經(jīng)元細(xì)胞及結(jié)構(gòu)的變化。7應(yīng)用透射電鏡觀察海馬神經(jīng)元細(xì)胞結(jié)構(gòu)及形態(tài)的變化。8免疫組化方法觀察大鼠海馬組織中NR2A蛋白、NR2B蛋白表達(dá)的變化。9應(yīng)用實(shí)時(shí)熒光定量PCR方法測(cè)定海馬組織中NR2A蛋白、NR2B蛋白及絲氨酸消旋酶(Srr)m RNA表達(dá)變化。10高效液相色譜法測(cè)定海馬組織中4種氨基酸類神經(jīng)遞質(zhì)(谷氨酸Glu、絲氨酸Ser、甘氨酸Gly、γ-氨基丁酸GABA)含量的變化。11統(tǒng)計(jì)學(xué)分析實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)均采用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差(sx±)表示,各組間比較采用單因素方差分析(One Way ANOVA),兩兩比較采用LSD檢驗(yàn),以P0.05為差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。結(jié)果1實(shí)驗(yàn)大鼠的一般情況:在染毒期間,所有實(shí)驗(yàn)大鼠攝食和飲水量未見異常。飼養(yǎng)過(guò)程中,實(shí)驗(yàn)大鼠體重正常增長(zhǎng),各組體重增加變化無(wú)差異。2 D-Ser干預(yù)對(duì)鉛暴露大鼠學(xué)習(xí)記憶能力的影響:Morris水迷宮實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示,與對(duì)照組比較,鉛暴露組大鼠的逃逸潛伏期增長(zhǎng)(P0.05),穿臺(tái)次數(shù)下降(P0.05);與鉛暴露組比較,D-Ser低劑量組與D-Ser高劑量組大鼠的逃逸潛伏期降低(P0.05),穿臺(tái)次數(shù)增加(P0.05)。3 D-Ser干預(yù)對(duì)鉛暴露大鼠血液、海馬和皮質(zhì)中鉛含量變化的影響:與對(duì)照組比較,鉛暴露組大鼠海馬組織鉛含量是對(duì)照組大鼠海馬組織鉛含量的3.49倍;D-Ser低劑量組及D-Ser高劑量組大鼠海馬組織中鉛含量變化與鉛暴露組比較無(wú)差異(P0.05)。同樣,D-Ser低劑量組與D-Ser高劑量大鼠皮質(zhì)、血液中鉛含量變化趨勢(shì)與海馬中鉛含量變化趨勢(shì)相同。4 D-Ser干預(yù)對(duì)鉛暴露大鼠海馬組織細(xì)胞凋亡的影響:鉛暴露組大鼠海馬神經(jīng)細(xì)胞早期凋亡率、晚期凋亡率分別為25.40±4.44%、16.30±4.39%,高于對(duì)照組的16.70±5.79%、12.43±3.40%(P0.05)。D-Ser低劑量組大鼠海馬細(xì)胞早期凋亡率和晚期凋亡率分別為19.03±5.01%、11.02±2.55%,D-Ser高劑量組大鼠海馬細(xì)胞早期凋亡率和晚期凋亡率分別為18.93±3.83%、12.93±2.28%,與鉛暴露組比較顯著下降(P0.05)。5 D-Ser干預(yù)對(duì)鉛暴露大鼠海馬組織ROS含量的影響:鉛暴露組ROS含量顯著高于對(duì)照組(P0.05);D-Ser低劑量組、D-Ser高劑量組ROS含量與鉛暴露組比較無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。6 D-Ser干預(yù)對(duì)鉛暴露大鼠海馬細(xì)胞Ca2+濃度的影響:與對(duì)照組比較,鉛暴露組大鼠海馬細(xì)胞Ca2+濃度增加,是對(duì)照組的1.94倍(P0.05);D-Ser低劑量組、D-Ser高劑量組大鼠海馬細(xì)胞Ca2+濃度低于鉛暴露組,有顯著差異。7 D-Ser干預(yù)對(duì)鉛暴露大鼠海馬組織病理結(jié)構(gòu)的影響:光鏡下觀察可見,對(duì)照組大鼠海馬細(xì)胞完整,排列緊密規(guī)則;鉛暴露組大鼠海馬細(xì)胞排列紊亂,大量細(xì)胞死亡,表現(xiàn)為細(xì)胞核固縮、破裂。D-Ser低劑量組及D-Ser高劑量組大鼠海馬細(xì)胞排列稍有紊亂,但細(xì)胞形態(tài)基本正常。尼氏染色顯示對(duì)照組大鼠海馬神經(jīng)元細(xì)胞排列緊密、整齊,細(xì)胞結(jié)構(gòu)完整,細(xì)胞核核仁清晰。鉛暴露組大鼠神經(jīng)元細(xì)胞排列疏松、紊亂,部分細(xì)胞結(jié)構(gòu)不完整。D-Ser低劑量組及D-Ser高劑量組大鼠神經(jīng)元細(xì)胞排列稍有紊亂,少量細(xì)胞結(jié)構(gòu)不完整。透射電鏡結(jié)果顯示,對(duì)照組海馬神經(jīng)元細(xì)胞的細(xì)胞核飽滿,核膜光滑,染色質(zhì)分布均勻,髓鞘厚度和數(shù)量均正常。鉛暴露組海馬神經(jīng)元細(xì)胞的胞核皺縮、大量染色質(zhì)邊集;D-Ser低劑量組和D-Ser高劑量組海馬神經(jīng)元細(xì)胞有輕微的核皺縮和染色質(zhì)邊集現(xiàn)象。鉛暴露組、D-Ser低劑量組和D-Ser高劑量組海馬神經(jīng)元細(xì)胞均有不同程度的細(xì)胞器數(shù)量減少、線粒體腫脹、髓鞘厚度變薄等現(xiàn)象。8 D-Ser干預(yù)對(duì)鉛暴露大鼠海馬組織中NR2A和NR2B表達(dá)的影響:免疫組化結(jié)果顯示,鉛暴露組大鼠海馬組織中NR2A蛋白表達(dá)低于對(duì)照組(P0.05);與鉛暴露組比較,D-Ser高劑量組大鼠海馬組織中NR2A蛋白表達(dá)升高(P0.05)。鉛暴露大鼠海馬組織中NR2B蛋白表達(dá)變化與對(duì)照組比較無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。海馬組織中NR2A、NR2B及Srr m RNA表達(dá)的變化:與對(duì)照組比較,鉛暴露組大鼠海馬組織中NR2A和Srr m RNA表達(dá)下降(P0.05)。D-Ser高劑量組大鼠海馬組織中NR2A和Srr m RNA表達(dá)高于鉛暴露組(P0.05)。未見大鼠海馬組織中NR2B m RNA表達(dá)發(fā)生顯著性改變。9海馬組織中氨基酸類神經(jīng)遞質(zhì)含量的變化:與對(duì)照組比較,鉛暴露組大鼠海馬組織中Glu含量顯著升高(P0.05),為對(duì)照組Glu含量的1.26倍;與鉛暴露組比較,D-Ser低劑量組和D-Ser高劑量組大鼠海馬組織中Glu含量變化無(wú)差異。各組大鼠海馬組織中Ser、Gly和GABA含量比較無(wú)顯著差異。結(jié)論D-Ser通過(guò)降低海馬細(xì)胞凋亡率,降低海馬細(xì)胞中Ca2+濃度,并使NR2A蛋白和m RNA表達(dá)升高,從而對(duì)海馬神經(jīng)功能損傷起到一定的保護(hù)作用,緩解了鉛暴露所致的大鼠學(xué)習(xí)記憶能力損傷。
【關(guān)鍵詞】：鉛暴露 海馬 NMDA受體 D-絲氨酸 Ca2+ 神經(jīng)遞質(zhì)
【學(xué)位授予單位】：華北理工大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號(hào)】：R114
【目錄】：

• 摘要4-7
• Abstract7-12
• 英文縮略表12-13
• 引言13-15
• 第1章 D-絲氨酸在鉛暴露致大鼠神經(jīng)損傷中的實(shí)驗(yàn)研究15-41
• 1.1 材料與方法15-22
• 1.1.1 主要儀器與試劑15-16
• 1.1.2 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物分組與處理16
• 1.1.3 Morris水迷宮行為測(cè)試16-17
• 1.1.4 大鼠組織中鉛含量測(cè)定17
• 1.1.5 流式細(xì)胞術(shù)檢查海馬神經(jīng)細(xì)胞鈣離子濃度、ROS和凋亡狀況17-18
• 1.1.6 HE染色法觀察海馬組織病理變化18
• 1.1.7 尼氏染色法觀察海馬神經(jīng)元細(xì)胞變化18-19
• 1.1.8 使用透射電鏡觀察大鼠海馬神經(jīng)元細(xì)胞的變化19
• 1.1.9 免疫組化方法觀察海馬NR2A、NR2B蛋白表達(dá)變化19-20
• 1.1.10 海馬NR2A、NR2B、Srr mRNA表達(dá)變化20-21
• 1.1.11高效液相色譜法觀察海馬組織中氨基酸類神經(jīng)遞質(zhì)的變化21-22
• 1.1.12 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析22
• 1.2 實(shí)驗(yàn)結(jié)果22-33
• 1.2.1 D-Ser干預(yù)對(duì)鉛暴露大鼠飲水量和體重的影響22-23
• 1.2.2 D-Ser干預(yù)對(duì)鉛暴露大鼠學(xué)習(xí)記憶能力的影響23-24
• 1.2.3 D-Ser干預(yù)對(duì)鉛暴露大鼠組織中鉛含量的影響24
• 1.2.4 D-Ser干預(yù)對(duì)海馬細(xì)胞凋亡、活性氧以及鈣離子濃度的影響24-26
• 1.2.5 D-Ser干預(yù)鉛暴露大鼠海馬組織病理學(xué)觀察26
• 1.2.6 D-Ser干預(yù)對(duì)鉛暴露大鼠海馬神經(jīng)元細(xì)胞變化的影響26-27
• 1.2.7 透射電鏡觀察鉛暴露大鼠海馬細(xì)胞及細(xì)胞器的變化27-29
• 1.2.8 D-Ser干預(yù)對(duì)鉛暴露大鼠海馬NR2A蛋白表達(dá)的變化29-30
• 1.2.9 D-Ser干預(yù)對(duì)鉛暴露大鼠海馬NR2B蛋白表達(dá)的變化30-32
• 1.2.10 鉛暴露大鼠海馬NR2A、NR2B、Srr mRNA表達(dá)的變化32
• 1.2.11 D-Ser干預(yù)對(duì)鉛暴露大鼠海馬氨基酸類神經(jīng)遞質(zhì)含量的變化32-33
• 1.3 討論33-37
• 1.3.1 D-Ser干預(yù)對(duì)鉛暴露大鼠海馬細(xì)胞凋亡的影響34
• 1.3.2 D-Ser干預(yù)對(duì)鉛暴露大鼠海馬細(xì)胞鈣離子濃度的影響34-35
• 1.3.3 D-Ser干預(yù)對(duì)鉛暴露大鼠海馬細(xì)胞ROS含量的影響35
• 1.3.4 D-Ser干預(yù)對(duì)鉛暴露大鼠海馬組織中NMDA受體亞基的影響35-36
• 1.3.5 D-Ser干預(yù)對(duì)鉛暴露大鼠海馬組織中神經(jīng)遞質(zhì)的影響36-37
• 1.3.6 D-Ser干預(yù)對(duì)鉛暴露大鼠學(xué)習(xí)記憶能力的影響37
• 1.4 結(jié)論37-38
• 參考文獻(xiàn)38-41
• 第2章 綜述 NMDA受體亞基和與學(xué)習(xí)記憶的關(guān)系41-52
• 2.1 NMDA受體亞基結(jié)構(gòu)和組成41-42
• 2.2 NMDA受體的分布特點(diǎn)42-43
• 2.3 NMDA受體的調(diào)節(jié)機(jī)制43-45
• 2.4 NMDA受體與學(xué)習(xí)記憶45-47
• 2.5 NMDA受體與阿茲海默病47
• 參考文獻(xiàn)47-52
• 結(jié)論52-53
• 致謝53-54
• 導(dǎo)師簡(jiǎn)介54-55
• 作者簡(jiǎn)介55-56
• 學(xué)位論文數(shù)據(jù)集56

【參考文獻(xiàn)】

中國(guó)期刊全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前3條

1 林奕斌;趙同軍;展永;;N-甲基-D-天氡氨酸受體的分子結(jié)構(gòu)與生理功能[J];生物學(xué)雜志;2007年01期

2 趙華穎;章勁夫;;γ-氨基丁酸及其受體的研究進(jìn)展[J];中華臨床醫(yī)師雜志(電子版);2012年14期

3 Ying-Gang Yan;Jie Zhang;Shu-Jun Xu;Jian-Hong Luo;Shuang Qiu;Wei Wang;;Clustering of surface NMDA receptors is mainly mediated by the C-terminus of GluN2A in cultured rat hippocampal neurons[J];Neuroscience Bulletin;2014年04期

  本文關(guān)鍵詞：D-絲氨酸在鉛暴露致大鼠神經(jīng)損傷中的實(shí)驗(yàn)研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

本文編號(hào)：333390