本文關(guān)鍵詞：可視化抗體宏陣列技術(shù)對腸出血性大腸桿菌O157:H7及鮑氏志賀氏菌的同步定量檢測研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：隨著國家《食品中致病菌限量》標準的頒布，我國食源性致病菌的檢測將從原來的零檢出變成部分生鮮食物原料限量檢出，這也對目前快速檢測領(lǐng)域提出了新要求，現(xiàn)行國標方法的定量檢測均為平板計數(shù)，相對較為耗時費力，本研究旨在探索一種基于蛋白質(zhì)芯片的高通量快速定量檢測方法，為食源性致病菌檢測提供一條新思路。 本研究以免疫學(xué)中“雙抗體夾心”法原理為基礎(chǔ)，基于可視化抗體宏陣列技術(shù)，對腸出血性大腸桿菌O157:H7和鮑氏志賀氏菌完成同步快速定量檢測。 以微孔性質(zhì)的硝酸纖維素膜為載體基片，整個實驗過程均在此基片上完成。將目標細菌的特異性抗體以噴點的方式固定在基片表面，組成抗體陣列，用于檢測樣品中的目標細菌，，再加入HRP標記過的另一種特異性抗體，最后通過化學(xué)顯色方法確定實驗結(jié)果。之后通過成像、分析檢測點灰度值，制作標準曲線，推算樣品中致病菌的含量。 結(jié)果顯示，可視化抗體宏陣列對腸出血性大腸桿菌O157:H7和鮑氏志賀氏菌有很好的特異性識別作用，對這兩種細菌的檢測靈敏度分別達到了3.4×105CFU/mL和3.2×105CFU/mL，兩者相應(yīng)的標準曲線擬合的也較為理想，三次平行實驗的結(jié)果之間的變異系數(shù)遠小于一般ELISA實驗所要求的10%，充分說明了標準曲線的穩(wěn)定性和重現(xiàn)性。雙檢模擬增菌定量檢測的結(jié)果顯示，只有一個標準曲線推算結(jié)果與平板計數(shù)結(jié)果相差一個數(shù)量級，其余標準曲線推算的結(jié)果均與平板計數(shù)結(jié)果在同一數(shù)量級之上，從而論證了本研究的可行性。之后與傳統(tǒng)的ELISA以及PCR方法進行比較，在靈敏度上三者均一致，相比于后兩者，本研究耗時僅為2.5h，同時可實現(xiàn)定量檢測，在食源性致病菌快速定量檢測上取得了一定進展。
【關(guān)鍵詞】：可視化 抗體宏陣列 食源性致病菌 定量檢測 蛋白質(zhì)芯片
【學(xué)位授予單位】：甘肅農(nóng)業(yè)大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2014
【分類號】：R155.5
【目錄】：

• 摘要2-3
• ABSTRACT3-8
• 文獻綜述8-16
• 1. 前言16-17
• 2. 材料與方法17-25
• 2.1 主要材料與試劑17-18
• 2.2 主要儀器設(shè)備18-19
• 2.3 實驗方法19-25
• 2.3.1 標準菌懸液的制備19
• 2.3.2 O157Mab 與 SHBMab 的 HRP 標記19-20
• 2.3.3 可視化抗體宏陣列的構(gòu)建20-21
• 2.3.4 抗體宏陣列的“雙抗體夾心”法檢測21
• 2.3.5 O157Pab 與 SHBPab 最佳點樣濃度的選擇21-22
• 2.3.6 硝酸纖維素膜的選擇22
• 2.3.7 O157 抗體宏陣列的構(gòu)建22-23
• 2.3.8 SHB 抗體宏陣列的構(gòu)建23
• 2.3.9 O157 與 SHB 雙檢抗體宏陣列的構(gòu)建23-25
• 3. 結(jié)果與分析25-47
• 3.1 結(jié)果25-44
• 3.1.1 標準菌懸液的制備25
• 3.1.2 兩種 HRP 標記的單克隆抗體效價檢測結(jié)果25-26
• 3.1.3 兩種捕獲抗體最佳濃度的選擇26-27
• 3.1.4 抗體宏陣列基片的選擇27-28
• 3.1.5 腸出血性大腸桿菌 O157:H7 抗體宏陣列的構(gòu)建28-34
• 3.1.6 鮑氏志賀氏菌抗體宏陣列的構(gòu)建34-39
• 3.1.7 腸出血性大腸桿菌 O157:H7 與鮑氏志賀氏菌的同步檢測39-44
• 3.2 兩種傳統(tǒng)快速檢測方法對 O157 和 SHB 的靈敏度44-45
• 3.2.1 PCR 方法對 O157 和 SHB 的檢測靈敏度44-45
• 3.2.2 ELISA 方法對 O157 和 SHB 的檢測靈敏度45
• 3.3 分析45-47
• 3.3.1 抗體宏陣列基片的選擇45
• 3.3.2 標準曲線的擬合45-46
• 3.3.3 模擬增菌定量檢測46-47
• 4. 討論47-49
• 4.1 實驗部分47-48
• 4.2 小結(jié)48-49
• 5. 結(jié)論49-50
• 致謝50-51
• 參考文獻51-56
• 作者簡介56-57
• 導(dǎo)師簡介57-58

【參考文獻】

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  本文關(guān)鍵詞：可視化抗體宏陣列技術(shù)對腸出血性大腸桿菌O157:H7及鮑氏志賀氏菌的同步定量檢測研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

本文編號：305007