目的:三鄰甲苯基磷酸酯(Tri-ortho-cresyl phosphate,TOCP)在工業(yè)及日常生活上應用廣泛,TOCP對女性生殖系統(tǒng)有一定的損傷,但其作用機制尚不清楚。本文擬研究TOCP對小鼠卵巢和卵巢顆粒細胞的損傷及其可能機制,并初步探討茶多酚(Tea polyphenols,TP)對TOCP誘導的小鼠卵巢和卵巢顆粒細胞損傷是否具有保護作用及其可能機制。方法:用Western blot檢測TOCP及TP干預后TOCP對小鼠卵巢組織及卵巢顆粒細胞自噬的影響;用活性氧檢測試劑盒檢測TOCP及TP干預后TOCP對小鼠卵巢組織及卵巢顆粒細胞氧化應激的影響;用MTT法檢測TOCP及TP干預后TOCP對小鼠卵巢顆粒細胞活性的影響;用透射電子顯微鏡(Transmission electron microscopy,TEM)檢測TOCP及TP干預后TOCP對小鼠卵巢顆粒細胞自噬的影響。結果:用不同劑量的TOCP(0,100,200,400 mg/kg)給小鼠連續(xù)灌胃14天,結果顯示,TOCP可顯著增加小鼠卵巢組織中自噬蛋白LC3-II/LC3-I的比例以及Beclin1和Atg5表達量,表明TOCP可誘導小鼠卵巢組織自噬。同時,TOCP還可增加小鼠卵巢組織中MDA含量,降低GSH含量以及SOD和GSH-PX活性,表明TOCP可誘導小鼠卵巢組織產(chǎn)生氧化應激。而TP預處理可抑制TOCP對小鼠卵巢組織氧化應激和自噬的誘導。提示TP可通過抑制小鼠卵巢組織產(chǎn)生氧化應激,從而抑制小鼠卵巢組織自噬。用不同濃度TOCP(0,0.125,0.25,0.5 mM)處理原代培養(yǎng)的小鼠卵巢顆粒細胞48小時,MTT結果顯示,TOCP呈濃度依賴式地抑制小鼠卵巢顆粒細胞活性(P0.05);同時TOCP可顯著增加體外培養(yǎng)的小鼠卵巢顆粒細胞中自噬蛋白LC3-II/LC3-I的比例以及Beclin1和Atg5表達量,表明TOCP可誘導小鼠卵巢顆粒細胞自噬。TOCP可顯著增加小鼠卵巢顆粒細胞中MDA含量,降低GSH含量以及SOD和GSH-PX活性,表明TOCP可誘導小鼠卵巢顆粒細胞產(chǎn)生氧化應激。而TP預處理可挽救TOCP對小鼠卵巢顆粒細胞活性的抑制(P0.05);同時,TP預處理還可顯著抑制TOCP對小鼠卵巢顆粒細胞氧化應激。Western blot結果顯示,TP預處理可降低TOCP處理組中的LC3-II/LC3-I的比例以及Beclin1和Atg5表達量;TEM結果顯示,TOCP處理組的細胞中均出現(xiàn)大量的自噬泡,而TP預處理后可顯著減少TOCP處理組中細胞的自噬泡數(shù)量。提示TP可通過抑制細胞產(chǎn)生氧化應激,從而抑制TOCP誘導的小鼠卵巢顆粒細胞自噬。結論:TOCP可通過誘導小鼠卵巢組織及其顆粒細胞產(chǎn)生氧化應激而導致自噬并造成損傷;TP可通過抑制TOCP誘導的卵巢組織及其顆粒細胞產(chǎn)生氧化應激而抑制細胞自噬的發(fā)生,并對TOCP引起卵巢及其顆粒細胞的損傷起保護作用。
【學位單位】：南昌大學
【學位級別】：碩士
【學位年份】：2018
【中圖分類】：R114
【部分圖文】：

用不同劑量的 TOCP（0, 100, 200, 400 mg/kg）給小鼠連續(xù)灌胃給藥 14 d 后，用 Western Blot 檢測卵巢組織內(nèi) LC3、Atg5 和 Beclin1 的表達。實驗結果發(fā)現(xiàn)，TOCP 可使小鼠卵巢組織內(nèi) LC3-II/LC3-I 的比例以及 Atg5 和 Beclin1 的表達量顯著增加（圖 1），提示 TOCP 可誘導小鼠卵巢組織自噬。

第 3 章 結果制 GSH 含量；并且 TOCP 還顯著抑制小鼠卵巢組織內(nèi) GSH-PX 的活性（圖 2），提示 TOCP 可誘導小鼠卵巢組織產(chǎn)生氧化應激。

圖 3 TP 抑制 TOCP 誘導的小鼠卵巢組織氧化應激Fig.3. TP inhibits TOCP-induced oxidative stress in mouse ovarian tissue. Ovaries wereobtained from the mice treated with 0, 400 mg/kg/day TOCP and 400 mg/kg/day TOCP plus 100mg/kg/day for 14 days. Then the contents of MDA (A) and GSH (B) and the activities of SOD (C)and GSH-PX (D) were determined. Data were analyzed by one-way ANOVA. n=8, *P< 0.05 vsthe control group,＃P< 0.05 vs the TOCP-treated group.3.4 TP 抑制 TOCP 誘導的小鼠卵巢組織自噬用 0, 400 mg/kg TOCP 及 400 mg/kg TOCP+100 mg/kg TP 給小鼠連續(xù)灌胃給藥 14 d 后，用 Western Blot 檢測卵巢組織內(nèi) LC3、Atg5 和 Beclin1 的表達，實驗結果發(fā)現(xiàn)，與 TOCP 處理組相比，TP 預處理可使小鼠卵巢組織內(nèi) LC3-II/LC3-I的比例以及 Atg5 和 Beclin1 的表達量顯著降低（圖 4），提示 TP 可抑制 TOCP誘導的小鼠卵巢組織自噬。
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本文編號：2884288